X射线对胃癌细胞和人脐静脉内皮细胞LOX家族成员的不同影响

目的比较不同剂量X射线对人低分化粘液样胃腺癌细胞MGC-803和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员的影响,为了解X射线辐射后不同细胞中基因和蛋白的改变提供依据。方法0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线辐射MGC-803和HUVEC细胞,用细胞增殖实验检测细胞致死率并计算细胞半数致死量(LD 50),确定后序测试剂量组;Realtime PCR、Western blot、ELISA及Amplex Red过氧化氢法分别检测辐射后细胞LOX家族成员mRNA丰度、蛋白相对量、分泌量及LOX酶活性变化;Western blot方法分析X射线辐射对细胞p-p38MAPK和p-Erk1/2MAPK影响。结果X射线辐射后的LD 50胃癌MGC-803为8.2 Gy,HUVEC为6 Gy,后序试验选用0、2、4和6 Gy剂量组。MGC-803细胞经各剂量X射线辐射后LOXL1、LOXL2和LOXL4的mRNA均下调,而LOX的mRNA上调(P<0.05);2 Gy组LOX和LOXL4的蛋白和酶分泌水平低于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL2和LOXL4的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);6 Gy组LOXL1的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);但LOXL3的mRNA、蛋白和分泌在2 Gy组均高于0 Gy组(P<0.05)。HUVEC中,2 Gy组LOXL1和LOXL3的mRNA、蛋白和酶分泌水平均显著高于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL3和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05);6 Gy组LOXL2和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05)。2 Gy和6 Gy组HUVEC的LOX酶活性增强(P<0.05)。MGC-803细胞的2 Gy和6 Gy组p-p38、p-p42、p-p44较0 Gy组上调(P<0.05);HUVEC经各剂量辐射p-p38、p-p42和p-p44均上调(P<0.05)。结论X射线辐射对两种细胞作用不同,一定剂量X射线辐射上调HUVEC的LOX及其家族成员的产生、分泌和酶活性,下调胃癌细胞MGC-803的除LOXL3外其他成员的产生和分泌。

VEGF/VEGFR2促进人胃癌组织微血管生成的研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)在胃癌不同阶段组织中的表达及其与胃癌微血管生成的关系。方法收集了49例患者经手术切除、病理证实的胃癌组织和癌旁组织。49例患者中,有转移癌39例,无转移癌10例;T1T2期8例,T3期20例,T4期21例。应用CD34标记法观测胃癌组织中所含微血管密度,免疫组织化学法检测VEGF分布和表达,Western-blot法检测组织中VEGF、VEGFR-2的水平。结果胃癌组织样本中的微血管密度高于胃癌邻近的组织样本,胃癌组织样本中有转移的高于无转移的胃癌组织样本,T4期胃癌组织高于T1T2期表示早期和T3期(P<0.05)。免疫组化结果表明,VEGF在胃癌组织样本中的表达显著高于癌旁胃组织样本(P<0.05)。Western-blot结果显示在胃癌组织样本中VEGF和VEGFR-2表达高于胃癌邻近的组织样本(P<0.05),有转移胃癌组织样本高于无转移胃癌组织样本(P<0.05),其中VEGF表达量在T4期胃癌组织中高于T1T2期和T3期(P<0.05)。胃癌组织中VEGF、VEGFR-2的相对表达水平与微血管密度呈正相关(P<0.05)。结论微血管密度在有转移和浸润较深的癌组织中明显较高。VEGF、VEGFR-2可通过促进微血管生成从而促进胃癌的转移和浸润。