内皮素受体表达上调在冠状动脉痉挛中的作用机制

冠状动脉痉挛需要两个局部基本条件:(1)冠状动脉平滑肌高反应性,即冠状动脉对收缩物质刺激的敏感性增高,表现为收缩增强、甚至痉挛;(2)冠状动脉局部有足够可以引起平滑肌痉挛的收缩物质。内皮素1是人体内收缩血管最强的物质。研究证明,冠状动脉痉挛的危险因素(吸烟和高血脂)能激活ERK1/2信号通路,引起冠状动脉平滑肌细胞内皮素受体表达上调,从而导致血管对内皮素1刺激的敏感性和反应性明显增高,表现为收缩增强、甚至痉挛。本文综述了近年来有关内皮素受体表达上调与冠状动脉痉挛分子发病机制研究方面的新进展,为临床防治冠状动脉痉挛提供新思路和药物治疗新靶点。

家兔主动脉平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞增殖

为探讨血管平滑肌细胞自分泌和旁分泌对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 ,并制备平滑肌细胞条件培养基。采用孔径 10 0kDa和 10kDa的Millipore滤膜 ,将平滑肌细胞条件培养基分部。平滑肌细胞增殖测定采用宝灵曼试剂盒XTT法。结果提示 ,家兔血管平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,浓度 5 0 %的平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖率高达 45 % ,且该生长抑制活性物质具有剂量依赖、加热 5 6℃ 30min稳定和分子质量小于 10kDa的特点。

MAPK／NF—KB介导的内皮素受体上调在心脑血管疾病发病中的作用

心脑血管疾病是人类健康的第一杀手，其发病机制十分复杂，各种危险因素作用于血管壁，导致血管平滑肌细胞过度增殖，血管管壁增厚，管腔狭窄，特别是血管平滑肌收缩增强，甚至痉挛，是缺血性心脑血管疾病发生的重要环节之一。内皮素（ET）是迄今所知作用最强、持续最久的收缩血管活性多肽。ET。和ET。受体是收缩型受体，介导血管平滑肌细胞收缩和增殖。相反，ET受体是舒张型受体，介导血管平滑肌细胞舒张，并抑制血管平滑肌细胞增殖。我们的研究证明：①在自发性高血压大鼠、缺血性脑卒中和蛛网膜下腔出血大鼠动物模型中，血管平滑肌ET。受体表达上调；②在离体器官培养中，血管平滑肌细胞ET受体表达上调，使ET受体介导的血管收缩反应增高了数倍到百倍。这一现象模拟了在心脑血管疾病中血管平滑肌ET受体表达上调的病理环节；③心脑血管疾病危险因素（高血压、低密度脂蛋白和香烟尘粒）能够导致血管平滑肌细胞ETA和ETB2受体表达上调；④危险因素通过激活MAPK／NF—KB信号转导通路，使血管平滑肌细胞ET。和ET。受体mRNA和蛋白表达上调，导致血管敏感性显著增加，收缩明显增强；⑤抑制MAPK／NF—KB信号转导通路，可有效逆转危险因素诱导的ET和ET受体表达上调，改善血管敏感性，使血管对ET和ET受体介导的收缩反应降到正常水平；⑥细胞内MAPK／NF—KB信号转导通路介导的ET。和ET。：受体上调，是心脑血管疾病发病的重要分子病理机制之一和药物治疗新靶点。在MAPK／NF—KB信号转导通路的不同水平进行阻断，可以纠正ET和ETB2受体上调，改善血管敏感性增高，达到治疗心脑血管疾病的目的。从理论上讲，这一治疗策略是“治本”，要优于采用ET受体阻滞剂的治疗。

ERK1/2通路参与ET_A和ET_B受体介导的离体肠系膜上动脉收缩研究

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在内皮素1(ET-1)的两个G蛋白偶联受体ET_A和ET_B介导的收缩机制。方法用大鼠肠系膜上动脉器官培养模型,以敏感的离体药理学实验方法记录培养前后血管平滑肌张力,实时定量的PCR测定培养前后受体mRNA表达水平的变化。结果S6c不引起新鲜的肠系膜上动脉收缩,培养后ETB受体mRNA表达水平上调,介导的收缩明显增强(P<005);而ETA受体介导的收缩功能和mRNA均变化不大。低浓度的SB386023(10-5mol·L-1)降低S6c引起的最大收缩(Emax从239%±26%降至89%±13%,P<001),而对ET1引起的最大收缩并无影响(Emax271%±19%vs251%±16%,P>005);高浓度的SB386023(10-4mol·L-1)明显抑制ETA受体介导的收缩。结论ET-1通过ET_A受体介导新鲜动脉的收缩;动脉培养后表达ET_B受体;ERK1/2信号转导通路对ET_B受体的作用强于ET_A受体。

KDR反义寡核苷酸对人胃癌细胞的作用

目的 用 KDR反义寡核苷酸作用于人胃腺癌细胞 ,观察对细胞增殖及超微结构的影响 ,检测作用后 KDR基因的表达 ,并测定细胞分泌 VEGF的能力 .方法 MTT法测定细胞的增殖能力 ,电镜下观察细胞的超微结构 .原位杂交及免疫组化法检测 KDR m RNA及蛋白的表达 .ELISA法测细胞培养液中人 VEGF的含量 .结果 KDR ASODN可明显的抑制人胃腺癌细胞增殖 .增殖抑制率最高可达 55.4% .当剂量为 2 0μmol· L-1 时还可诱发细胞凋亡 .KDR ASODN能明显抑制细胞内 KDR m RNA和蛋白的表达 .胃癌细胞还能分泌一定量的人 VEGF:(92± 1 .7) ng· L-1 .结论 胃癌细胞能分泌一定量的人 VEGF.KDR ASODN能抑制细胞内 KDR基因的表达 ,并显著抑制胃癌细胞的增殖 .在一定剂量下还可诱发其凋亡 .说明 VEGF及受体 KDR在人胃腺癌细胞的增殖。

低硒、氧化应激及CVB感染在克山病发病机制中的作用

目的 研究低硒、氧化应激和柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusB ,CVB)感染在克山病发病中的作用。方法 检测了陕西省黄陵县 30例潜在型、慢型克山病患者血清CVB IgM抗体、硒水平、总抗氧化能力以及脂质过氧化物 (LipidPeroxide,LPO)。健康对照选自黄陵县克山病病区和非病区西安市。结果 ①克山病患者组CVB IgM阳性率显著高于病区和非病区健康组 ,分别为 43.3%vs 1 5 %和 43.3%vs 1 0 % ,P <0 .0 1 ;②克山病患者和病区健康居民血清硒水平和总抗氧化能力显著低于非病区西安人群 (P <0 .0 5 ) ,但克山病患者血清LPO水平显著高于两健康组 (P <0 .0 5 ) ;③克山病患者CVB IgM( + )者血清Se水平、总抗氧化能力显著低于CVB IgM( - )患者和病区健康组CVB IgM ( + )和CVB IgM ( - )者 (P <0 .0 5 ) ;克山病患者CVB IgM( + )血清LPO水平显著高于其他各组 (P <0 .0 5 )。结论 低硒。

ERK1/2通路参与大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞ET_B受体上调表达

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在血管平滑肌细胞内皮素-1 B型受体(ETB)上调中的作用。方法用大鼠肠系膜上动脉离体培养模型,以敏感的离体小血管张力描记技术记录血管张力变化,实时PCR定量ETB受体mRNA,PhosphoELISA法测定细胞内磷酸化的ERK1/2蛋白水平。结果大鼠肠系膜上动脉培养3 h,细胞内ERK1/2蛋白磷酸化水平明显增高,培养24 h ETB受体mRNA表达水平显著上调,选择性ETB受体激动剂蛇毒类似物(sarafotoxin 6 c,S6 c)引起的收缩增强;与特异性ERK1/2通路阻滞剂SB386023共同孵育24 h,S6 c引起的最大收缩Em ax明显下降,ETB受体mRNA水平也显著降低。结论ERK1/2信号转导通路参与大鼠肠系膜上动脉离体平滑肌细胞ETB受体上调过程。

香烟尘粒对血管平滑肌细胞增殖的作用

为探讨香烟尘粒对血管平滑肌细胞是否有促增殖作用及其作用机制 ,以兔主动脉平滑肌细胞为实验对象 ,选用细胞存活率 >90 %的小剂量 (1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0 )香烟尘粒 ,分别加入培养基中 ,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、流式细胞仪分析、细胞蛋白测定和放射免疫法观察香烟尘粒对血管平滑肌细胞增殖及内皮素 1分泌的影响。结果发现 ,与对照组 (不加香烟尘粒组 )相比 ,1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0香烟尘粒组细胞蛋白吸光度值无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;1∶10 0 0和 2∶10 0 0香烟尘粒组血管平滑肌细胞增殖明显 (P <0 .0 1) ;流式细胞仪分析结果显示 ,2∶10 0 0香烟尘粒组G1 期细胞数明显减少 (P <0 .0 5 ) ,S期细胞数显著增多 (P <0 .0 1)。 1∶10 0 0、2∶10 0 0和 3∶10 0 0香烟尘粒组培养基中内皮素 1含量均显著增高 ,尤以 2∶10 0 0组增高最明显 (P <0 .0 1)。结果表明 ,1∶10 0 0和 2∶10 0 0香烟尘粒有促进血管平滑肌细胞增殖的作用 ,其促增殖作用可能与内皮素

MicroRNA-25在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡过程中的作用

目的在体外培养的SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,观察microRNA-25(miR-25)对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的细胞凋亡的作用及其可能机制。方法在体外培养的人SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,用氧葡萄糖剥夺/再恢复(OGDR)模拟脑缺血/再灌注损伤。合成miR-25过表达片段,并构建慢病毒载体质粒,用脂质体将载体质粒转导入细胞中。MTT法检测细胞活力、TUNEL法检测凋亡、RT-PCR、Real-time PCR和Western blotting分别检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常培养组相比,OGDR组中细胞内miR-25表达下调,细胞活力明显下降,凋亡明显增多,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(n=3,P <0. 05);而与OGDR组相比,过表达miR-25组内细胞活力明显升高,凋亡明显减少,同时Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达下降Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(n=3,P <0. 05)。结论 I/R损伤后miR-25表达上调可能通过Bax/Bcl-2-Caspase-3途径进而抑制I/R损伤诱导的凋亡,为I/R损伤的临床治疗提供潜在的治疗靶点。

潜慢型克山病患者柯萨奇B组病毒特异性IgM的检测

目的研究柯萨奇Ｂ组病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ，ＣＶＢ）感染与克山病发病的关系。方法采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对陕西省黄陵县克山病病区潜、慢型克山病患者血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ和ＣＶＢ１－６ＩｇＧ进行检测。结果①潜在型、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（２８．５７％ｖｓ７．５％，Ｐ＜０．０５），但明显低于心肌炎组（６０．００％，Ｐ＜０．０５）。②潜、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＧ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（３８．１０％ｖｓ７．５％，Ｐ＜０．０５），但与心肌炎组比较无明显差异。结论病区潜。

硒、VE对高脂血症家兔血管活性物质的影响

目的 观察硒和VE对高脂饲料诱发家兔As模型血液中血管活性物质的影响作用 ,探讨硒和VE抗As形成的作用机制 ,为临床应用硒和VE防治As提供理论依据和实验资料。方法 采用高脂饲料诱发家兔形成As,同时分别给予硒、VE、硒和VE灌胃。第 8周末检测血中TC、NO、ET 1、TXA2 水平。结果 ①高脂血症可导致家兔血中NO浓度降低 ,ET 1水平升高、TXA2 /PGI2 比值增高 ,提示高脂血症与内皮细胞受损、功能紊乱有密切的关系 ;②抗氧化剂VE和Se具有调脂和保护内皮细胞功能的作用 ,使血中胆固醇浓度下降 ,NO浓度升高 ,ET 1和TXA2 水平明显降低 ;③VE和Se联合使用在调脂和保护内皮细胞功能方面的效果好于两者单独应用。结论 硒和VE抗As的机制 ,可能是通过保护高脂血症所致的内皮受损和功能紊乱而发挥作用。

潜在型及慢型克山病患者血清一氧化氮水平检测分析

目的 探讨一氧化氮 ( Nitric Oxide,NO)和克山病病变间的关系。方法 检测了陕西省黄陵县 30例潜在型、慢型克山病患者血清硒含量和 NO水平。健康对照分别选自黄陵县克山病病区和西安市非病区。结果 1克山病患者组与病区健康对照组血清硒水平显著低于非病区健康对照组 ( P <0 .0 5 ) ;克山病患者组与病区健康对照组血清硒水平相比差异无显著意义 ( P >0 .0 5 )。 2克山病患者血清 NO水平显著高于病区健康对照组( P <0 .0 5 ) ;但克山病患者组与非病区健康对照组之间相比差异无显著意义 ( P >0 .0 5 )。 3心功能不全 级到 级的克山病患者血清 NO水平随心衰程度的加重而升高 ,当心功能不全达 级时 ,血清 NO水平下降。结论 NO在克山病患者心肌损伤和心力衰竭的发生和发展中起一定作用。

阿托品对大鼠肠系膜动脉的舒张作用及机制

目的 研究阿托品的扩血管作用及机制。方法 以大鼠肠系膜动脉为标本,考察阿托品对去甲肾上腺素(NE)预收缩血管的舒张作用以及血管内皮细胞、血管平滑肌在该效应中的作用。结果 阿托品能显著舒张NE预收缩的完整内皮血管,去内皮后该作用明显降低。L Nω硝基精氨酸甲酯、吲哚美辛、普萘洛尔及格列本脲对阿托品的舒张作用无明显影响。阿托品对KCl的量效曲线及咖啡因缩血管作用均无明显影响,但能浓度依赖性地抑制NE诱导的内钙释放以及经受体操纵性钙通道的外钙内流。结论 阿托品有明显的扩血管作用,其通过抑制受体介导的外钙内流和内钙释放而舒张血管。

香烟尘粒对人脐静脉内皮EA.hy926细胞的损伤作用

目的 :选用人脐静脉内皮EA .hy 92 6细胞株作为研究对象 ,观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒 (DSP)对人脐静脉内皮EA .hy 92 6细胞生长的影响。方法 :以 (1、2、4、8)mL/L剂量DSP作量效实验 ,小剂量DSP(2mL/L)作时效实验 ,采用MTT比色法和 96孔板细胞蛋白测定方法来评价DSP对该细胞株增殖和活性的影响。透射电镜(TEM)观察不同处理因素作用后细胞超微结构变化。结果 :DSP能抑制人脐静脉内皮EA .hy 92 6细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,且对该细胞株具有明显毒性 ,它能减少细胞蛋白合成 (P <0 0 5 )、增加细胞死亡 (主要为坏死 ) ,作用呈剂量和时间依赖。结论 :DSP能损伤血管内皮细胞 (VEC)。

Infusa Sleeve导管血管内局部给药的实验研究

目的：评价ＩｎｆｕｓａＳｌｅｅｖｅ（ＩＳ）导管局部给药的可行性。方法：１３只家兔随机分成Ａ组（ｎ＝８）和Ｂ组（ｎ＝５），给药压力分别为６０７．９ｋＰａ（６个标准大气压）（Ａ组）和２０２．６ｋＰａ（２个标准大气压）（Ｂ组），用标准血管成形导管损伤腹主动脉下端后，经ＩＳ导管向腹主动脉下端球囊损伤处局部注入１ｍｌ放射性同位素锝标记的甲氧基异丁基异腈（９９ｍＴｃ－ＭＩＢＩ）注射液。术后３０分钟、６小时、２４小时分别处死动物后，取两组动物靶点血管（腹主动脉下端）、心、肝、骨骼肌、小肠、血液、非靶点血管（肺动脉）组织，用γ计数仪计数后称组织重量。结果：Ａ组和Ｂ组给药后３０分钟靶点血管局部的放射强度分别占给药总量的４９．２５０％和２２．０００％、分别是血液的４５倍和８倍、是非靶点血管的７０倍和１２倍。靶点血管局部放射强度Ａ组大于Ｂ组（Ｐ＜０．０５）。６小时和２４小时后靶点血管局部放射强度占给药总量的０．３４３％（Ａ组）和０．２５５％（Ａ组）。结论：ＩＳ导管可经血管局部靶向给药。ＩＳ导管局部导入的药物浓度呈压力依赖性。

家兔颈动脉内支架置入后细胞凋亡的动态观察

目的 观察兔颈动脉内支架置入后细胞凋亡的动态变化 ,探讨细胞凋亡在再狭窄形成中的作用。方法 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)及透射电镜 ,检测兔颈动脉内支架置入后 7、1 4、30、90d的细胞凋亡。结果 支架术后 7、1 4d未观察到平滑肌细胞凋亡 ,术后 30d在新生内膜中观察到明显的细胞凋亡 ,90d时单位面积内凋亡细胞数显著高于 30d〔(4 .5 0± 1 .2 9)vs (1 3.5 0± 1 .91 )个 /0 .1mm2 ,P <0 .0 0 1〕。透射电镜下凋亡细胞表现为胞浆浓缩 ,染色质浓缩成团 ,边聚于核膜形成新月体。结论 细胞凋亡是支架置入后再狭窄形成中一个重要的病理学特征 ,在后期明显增多 ,调节着新生内膜中平滑肌细胞的数量。

支架置入兔颈动脉后平滑肌细胞增殖及c-myc基因的表达

目的观察兔颈动脉内支架置入后,血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖及c-myc原癌基因的表达。方法将国产铂-铱合金支架置入16只家兔颈动脉,术后7、14、30和90d处死动物,行苏木素伊红(HE)和Masson三色染色、c-myc蛋白免疫组化染色及原位杂交。用透射电镜观察术后14d,VSMC超微结构的变化。结果术后7d,中膜VSMC由收缩型变为合成型,内弹力板消失,偶见炎性细胞浸润,1例血管腔内出现不完全血栓形成。术后14d,新生内膜增生明显,主要由合成型及过渡型VSMC组成。术后30d,新生内膜增生更加明显,主要为收缩型和少量过渡型VSMC及细胞外基质组成。术后90d,内弹力板恢复为弯曲的连续状,其上附着多层内皮细胞,VSMC为收缩型。术后14d透射电镜显示,合成型VSMC呈圆形或椭圆形,粗面内质网及线粒体非常丰富。支架置入后,兔颈动脉新生内膜中c-myc蛋白免疫组化及原位杂交均呈阳性,正常对照血管呈阴性。结论兔颈动脉内置入支架后,可引起VSMC中c-myc基因表达增强,其与VSMC的增殖密切相关,在支架内再狭窄的形成中发挥重要作用。

血管活性物质与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ａｓ）是当前危害人类健康最严重的疾病之一，一氧化氮、内皮素、前列环素和血栓素四种血管活性物质，在动脉粥样硬化的发生和发展过程中起重要作用．

1-磷酸鞘氨醇在人胃癌细胞与血管内皮细胞增殖中的作用

目的 1 磷酸鞘氨醇是新发现的细胞外递质和细胞内第二信使。研究它在人胃癌细胞与血管内皮细胞的增殖及凋亡调控中的作用。方法 光镜观察二甲基鞘氨醇作用前后的细胞形态 ;MTT法检测细胞的增殖能力 ;电镜观察细胞的超微结构及有无凋亡发生。结果 ①抑制 1 磷酸鞘氨醇生成后 ,胃癌细胞与血管内皮细胞形态发生明显变化。②二甲基鞘氨醇几乎可以完全抑制两种细胞的增殖。③一定剂量时可诱导两细胞凋亡。结论 1 磷酸鞘氨醇在人胃癌细胞与血管内皮细胞的形态、增殖和凋亡的调控中起重要作用。

银胶菊内酯减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的PC12细胞损伤

目的探讨银胶菊内酯(PTN)对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的神经保护作用及可能机制。方法将培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞分为对照组、氧-糖剥夺-再灌注(OGD/R)组及PTN预处理组(1、5、10和20μmol/L,各组n=3)。CCK-8法检测细胞活力;酶活性检测试剂盒检测caspase-3、过氧化氢(H2O2)酶、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性及乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS);Western blot检测Bcl-2、Bax、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达。结果与对照组相比,OGD/R组PC12细胞活力、LDH和ROS含量、Bcl-2表达水平、Akt和GSK-3β的磷酸化水平及H2O2酶、SOD和GPx的活性均明显下降(P<0.05);ROS含量、Bax-1表达量和caspase-3活性均明显升高(P<0.05);与OGD/R组相比,PTN预处理能显著缓解以上变化(P<0.05)。结论 PTN可以作为一种潜在的治疗脑I/R损伤的药物。