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3C样蛋白酶:重要抗PEDV药物的筛选靶标
1
作者
刘怡炜
包淋斌
+5 位作者
徐像文
孙静
杨杨
杨永春
苏明俊
宋厚辉
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期105-111,共7页
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员。由于冠状病毒的RNA酶缺乏校正功能,PEDV等冠状病毒...
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员。由于冠状病毒的RNA酶缺乏校正功能,PEDV等冠状病毒的基因组易发生变异。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
冠状病毒科
PEDV
冠状病毒属
校正功能
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职称材料
单增李斯特菌PTS系统转运蛋白IIB^(man)介导运动性和感染的功能研究
2
作者
张佳雪
陈绵绵
+7 位作者
程丽丽
任耿佳
徐像文
鲁珂蓥
庄楠茜
孙静
宋厚辉
程昌勇
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期1179-1187,共9页
为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIB^(man)在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiB^(man)基因的上下游基因片段(不包含iiB^(man)基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-...
为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIB^(man)在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiB^(man)基因的上下游基因片段(不包含iiB^(man)基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-e基因组为模板,采用PCR扩增iiB^(man)基因与启动子片段,插入质粒pIMK2以构建回补质粒,经PCR和测序鉴定后,将缺失质粒转化LM EGD-e感受态细胞,通过氯霉素抗性及42℃压力下使重组质粒与LM EGD-e株的同源片段发生同源重组单交换获得一代同源重组菌株,然后在无抗性培养基中30℃培养使质粒丢失,获得缺失株ΔiiB^(man)。将回补质粒转化ΔiiB^(man)感受态细胞中,通过卡那霉素抗性筛选获得回补株CΔiiB^(man),缺失株和回补株均经PCR和测序鉴定。37℃培养EGD-e、ΔiiB^(man)、CΔiiB^(man)12 h,期间每隔1 h测定OD_(600nm)并绘制生长曲线,分析各菌株生长特性,结果显示,各菌株体外生长趋势相似。将各菌株菌液接种于TSA半固体培养基,培养至24 h和48 h时检测细菌运动圈大小,结果显示ΔiiB^(man)的运动圈直径分别是EGD-e的1.5及1.6倍(P<0.05、P<0.01),CΔiiB^(man)与EGD-e运动圈直径均基本一致。在各菌株培养上清中加入绵羊血,检测各菌株溶血能力,结果显示,ΔiiB^(man)的溶血能力较EGD-e及CΔiiB^(man)增强。将各菌株以MOI 20感染RAW264.7细胞,在感染后2 h、5 h和8 h收集细胞进行点样计数,结果显示,在感染后2 h和5 h时ΔiiB^(man)的胞内增殖能力较EGD-e及CΔiiB^(man)显著增强(P<0.05)。将各菌株以2×10^(5)cfu/只经腹腔注射感染小鼠48 h后剖杀,取肝脏和脾脏研磨并点样计数,结果显示,ΔiiB^(man)在小鼠脏器载菌量较EGD-e及CΔiiB^(man)极显著增多(P<0.001)。上述结果首次表明IIB^(man)不影响LM的生长,但影响LM的运动性及提高LM的体外溶血活性;IIB^(man)参与LM的胞内增殖和宿主脏器定植。本研究为了解LM PTS系统所介导的细菌体外环境适应及宿主感染的分子机制,以及LM感染的防控奠定了基础。
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关键词
单增李斯特菌
磷酸转移酶系统
IIB^(man)转运蛋白
运动性
感染
下载PDF
职称材料
题名
3C样蛋白酶:重要抗PEDV药物的筛选靶标
1
作者
刘怡炜
包淋斌
徐像文
孙静
杨杨
杨永春
苏明俊
宋厚辉
机构
浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室
广昌县农业农村局
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期105-111,共7页
基金
浙江省重点研发计划项目(2019C02052)
浙江农林大学人才启动项目(118-203402005901)。
文摘
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)成员。由于冠状病毒的RNA酶缺乏校正功能,PEDV等冠状病毒的基因组易发生变异。
关键词
猪流行性腹泻病毒
冠状病毒科
PEDV
冠状病毒属
校正功能
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
单增李斯特菌PTS系统转运蛋白IIB^(man)介导运动性和感染的功能研究
2
作者
张佳雪
陈绵绵
程丽丽
任耿佳
徐像文
鲁珂蓥
庄楠茜
孙静
宋厚辉
程昌勇
机构
浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室
台州市椒江区农业农村和水利局
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期1179-1187,共9页
基金
浙江省自然科学基金(LQ20C180001、LY23C180002)
国家自然科学基金(32002253、31972648、31872620)
+1 种基金
浙江农林大学创新训练项目(S202210341103)
浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(2023R412020)。
文摘
为探究单增李斯特菌(LM)磷酸转移酶系统(PTS)转运蛋白IIB^(man)在LM生长、运动性及其生物学功能,本研究以LM EGD-e株基因组为模板,经PCR扩增iiB^(man)基因的上下游基因片段(不包含iiB^(man)基因),插入质粒pKSV7以构建缺失质粒;以LM EGD-e基因组为模板,采用PCR扩增iiB^(man)基因与启动子片段,插入质粒pIMK2以构建回补质粒,经PCR和测序鉴定后,将缺失质粒转化LM EGD-e感受态细胞,通过氯霉素抗性及42℃压力下使重组质粒与LM EGD-e株的同源片段发生同源重组单交换获得一代同源重组菌株,然后在无抗性培养基中30℃培养使质粒丢失,获得缺失株ΔiiB^(man)。将回补质粒转化ΔiiB^(man)感受态细胞中,通过卡那霉素抗性筛选获得回补株CΔiiB^(man),缺失株和回补株均经PCR和测序鉴定。37℃培养EGD-e、ΔiiB^(man)、CΔiiB^(man)12 h,期间每隔1 h测定OD_(600nm)并绘制生长曲线,分析各菌株生长特性,结果显示,各菌株体外生长趋势相似。将各菌株菌液接种于TSA半固体培养基,培养至24 h和48 h时检测细菌运动圈大小,结果显示ΔiiB^(man)的运动圈直径分别是EGD-e的1.5及1.6倍(P<0.05、P<0.01),CΔiiB^(man)与EGD-e运动圈直径均基本一致。在各菌株培养上清中加入绵羊血,检测各菌株溶血能力,结果显示,ΔiiB^(man)的溶血能力较EGD-e及CΔiiB^(man)增强。将各菌株以MOI 20感染RAW264.7细胞,在感染后2 h、5 h和8 h收集细胞进行点样计数,结果显示,在感染后2 h和5 h时ΔiiB^(man)的胞内增殖能力较EGD-e及CΔiiB^(man)显著增强(P<0.05)。将各菌株以2×10^(5)cfu/只经腹腔注射感染小鼠48 h后剖杀,取肝脏和脾脏研磨并点样计数,结果显示,ΔiiB^(man)在小鼠脏器载菌量较EGD-e及CΔiiB^(man)极显著增多(P<0.001)。上述结果首次表明IIB^(man)不影响LM的生长,但影响LM的运动性及提高LM的体外溶血活性;IIB^(man)参与LM的胞内增殖和宿主脏器定植。本研究为了解LM PTS系统所介导的细菌体外环境适应及宿主感染的分子机制,以及LM感染的防控奠定了基础。
关键词
单增李斯特菌
磷酸转移酶系统
IIB^(man)转运蛋白
运动性
感染
Keywords
Listeria monocytogenes
phosphotransferase system(PTS)
iiB^(man) transporter protein
motility
infection
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
3C样蛋白酶:重要抗PEDV药物的筛选靶标
刘怡炜
包淋斌
徐像文
孙静
杨杨
杨永春
苏明俊
宋厚辉
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
单增李斯特菌PTS系统转运蛋白IIB^(man)介导运动性和感染的功能研究
张佳雪
陈绵绵
程丽丽
任耿佳
徐像文
鲁珂蓥
庄楠茜
孙静
宋厚辉
程昌勇
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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