小鼠MSCs分离体外扩增及向神经样细胞诱导分化的研究

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)的分离、体外扩增及向神经样细胞分化的潜能。方法:取 8-9周小鼠骨髓悬浮至全培养基中,接种于纤连蛋白覆盖的培养器皿中,纯化并扩增mMSCs;检测第9-10代细 胞的生长状态、细胞周期、表型,并进行光镜形态学观察;用二甲基亚砜和丁羟茴醚诱导细胞分化,免疫荧光法检测 其诱导分化前后神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果:mMSCs为贴壁细胞,表现为成纤维细胞 样,具有梭形、多角形等形态,传至15代仍可维持其形态特征;83%的细胞处于G0/G1期;mMSCs不表达CD45而 表达CD44、CD13,与人MSCs表型一致;诱导分化后,大部分细胞变成双极、多极和锥形,并相互交织成网状结构, 呈现神经细胞和神经干细胞表型。结论:mMSCs可被成功分离及体外扩增培养,并具有同人类MSCs相同的形 态、表型、生长特征和向神经样细胞分化的潜力,是研究细胞及基因治疗小鼠病理模型的良好工具细胞。

大鼠海马脑片星形胶质细胞与NG2胶质细胞形态学及电生理特性比较

目的:比较研究大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2胶质细胞(以下简称NG2细胞)的形态学特点和电生理特性,为区别这两种胶质细胞提供依据,也为进一步研究两者的功能及相互关系等提供实验基础。方法:以P21～P25大鼠海马CA1区放射层胶质细胞为研究对象,通过脑片钳全细胞记录、记录后染色标记以及激光共聚焦成像等技术方法,比较星形胶质细胞与NG2细胞在形态学和电生理学特性上的异同。结果:形态学上,星形胶质细胞具有大量的突起,并且突起呈丛状分支,极细的突起非常发达,形成海绵样结构;NG2细胞也具有较多突起,但突起分支较少,突起呈长线状延伸出较长的距离,往往缺少星形胶质细胞典型的一个或多个粗大的一级突起。电生理特性上,两种细胞的静息膜电位(RMP)非常接近,而膜电容(Cm)和膜电阻(Rm)则差异非常大。对于星形胶质细胞,其I-V曲线呈线性,电流没有任何整流现象;而NG2细胞I-V曲线具有明显的外向整流特性,表达大量的快钾通道电流(Ka)、延迟整流钾电流(Kdr),以及比较小的内向整流钾电流(Kir);而且部分NG2细胞还表达低密度的电压依赖性钠电流。结论:大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2细胞在形态学和电生理上均存在一定的差异;在脑片钳实验中,根据这些差异,可以清楚地区分两者。

癫痫大鼠海马内神经干细胞移植的实验研究

取胎鼠海马进行神经干细胞(NSC)的培养、鉴定与标记,以氯化锂—匹罗卡品诱导制成大鼠急性癫痫模型,于发作后第4天将以5-溴-2′-脱氧尿苷(Brdu)标记的NSC移植入大鼠海马,检测移植后NSC在宿主体内的存活情况,移植细胞对癫痫大鼠齿状回苔藓纤维出芽(MFS)的影响。发现移植后2个月NSC在宿主体内能够存活,并向移植区周围迁移;NSC移植组大鼠海马齿状回内分子层Timm染色颗粒明显少于未移植组。认为NSC移植入癫痫大鼠海马后能够存活,并能显著抑制海马齿状回MFS。

不同培养条件下胚胎神经干细胞分化细胞中神经元所占比例的比较

目的比较细胞因子(bFGF、EGF)、B27及血清对胚胎神经干细胞分化的影响。方法从孕16-18d大鼠胚胎脑室旁组织分离神经干细胞,进行原代培养,分为B27组、bFGF+EGF组(联合组)、血清组及对照组;每天观察细胞生长状况。结果培养细胞呈Nestin免疫阳性;各组均可见干细胞的生长及分化。免疫荧光双标及图象分析结果B27组及联合组神经干细胞分化为神经元的比例大,联合组更突出(P<0.01);血清组及对照组神经干细胞组分化为胶质细胞比例较大,血清组更突出(P<0.01)。结论神经干细胞的分化同时受到内在基因和外在环境的影响,bFGF、EGF可促进NSC细胞生长,并对细胞分化为神经元起很大作用。

临夏州测土配方施肥技术推广应用现状及建议

根据临夏州人多地少,农业生产中存在施肥不合理现象,按照测土配方施肥技术原理,依据项目开展情况和测土配方施肥技术推广应用现状,分析测土配方施肥技术在推广应用中存在的问题,并对测土配方施肥技术的推广提出合理化建议。

和政县春油菜登记品种展示试验研究

油菜是和政县乡村振兴、农业产业化发展的支柱产业,是农民群众增产增收,勤劳致富奔小康的有效途径。此试验应用由华中农科院等5家育种单位提供的12个春油菜品种进行展示试验,旨在筛选出适宜和政县及临夏州高寒阴湿区乃至甘青宁同类地域种植栽培并大面积推广的春油菜品种,为市场主体选择适应性、抗逆性、丰产性强,油用品质好的绿色油用种。通过展示试验,12个品种从长势、千粒重、抗病性、产量等综合性状看,青杂5号表现最好,可作为和政县及临夏州高寒阴湿区乃至甘青宁同类地域种植栽培的主栽品种,并可以大面积推广。

论建立健全适应临夏特点的农业生态环境保护机制

以临夏回族自治州为例,分析了农业生态环境被破坏后给农业生产和人民生活带来的危害,并提出了建立健全科学的农业生态环境保护机制的建议。

论临夏高寒阴湿区发展“两高一优”农业

介绍了临夏高寒阴湿区的基本概况,分析了临夏高寒阴湿区发展"两高一优"农业的条件,并提出了临夏高寒阴湿区发展"两高一优"农业的对策。

对比研究经颈动脉和立体定位注射骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑卒中

目的 探讨安全高效移植骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs)治疗脑缺血的方法。方法 采用连续传代培养的方法纯化MSCs,Brdu标记后分别经颈动脉(1×104/μl,200μl)和立体定位(1×105/μl,10μl)注射至大鼠脑缺血2 h再灌注1 d模型,各自设立对照组,观察术后神经功能评分以及脑部Brdu阳性细胞的分布。结果 经颈动脉注射组较立体定位注射组爬杆实验评分低(P<0.05),Brdu阳性细胞存活多,迁移范围更广。结论 MSCs具有卒中后脑保护作用,而经颈动脉的给药方式优于立体定位注射。

骨髓间充质干细胞移植促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响极其可能机制。方法采集SD大鼠骨髓，分离出MSCs，并培养、纯化，取传至第6代的MSCs，移植前1d以5溴2脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）标记，然后用显微注射器将其缓慢注射到脊髓损伤大鼠模型（成年SD大鼠）的受损脊髓中心，以不进行移植的脊髓损伤大鼠模型（损伤组）和假手术组为对照。术后进行运动功能评分以判断神经功能恢复情况，并切取移植区域脊髓组织，应用荧光免疫化学染色检测脊髓损伤灶边周的神经元凋亡情况（TUNEL与NeuN双标记）以及移植的MSCs的分布和向神经元分化情况（Brdu与NeuN双标记），应用逆转录聚合酶链反应检测损伤灶区域脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达。结果移植后第3天开始，损伤组和移植组大鼠的BBB运动功能评分明显上升，第14天后进入平台期，但移植组各时间点的BBB运动功能评分均明显高于损伤组（P〈0．05）。移植后3d，在移植组的脊髓组织中可见Brdu标记阳性细胞，少部分Brdu标记阳性细胞同时表达神经元特异性标志物NeuN；移植后第3、7天，损伤组和移植组脊髓组织中的凋亡神经元均显著多于假手术组（P〈0．01），凋亡的神经元多存在于损伤周边区，但移植组的凋亡神经元显著少于损伤组（P〈0．01）；移植后第3、7天，假手术组未检测到BDNF mRNA的表达，损伤组和移植组均可检测到BDNF mRNA的表达，移植组的表达量分别较损伤组高28．6％和39．2％（P〈0．05）。结论移植的骨髓MSCs可促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复，其机制除MSCs直接分化为神经元进行修复外，还可能与其改善脊髓损伤区的微环境、上调BDNF mRNA表达、减少神经细胞凋亡有关。

脑电图在脑死亡判定中的应用

目的评价脑电图在脑死亡判定中的应用价值。方法回顾性收集华中科技大学同济医学院附属同济医院2015年12月至2019年7月申请脑死亡判定的患者信息、临床资料和辅助检查结果。脑死亡的临床判定必须由2名以上具有判定资质的医师执行。而辅助检查则包括脑电图(electroencephalogram, EEG)、经颅多普勒超声(transcranial Doppler, TCD)、短潜伏期体感诱发电位(short-latency somatosensory evoked potential, SLSEP)。判定标准参照中国的成人及儿童脑死判定指南。结果共收集77例患者信息,其中符合脑死亡诊断标准的患者共72例,年龄(42±5)岁(8~67岁),EEG的完成率为96.4%。13.9%脑死亡患者EEG存在头皮肌电伪差,使用肌松剂后EEG呈电静息状态。在脑死亡判定中,EEG的敏感性为95.8%。出现1例假阳性病例,但EEG仍预测了患者最终的死亡,可能与EEG不能显示脑干的电活动有关。结论 EEG在脑死亡判定中具有良好的敏感性。头皮肌电伪差在脑死亡患者EEG中并不少见,必要时可使用肌松剂辅助判定。