高糖诱导滋养层细胞内质网应激及凋亡

目的探讨高糖对滋养层细胞系HTR-8内质网应激及凋亡的影响。方法用不同浓度的含糖培养基培养人滋养层细胞系HTR-8细胞24小时,实时定量PCR检测细胞中内质网应激相关分子CHOP、GRP78、ATF6、XBP-1 mRNA的表达水平;Western blot检测CHOP、GRP78蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞早期凋亡率。结果实时定量PCR结果显示,与正常血糖及渗透压对照组相比,高糖组CHOP及XBP-1 mRNA表达水平显著升高,GRP78 mRNA表达降低,ATF6表达无差异;Western blot检测显示,CHOP蛋白表达水平升高,GRP78蛋白表达水平降低;流式细胞术检测显示,高糖组细胞早期凋亡率增加。正常血糖组与渗透压对照组相比,CHOP、GRP78、ATF6、XBP-1 mRNA、蛋白表达水平及细胞早期凋亡率均无差异。结论高糖能激活滋养层细胞HTR-8内质网应激,并诱导细胞凋亡。

高糖抑制滋养层细胞表面微绒毛的形成及其机制

目的:探究高糖对滋养层细胞微绒毛形态的影响及分子机制。方法:透射电镜观察足月妊娠的糖尿病和正常血糖孕妇胎盘组织合体滋养层细胞表面微绒毛形态的改变;分别于静态及流体环境下培养人滋养层细胞系HTR8/SVeno 24 h,扫描电镜观察细胞表面微绒毛变化。扫描电镜观察单侧流体培养环境下高糖组(16.6 mmol/L葡萄糖)与对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)细胞表面微绒毛形态的变化;Western Blot检测流体环境下实验组和对照组细胞中ROCK2及P-Akt、P-Ezrin、P-PI3K、P-Confilin的蛋白表达水平。结果:娠糖尿病孕妇足月妊娠胎盘组织的滋养层细胞表面微绒毛较正常妊娠者短小、排列紊乱、稀疏。与静态培养相比,单侧流体培养滋养层细胞表面微绒毛长度增加(P<0.01)。流体环境下,实验组HTR8细胞表面微绒毛较对照组长度缩短(P<0.001)。实验组与对照组比较,HTR8细胞中Akt、Ezrin磷酸化水平下降(P<0.01,P<0.01),PI3Kp85磷酸化水平升高(P<0.001),ROCK2蛋白表达水平下降(P<0.05),Confilin磷酸化水平下降(P<0.01)。结论:单侧流体培养促进滋养层细胞表面微绒毛生长。高浓度的葡萄糖抑制HTR8/SVeno细胞表面微绒毛的生长。高浓度的葡萄糖对HTR8/SVeno细胞微绒毛的影响可能是通过调控Akt、PI3K和ROCK2相关信号通路、调节细胞骨架相关蛋白Ezrin、confilin及Factin的表达实现的。