人血浆LDL的分离纯化及兔抗人apoB-100抗体的制备

目的:为分离得到较高纯度的人血载脂蛋白B-100(apoB-100)及制备高效的兔抗人apoB-100抗体。方法:采用两步密度梯度离心分离人血浆得到LDL,产物经6%琼脂糖凝胶(Sepharose-6B)分子筛分离纯化后,再由透析浓缩获得纯化产物即apoB-100,同时用5%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳鉴定为一条带。用分离纯化得到的apoB-100与完全及不完全福氏佐剂混合,以此作为免疫原经4-3-2-2-1(周)免疫新西兰大白兔,随后心脏取血制备兔抗人apoB-100抗体。结论:分离纯化apoB-100浓度为1.4625mg/ml,制备的兔抗体经免疫双扩散测定其效价为1:32。