全反式维A酸对缺氧性肾小管上皮细胞Prohibitin1和Prohibitin2表达的影响

目的探讨全反式维A酸（ATRA）对缺氧性。肾小管上皮细胞（RTEC）Prohibitinl（PHBl）和Pro—hibitin2（PHB2）表达的影响。方法购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E，采用混有胎牛血清和双抗的培养基（100mL培养基中加5mL胎牛血清和1mL双抗）在37℃、50mL／L二氧化碳的培养箱中培养。传代3次后分为正常组、模型组和ATRA干预组。正常组细胞不做任何处理，模型组细胞置于真空罐中，负压吸引器吸尽残余空气，充入缺氧气体（950n，L／L氮气和50mL／L二氧化碳）密封建立缺氧性RTEC损伤模型，ATRA干预组细胞中加入0．1μmol／LATRA后参照模型组的方法进行缺氧。于缺氧24h、36h采用实时荧光定量PCR法测定各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1（TGF-β1）的mRNA表达，Westernblot法检测各组NRK-2E细胞PHB1、PHB2、TGF-β1的蛋白表达。结果1．与正常组比较，模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-2E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降（P均〈0．05），缺氧时间越长，表达量越低；与模型组比较，ATRA干预组2个时间点NRK一52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升（P均〈0．05）。2．与正常组比较，模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升（P均〈0．05），缺氧时间越长，表达量越高；与模型组比较，ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降（P均〈0．05）。结论ATRA可显著增强缺氧性RTEC中PHB1和PHB2蛋白表达量及其mRNA表达量，可能对缺氧性RTEC有保护作用。

Prohibitin1和Prohibitin2在缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用

目的探讨Prohibitn1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达和作用。方法以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为对象,NRK-52E细胞置于50 mL.L-1二氧化碳(CO2),37℃培养箱中孵育至80%,传代后随机分为正常组和模型组。正常组细胞继续培养,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器抽尽残余空气,充以配好的缺氧气体(950 mL.L-1氮气和50 mL.L-1CO2)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,分别于造模第12、24、36小时采用实时荧光定量PCR检测PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达,Western blot检测PHB1、PHB2蛋白表达。结果 1.与正常组比较,模型组各时间点NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及其mRNA表达均降低(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越低;NRK-52E细胞的TGF-β1 mRNA表达均增高(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越高。2.相关性分析:模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA表达与TGF-β1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.97、-0.99,Pa<0.05)。结论缺氧所致NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及mRNA表达均降低,缺氧时间越长,表达量越低,NRK-52E细胞损伤越重。PHB1、PHB2可能参与RTEC损伤的发生发展。

Prohibitin基因转染对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨转染外源性Prohibitin(PHB)基因对体外培养的肾小管上皮细胞株(NRK-52E)表型转化的影响。方法将构建的pcDNA3.1(+)-PHB1、pcDNA3.1(+)-PHB2质粒转染体外培养的NRK-52E细胞作为转染组,以空载体转染NRK-52E细胞为阴性对照组,以正常NRK-52E细胞为空白对照组,分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染24 h、48 h、72 h各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白表达。结果 1.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA及其蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组增高(Pa<0.05),且48 h表达量最高,而阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义。2.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞α-SMA mRNA和蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组降低(Pa<0.05),48 h表达量最低,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义。3.转染组48 h NRK-52E细胞PHB1、PHB2蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量均呈负相关(r=-0.942、-0.869,Pa<0.05)。结论转染外源性PHB基因可以抑制体外培养的NRK-52E细胞的表型转化。