体外分子定向进化研究进展

体外定向进化作为近几年发展起来的一种蛋白质改造新策略 ,可以在未知目标蛋白三维结构信息和作用机制的情况下 ,通过对编码基因的随机突变、重组和定向筛选 ,获得具有改进功能或全新功能的蛋白质 ,使几百万年的自然进化过程在短期内得以实现 ,因而是发现新的生物活性分子和反应途径的重要方法 ,已在短短几年内取得了令人瞩目的成就 .

大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究

大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经两轮errorpronePCR ,获得催化活力较亲本D10 1S突变株提高 3倍、较野生型酶提高 35倍的进化酶 4 186 ,并对该酶的催化动力学特征进行了分析 .进化酶基因的DNA测序表明 4 186含两个有义氨基酸置换 :K16 7R和S374C ,二者既不位于底物结合位点 ,也不位于酶的金属离子结合位点 .

心博骤停大鼠复苏即刻应用肝素对肾脏MDA、SOD的影响

目的观察肝素对心肺复苏后大鼠肾脏氧自由基的影响。方法将健康雄性SD清洁级大鼠70只分为3组,假手术组(n=10),心脏骤停盐水组(n=30),心脏骤停肝素组(n=30);两复苏组又分为30 min及2、6 h亚组,每组10只。假手术组组不建立心肺复苏模型,只做手术和气管插管;两复苏组建立心肺复苏模型,心脏骤停盐水组复苏后即刻给与肾上腺素,心脏骤停肝素组给予肾上腺素和肝素的合剂。自主循环恢复(ROSC)后30 min及2、6 h后取标本测肾脏组织丙二醛含量(MDA)、超氧化物分化酶(SOD)活性。结果肾脏MDA含量自主循环恢复后2、6 h两复苏组和Sham组比较差异有统计学意义(P<0.05),两复苏组在复苏后2 h比较差异有统计学意义(P<0.01)。自主循环恢复后0.5 h肾脏MDA开始升高,其中2组复苏后2 h MDA升高最明显,6 h逐渐恢复,肾脏组织SOD活性两复苏组和Sham组比较差异有统计学意义(P<0.01);自主循环恢复后2 h心脏骤停肝素SOD活性和心搏骤停盐水组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论心肺复苏后2 h肾脏再灌注损伤最重,复苏开始即刻肝素抗凝能降低心搏骤停后肾脏MDA生成,SOD活性升高。

丙泊酚复合利多卡因胶浆实施无痛胃镜检查的临床观察

目的:观察丙泊酚复合利多卡因胶浆用于无痛胃镜的麻醉效果及不良反应。方法:选择胃镜检查患者90例,随机分为3组:单纯给予丙泊酚2mg/kg(Ⅰ组),芬太尼1μg/kg+丙泊酚2mg/kg(Ⅱ组),利多卡因胶浆+丙泊酚2mg/kg(Ⅲ组)。三组静注丙泊酚速率为100g/min,必要时追加。记录麻醉前、注药后,苏醒时麻醉效果分级、麻醉后不良反应及并发症。结果:Ⅱ、Ⅲ组术毕清醒时间和全程丙泊酚用量均少于Ⅰ组(P<0.05),与麻醉前比较,在睫毛反射消失时,丙泊酚给药2ml及术毕各组MAP、SPO2均降低,HR增快(P<0.05)。在睫毛反射消失时,和丙泊酚给药2min,Ⅱ组SPO2显著低于其他两组(P<0.05)。Ⅱ、Ⅲ组术中镇静,喉反射完全消失者优于Ⅰ组。Ⅰ、Ⅱ组麻醉中出现舌根后坠及术后恶心、呕吐、发生例数高于Ⅲ组(P<0.05);Ⅱ组呼吸暂停发生率高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05),Ⅰ组苏醒期兴奋、躁动发生例数高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。结论:丙泊酚复合利多卡因胶浆用于无痛胃镜检查麻醉效果满意,相对芬太尼更安全。

肉牛粪便正常菌群研究

研究采用微生态学检测方法，对健康牛粪便中的正常菌群（１０种细菌）进行了定性、定量分析。结果证明：健康牛消化道中的类杆菌（７．８６±０．７３）、双歧杆菌（６．６２±１．４０）、乳杆菌（６．２±１．３９９）、消化球菌（６．００±０．８３）为优势菌群，而肠杆菌、梭杆菌、优杆菌含量则较少。

超声引导下神经阻滞预防性镇痛在肩关节镜手术中的临床效果观察

目的探讨神经阻滞预防性镇痛对肩关节镜手术中的血流动力学和镇痛的临床效果。方法选取60例接受在侧卧牵引位下行择期单侧肩关节镜手术患者为研究对象,随机分为单纯全身麻醉组(GA组,n=30)和神经阻滞复合全身麻醉组(NA组,n=30)。记录患者入室(T_(0))、切皮时(T_(1))、手术开始10 min(T_(2))、手术开始30 min(T_(3))、手术开始1 h(T_(4))、出室(T_(5))时间段的心率(HR)和平均动脉压(MAP);记录手术中输液量、尿量、出血量及冲洗液中肾上腺素使用量,术中及术后阿片类药物的用量及其他麻醉药物的使用情况;记录手术时长、麻醉时长、拔管时间、恢复室恢复时间(PACU恢复时间)、术后并发症、住院天数;记录拔管后5 min、术后1 h、术后4 h、术后8 h、术后16 h、术后24 h的疼痛视觉模拟评分(VAS)。结果NA组患者在T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时间段的HR、MAP明显低于GA组,2组间比较差异有统计学意义(P<0.05);NA组患者舒芬太尼使用量、瑞芬太尼使用量、丙泊酚使用量、拔管时间、PACU恢复时间都明显低于GA组,2组间比较差异有统计学意义(P<0.05);NA组患者在拔管后5 min、术后1 h、术后4 h、术后8 h、术后16 h的VAS评分都明显低于GA组,2组间比较差异有统计学意义(P<0.05);2组间一般情况、输液量、尿量、出血量、麻醉时长、手术时长、肾上腺素使用量、住院天数及相关并发症比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论超声引导下神经阻滞预防性镇痛能提高肩关节镜手术的麻醉质量,提高患者整体满意度而没有增加并发症发生的风险。

虫草川贝止咳膏薄层色谱鉴别方法的研究

目的建立虫草川贝止咳膏中茯苓、甘草的专属鉴别方法。方法实验摸索并比较不同提取方法、不同色谱条件、不同展开系统的薄层色谱鉴别。结果建立了茯苓、甘草、苦杏仁的鉴别方法。结论在各自的薄层鉴别系统下茯苓、甘草、苦杏仁分离良好,主斑点清晰,阴性无干扰;以上鉴别方法样品提取简便、阴性无干扰、重现性良好,可用于虫草川贝止咳膏中茯苓、甘草、苦杏仁的鉴别及虫草川贝止咳膏的质量控制。

复合保温对腰麻下老年患者关节置换术转归的影响

目的观察保温措施降低手术中低温对老年患者在腰麻下实施关节置换手术中寒颤及转归的影响。方法选取腰麻下实施关节置换手术的老年患者70例,随机分为对照组和保温组各35例,对照组采用常规护理,保温组给予保温措施。记录2组患者入室后、麻醉后,手术后30、60、90、120 min及手术结束后体温及寒颤发生情况,计算围手术期输血患者例数、入住ICU的例数、切口感染例数、住院时间和住院费用。结果2组患者在术中都出现体温降低,但保温组患者术后低体温明显改善(P<0.05),同时保温组患者寒颤发生率、围手术期出血、入住ICU的例数、切口感染例数、住院时间和住院费用都明显降低。结论腰麻下实施关节置换术中采取保温措施能有效维持老年患者体温恒定,预防寒颤发生,同时可以降低患者围手术期间出血,减少入住ICU的例数,减少切口感染,缩短住院时间,降低住院费。

高龄患者下肢手术行外周神经阻滞的效果

目的观察外周神经阻滞用于80岁以上患者下肢手术的可行性及效果。方法选择两组80岁以上逆行单侧下肢手术的患者,随机分为Ⅰ组(外周神经阻滞)和Ⅱ组腰硬联合麻醉(CSEA),Ⅰ组根据部位不同选择坐骨神经阻滞,坐骨神经加股神经阻滞,腰丛加坐骨神经阻滞,使用神经刺激仪定位;Ⅱ组使用腰硬联合麻醉L3-4穿刺置管,给予等比重布比卡因液,比较两种麻醉方法的阻滞效果。结果两组阻滞效果无较大的差异,麻醉前两组血压差异无统计学意义,Ⅱ组麻醉后血压明显低于麻醉前及Ⅰ组,注药15min心率Ⅱ组明显增快,尿潴留明显多于Ⅰ组,术后随访患者及家属满意率Ⅰ组大于Ⅱ组。结论神经刺激仪定位下行外周神经阻滞,不仅满足高龄老人下肢手术要求,也因其费用低,副作用小,值得推广。

肝素对窒息性心脏骤停-心肺复苏大鼠心肌线粒体超微结构的影响

目的观察心搏骤停大鼠复苏即刻应用肝素对心肌线粒体超微结构的影响。方法健康雄性SD清洁级大鼠69只,体重450~550 g,随机分为3组,即假手术组9只、对照组30只、肝素组30只;对照组和肝素组又分为0.5、2、6 h亚组,每组10只。制备8 min窒息心脏骤停心肺复苏模型,肝素组常规药物复苏的同时静脉注射肝素0.5 mg/kg,对照组静脉注射与肝素等容量的生理盐水。自主循环恢复后0.5、2、6 h进行心肌电镜标本制备观察,并用Flameng方法进行半定量分析线粒体损伤情况。结果大鼠复苏前各组体重(W)﹑直肠体温(T)﹑平均动脉压(MAP)﹑心率(HR)﹑潮气末二氧化碳浓度(PETCO2)比较差异无统计学意义(P>0.05);肝素组和盐水组在复苏后0.5、2、6 h线粒体均有损伤,Flameng线粒体半定量分析表明损伤线粒体计数均升高(P<0.05);复苏后2 h线粒体损伤最严重,但肝素抗凝组复苏后线粒体损伤明显减轻,Flameng线粒体半定量分析表明肝素组较对照组损伤线粒体评分明显降低(P<0.05)。结论心搏骤停-心肺复苏过程导致心肌线粒体损伤,肝素可以减轻心肌线粒体超微结构损伤的程度。

气管肿瘤切除术的麻醉处理

为提高气管肿瘤手术的安全性 ,总结 6例该手术的麻醉方法及围术期处理。结果 ,麻醉处理关键在于既要维持良好的通气功能 ,又要保证手术正常进行 ,不同部位的肿瘤采用不同的麻醉方法 ,手术中要持续监测SpO2 、ECG、ETCO2 ,间断血气测定 。

不同麻醉方法对老年上腹部手术患者术后急性期认知功能的影响

目的观察硬膜外复合全身麻醉与单纯全身麻醉对老年上腹部手术患者术后急性期认知功能的影响。方法将40例择期行上腹部手术的老年患者用随机数字表法分成2组,每组20例。观察组20例使用硬膜外复合气管插管全身麻醉,对照组采用单纯气管插管全身麻醉,记录患者术中血流动力学变化,采用MMSE法评估患者不同时间点(术前24 h、术后24、48 h)的神经功能。结果 2组患者生命征平稳,MMSE评分比较差异无统计学意义(P>0.05);术后24 h短期急性认知功能障碍者观察组11例(55%),对照组13例(65%);术后48 h,观察组5例(25%),对照组9例(45%),2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论硬膜外复合全身麻醉较单纯全身麻醉用药少,但对老年患者术后急性期的认知功能无明显影响。

右美托咪定下调TGF-β/Smad通路促进炎症诱导软骨细胞自噬及抑制凋亡的研究

目的探讨右美托咪定(DEX)在膝骨关节炎(KOA)治疗中的价值及其机制。方法体外培养人软骨细胞,分为正常对照组、模型组、DEX组,CCK8检测3组细胞增殖情况,药物作用72h后收集细胞,流式细胞仪检测3组细胞凋亡率,Western-blot检测3组细胞凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白以及TGF-β/Smad通路TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达。结果药物作用72 h后细胞增殖检测,DEX组细胞OD值较模型组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率比较,DEX组细胞凋亡率低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western-blot法检测显示,与模型组比较,DEX组Bcl2蛋白、LC3-Ⅱ蛋白、Beclin-1蛋白表达上调,Bax蛋白、p62蛋白表达下调;TGF-β/Smad通路蛋白表达检测显示,模型组细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达上调,可显著抑制上述蛋白变化。结论DEX通过下调TGF-β/Smad信号通路促进人软骨细胞自噬并抑制炎症诱导的人软骨细胞凋亡,DEX在延缓KOA发展及治疗方面具有潜在的应用价值。

俯卧位对全身麻醉血流动力学及呼吸功能影响因素分析

目的观察全身麻醉胸腰椎手术中患者俯卧位与仰卧位时的呼吸和循环指标,评价全身麻醉俯卧位对呼吸及循环功能的影响。方法选择行胸腰椎手术患者60例,均在全麻常规诱导后由仰卧位改为俯卧位,并按8～9 mL/kg设置潮气量,呼吸频率12次/min。分别于麻醉后仰卧位时和术中俯卧位1、30、60 min,术毕仰卧位时测定HR、SBP、DBP、SpO_2、PETCO_2、Paw。结果 60例患者全麻后由仰卧位改为俯卧位,对呼吸和循环功能无明显影响。1例患者手术时间长达9 h,术中监测血气分析,氧分压与二氧化碳分压均正常。入选患者术后均清醒拔管,安返病房。诱导完成后,体位由仰卧位改为俯卧位时,发生意外脱管2次,气囊漏气1例,及时处理后未造成意外。结论胸腰椎手术体位改变后对呼吸和循环功能无明显影响。

蒲地蓝消炎片质量控制方法的研究

目的研究蒲地蓝消炎片的质量控制方法。方法采用TLC法测定蒲公英、苦地丁,采用HPLC法测定黄芩苷的含量。含量采用C18色谱柱(250mm,2.5mm,5m);以十八烷基硅烷鍵合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。用外标法测定。结果黄芩苷在4.02～32.16μg范围内,呈良好的线性关系,回归方程为:Y=119067X-45669,γ=0.9999;加样回收率为98.8%(n=6);空白对照无干扰。结论所建立的方法简便、快捷、可靠,可用于蒲地蓝消炎片的质量控制。

超声引导下膝关节手术个性化止血带压力选择的探讨

目的探讨采用超声引导找到膝关节手术止血带个性化压力选择的标准,找出无动脉血流出现的最佳止血带压力。方法将实施膝关节置换手术的患者100例随机分为试验组和对照组各50例,试验组依据超声技术观察腘动脉血流情况,以腘动脉血流无显像为最佳止血带压力。对照组采用传统方法,压力在收缩压的基础上加150 mm Hg。比较2组止血带充气前后心率、皮损情况、术后止血带部位肢体疼痛、止血效果及并发症发生率。结果 2组患者相比较,试验组充气压力(220.45±20.88)mm Hg显著低于对照组(360.51±18.26)mm Hg。试验组较对照组在止血带放气后心率变化平稳(P<0.05),皮损、肢体疼痛及并发症的发生率均显著降低,止血效果差异无统计学意义。结论采用超声引导检测腘动脉血流无显像可以获得较低止血带压力,使手术顺利进行,血流动力学稳定,能够减少止血带使用过程中的皮损、肢体疼痛、麻痹等并发症的发生。

不同镇痛方式对膝关节置换术围术期应激反应炎症介质的影响

目的探讨连续股神经-坐骨神经阻滞和连续股神经-关节腔鸡尾酒阻滞之间的镇痛效果。方法 60例拟实施单膝关节置换术(TKA)的患者,分为连续股神经-坐骨神经组(S组,n=30)与连续股神经-关节腔鸡尾酒组(C组,n=30)。用ELISA法检测不同时间点白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、C-反应蛋白(CRP)、P物质(PS)浓度,并记录患者术后72 h内静息、运动下VAS评分及术后不良反应。结果患者术后24、48 h静息和运动状态下VAS评分C组明显低于S组(P<0.05),且术后72 h VAS评分2组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后12 h患肢运动功能S组明显差于C组(P<0.05),其他时间2组间差异无统计学意义。2组患者IL-6、C-RP、SP、TNF-a术后均有不同程度升高,S组升高更明显且在术后24、72 h时差异有统计学意义(P<0.05)。结论连续股神经-关节腔鸡尾酒阻滞镇痛对TKA镇痛效果以及降低术后炎症反应优于连续股神经-坐骨神经阻滞。

右美托咪定上调PI3K/AKT通路促进骨髓间充质干细胞增殖的作用机制

目的探讨右美托咪定调控PI3K/AKT通路在骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖中的作用及其机制。方法将BMSCs分为对照组、Dex组及抑制剂组,用MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪周期检测各组细胞周期分布,Western-blotting检测各组细胞CCNB1、CDC2蛋白及PI3K/AKT通路PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果Dex组细胞OD值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);抑制剂组细胞OD值明显低于Dex组,差异有统计学意义(P<0.05);Dex组细胞G2期细胞分布比例显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);抑制剂组细胞G2期细胞分布比例显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);DEX组CCNB1、CDC2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达较对照组上调,抑制剂组CCNB1、CDC2、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达较Dex组下调。结论右美托咪定通过上调PI3K/AKT通路并促进BMSCs的增殖。

脂肪酶-P450脂肪酸脱羧酶融合蛋白催化的α烯烃合成

α烯烃是一种独特的微生物天然产物.由P450脂肪酸脱羧酶催化的中长链(C_(12)-C_(20))脂肪酸脱羧反应生成的α烯烃因其在生物燃料和生物材料领域的潜在应用前景备受关注.通过将脂肪酶TlL的甘油三酯水解活性与P450脱羧酶OleT_(JE)的脂肪酸脱羧活性偶联,可将油脂原料两步转化为α烯烃.为了提高油脂到α烯烃的转化效率,并降低两种酶的分步制备成本,本研究通过20个氨基酸的linker序列将双酶共价连接形成重组融合蛋白NHis6-OleT_(JE)-linker-TlL(FusC).在大肠杆菌中表达的FusC经镍柱层析纯化后成功实现双功能活性.经气相色谱分析,融合蛋白催化的甘油三酯顺序水解-脱羧偶联反应的产烃率达到31.7%,催化效率相对于双酶游离混合体系明显提升,展现出良好的底物通道效应,具有潜在的实际应用前景.