新的白血病复发相关候选基因LRP15全长cDNA的克隆

为了克隆与白血病复发相关的新基因 (LRP15 )的全长cDNA序列 ,应用分子生物学及生物信息学技术对一段已知仅在白血病复发标本中被甲基化的 1.8kb长的DNA片段进行研究分析 ,通过美国生物信息中心 (NCBI)提供的hEST数据库进行电子杂交 ,并对获得的相互重叠的EST片段进行组装 ,设计引物进行cDNA末端快速扩增(RACE)。以高通量基因组序列 (HTGS)数据库及SAGE文库为基础 ,将获得的cDNA片段进行染色体定位及组织表达分析。结果表明 ,LRP15基因的cDNA序列全长 1718bp ,含 1个 780bp的开放读码框架 ,编码 2 5 9个氨基酸。该基因定位于染色体 3p2 4 ,在多种组织中表达。结论 :RACE技术是克隆新基因的有效方法 。

高强度聚焦超声与伽玛刀治疗晚期胰腺癌的对比观察

目的:本研究主要对比观察高强度聚焦超声(HIFU)与伽玛刀治疗伴有癌痛的晚期胰腺癌疗效和不良反应。方法:回顾性分析武警上海总队医院2006年3月至2008年10月收治晚期胰腺癌患者80例,其中26例(A组)为HIFU治疗,54例(B组)为伽玛刀治疗。对比评价两组的近期有效率(CR+PR)、平均生存期、临床受益率(CBR)及不良反应。CBR评价标准:疼痛程度减轻≥50%,持续4周以上;止痛药用量减少≥50%,持续4周以上;Karnofsky评分增加≥20%,持续4周以上,体重增加7%。结果:两组的平均生存期分别为(5.6±4.1)个月及(5.4±3.6)个月。A组近期有效率26.9%,B组24.1%,两组无显著性差异。A组CBR为84.6%.B组为57.4%。两组比较差异有统计学意义(P=0.022)。主要不良反应为:骨髓抑制,恶心,呕吐。A组的不良反应明显小于B组(P=0.040)。结论:高强度聚焦超声与伽玛刀均是治疗晚期胰腺癌的安全、有效的治疗方法。HIFU与伽玛刀治疗的近期疗效与远期疗效相似,但在改善患者疼痛、体力状态等方面优于伽玛刀。在两者的不良反应上,HIFU治疗的骨髓抑制、消化道反应等方面均明显低于伽玛刀。提示HIFU可以应用于一般状况更差的患者。

LRP15基因的表达谱分析及其在白血病细胞中的表达

为检测LRP15基因在肿瘤细胞以及处于不同发育阶段造血细胞的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在白血病分型预后中可能具有的作用 ,利用NCBI提供的SAGE文库及NCI提供的正常组织及肿瘤细胞基因表达数据库 ,分析比较了LRP15基因在多种肿瘤组织、细胞系和正常组织中的表达谱 ;采用RT PCR方法检测了该基因在正常血细胞及原代白血病细胞中的表达状况。结果显示 ,LRP15在人类多种正常组织及肿瘤细胞中有表达 ;在幼稚细胞中表达阳性率高于成熟细胞 (P <0 .0 1) ,在急性髓细胞白血病中M1、M2 和M3 表达的阳性率高于其它亚型 (P <0 .0 1) ;难治组LRP15表达的阳性率有高于初治组的趋势。结论 ,LRP15基因与急性白血病及其它多种肿瘤的发生、发展密切相关 ,对急性白血病的临床分型具有重要的意义 ,可能对判断急性白血病的预后具有一定价值。

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动 子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态, 并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态.并诱导该基 因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区 高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一 定的价值。

体部伽玛刀治疗晚期胰腺癌的临床分析

目的:探讨体部伽玛刀治疗晚期胰腺癌的安全性和有效性。方法:采用SGS-Ⅰ型立体定向伽玛射线体部治疗系统(体部伽玛刀)治疗79例晚期胰腺癌患者。伽玛刀治疗采用三维立体定向治疗计划系统给予患者精确定位。在临床靶区(CTV)边缘外放5mm-10mm形成计划靶区(PTV);等剂量线为50%-60%,肿瘤≤5cm的单次周边剂量3.5-4.5Gy,肿瘤>5 cm的单次周边剂量3.0-4.0Gy;治疗总剂量为35-48Gy;治疗次数9-11次,大多数患者为每周5次治疗。观察病人的有效率、生存时间和临床受益率(CBR)。结果:伽玛刀治疗过程中88.9%患者上腹部及腰背部疼痛明显减轻;66.7%患者黄疸指数下降。CBR 69.6%。伽玛刀治疗3个月复查CT,病变部位达到CR 1例,PR 25例;总有效率(CR+PR)32.9%。主要不良反应为:恶心,呕吐,骨髓抑制。结论:伽玛刀是治疗晚期胰腺癌的安全、有效的治疗方法。为临床肿瘤医师提供了一个新的治疗手段。

生物信息学研究新基因LRP15

为了利用生物信息学探索网上克隆基因与预测基因功能的新方法,首先用一段1.8kbDNA片段在人类EST数据库中进行电子杂交并对相互重叠的EST片段组装,通过引物设计进行cDNA末端快速扩增。以高通量基因组序列(HTGS)数据库及SAGE文库为基础,进行染色体定位及组织表达分析。通过DAS及RPS-BLAST程序预测其蛋白质结构及功能。结果显示,LRP15cDNA全长1718bp,含一个780bp的开放读码框架,编码259个氨基酸。该基因定位于染色体3p24,在多种组织中表达。其编码蛋白含有N端富含亮氨酸重复序列及潜在的穿膜序列。研究表明,生物信息学是克隆与预测基因功能的有效方法;LRP15基因可能是一个参与细胞发育调控的新基因。

新的白血病相关基因LRP15真核表达载体构建及在K562细胞中的表达

目的 构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的真核表达载体,并观察其在K562细胞中的表达情况。方法 采用RT-PCR方法自1例白血病患者中克隆LRP15cDNA片段,将目的基因LRP1定克隆入pGEM-T载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定。将鉴定过的DNA片段插入真核质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA-LRP15。脂质体介导法将其转染K562细胞,72h以RT-PCR方法检测转染细胞中LRP15基因的表达情况。结果 酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人LRP15基因ORF序列;转染实验表明LRP15基因能在K562细胞中表达。结论 成功构建LRP15基因真核表达载体,并在K562细胞中获得表达,为进一步研究LRP15基因的功能奠定了基础。

DNA甲基化与白血病的研究进展

DNA异常甲基化是人类肿瘤中最常见的基因变化之一,它在白血病发生、发展中对基因表达调控、基因结构的稳定等方面发挥重要作用。白血病去甲基化治疗是建立在白血病甲基化研究基础上,是一种作用机理不同于传统化疗药物的新方法,它对复发及耐药白血病有一定疗效。本文就近年来在DNA甲基化与白血病发生的关系及白血病去甲基化治疗方面的研究进展作一综述。

LRP16对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

用Northern印迹方法检测雌二醇 (17β E2 )对LRP16mRNA表达的时间及剂量依赖性调控作用 .构建LRP16基因启动子序列调控的萤光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和 β(ERα和ERβ)表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞后测定萤光素酶活性 .将LRP16基因的表达载体转染MCF 7细胞 ,测定过表达LRP16对细胞的生长特性的影响 .17β E2 使MCF 7细胞中LRP16mRNA表达水平增加 ,增加幅度未显示出 17β E2 培养时间和剂量的依赖性 .pS0 与ERα表达载体共转染细胞的相对萤光素酶活性较非共转染组 (对照组 )及pS0 ERβ表载体共转染组升高 5～ 10倍 .LRP16基因过表达促进MCF 7细胞的增殖 .研究表明 ,雌激素可能通过ERα上调乳腺癌MCF

高强度聚焦超声与超声引导穿刺无水酒精注射治疗门静脉癌栓的比较

目的对比观察高强度聚焦超声(HIFU)与超声引导穿刺无水酒精注射治疗门静脉癌栓(PVTT)的疗效和不良反应。方法回顾性分析我院原发性肝癌(PLC)合并PVTT患者86例的治疗情况,在肝癌肿块行TACE治疗的基础上,对于癌栓的治疗,52例(A组)为HIFU治疗,34例(B组)为超声引导穿刺无水酒精注射治疗,对比评价两组PVTT治疗的近期有效率(CR+PR)%、临床受益率(CBR)、生存期及不良反应。结果 A组近期有效率40.38%,B组41.18%,两组比较差异无统计学意义(P=0.1493)。A组CBR为48.08%,B组为23.53%,两组比较差异有统计学意义(P=0.0102)。两组的生存期和中位生存期分别为3.6～23.5月和12.3月、4.2～21.3月和11.5月,两组比较差异无统计学意义(P=0.1504)。主要不良反应为:A、B两组少数病例有上消化道出血,B组多数病例有肝区胀痛、发热、肝包膜下出血,B组的不良反应发生率明显高于A组,两组差异有统计学意义(P=0.0051)。结论 HIFU与无水酒精注射治疗的近期疗效与远期疗效相似,在改善患者临床状态等方面优于无水酒精注射治疗,治疗的不良反应明显低于无水酒精注射,HIFU比无水酒精注射有更高的安全性,应用范围广,能适合肝功能异常、伴有腹水、病情较重不能耐受其他方法治疗的肝癌伴门静脉癌栓患者。

去甲基化和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂对K562细胞增殖和肿瘤相关基因表达的影响

为观察去甲基化和组蛋白乙酰化对白血病细胞系K5 6 2增殖及肿瘤相关基因表达的影响 ,本研究将处于对数生长期的K5 6 2细胞系与 5 杂氮脱氧胞嘧啶 (DAC)和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂—曲古抑菌素 (trichostatin ,TSA)共同培养 ,观察细胞生长指数并利用流式细胞术检测细胞周期变化 ;利用Atlas774 2 1基因芯片筛查给药前后的基因表达差异。结果表明 ,DAC和TSA的联合应用能够抑制K5 6 2细胞的增殖 ,使大多数细胞阻滞在G0 期 ,并促进多个基因的表达上调及少数基因表达下调。结论 :去甲基化药物及组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂联合应用具有抗白血病作用 ,与基因芯片联合应用可以用来筛查白血病抑癌候选基因。

反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系端粒酶活性的抑制作用

背景与目的:近几年的研究表明,端粒酶在肿瘤的发生中扮演着重要角色。人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetrascriptase,hTERT)是端粒酶活化的惟一限制性组分。本研究探讨hTERT全长cDNA反义序列转染对人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D恶性表型的逆转作用。方法:应用基因重组技术构建包含hTERTcDNA全长序列的反义hTERT真核表达载体pcDNA3.1(-)-hTERT,用脂质体转染人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D,通过生长曲线比较转染反义hTERT后PLA-801D细胞的增殖能力,应用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERTmRNA的表达水平,并应用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性。结果:成功地构建了pcDNA3.1(-)-hTERT的反义真核表达载体,并转入到PLA-801D细胞中。转染反义hTERT的细胞较未转染及转染空质粒细胞的生长增殖能力显著降低(P<0.05);转染组细胞中野生型hTERTmRNA的表达被抑制,其相对表达量仅为对照组细胞的15.7%,转染组细胞中端粒酶活性较对照细胞下降了约82.4%。结论:hTERTcDNA的全长反义序列可以抑制PLA-801D细胞hTERTmRNA的表达水平和端粒酶活性,限制PLA-801D细胞的生长。

非手术治疗晚期胰腺癌206例临床分析

目的:探讨晚期胰腺癌各种非手术治疗模式的疗效。方法:对2004年4月至2010年10月收治的206例晚期胰腺癌患者进行回顾性研究。结果:立体定向放射、高强度聚焦超声、化学治疗、立体定向放射+化学治疗、高强度聚焦超声+化学治疗的近期有效率分别为37.18%(29/78)、28.57%(12/42)、26.67%(8/30)、79.31%(23/29)、77.78%(21/27),联合治疗的效果明显优于单纯治疗(P<0.05)。各组临床获益反应率分别为48.71%(38/78)、88.09%(37/42)、30.00%(9/30)、82.76%(24/29)、85.19%(23/27),高强度聚焦超声治疗优于立体定向放射治疗(P<0.01),而联合治疗的临床获益亦明显优于单纯立体定向放射治疗或化疗(P<0.01)。高强度聚焦超声治疗不良反应最轻(P<0.01)、立体定向放射治疗+化学治疗最重(P<0.01),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组中位生存期分别为10.6、7.6、6.9、15.3、13.6个月,接受联合治疗患者的生存期明显优于仅接受单纯治疗的患者(P<0.05),联合治疗中接受立体定向放射治疗+化学治疗的患者可获得更长的生存(P<0.05)。结论:立体定向放射治疗、高强度聚焦超声、化学治疗均为晚期胰腺癌患者可选择的有效手段,联合治疗效果较单纯治疗佳。其中单纯高强度聚焦超声治疗不良反应较轻,对于一般情况较差患者是一种较好的姑息治疗手段,而对于一般情况较好的患者,接受立体定向放射治疗+化学治疗是最佳治疗选择。

雌激素上调LRP16基因表达的研究

目的 :鉴定LRP16基因的表达调控途径并探讨其可能机制。方法 :对LRP16基因进行启动子序列顺式作用元件和信息学角度的SAGE(serialanalysisofgeneexpression)谱分析 ,提示雌激素对其可能具有转录调控作用。为证实这一作用 ,构建了LRP16基因启动子序列 (2 6kb)调控的荧光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和β(ERα ,ERβ)真核表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞 ,加入雌二醇 (β E2 )培养 ,luciferaseassay方法测定相对荧光素酶活性。结果 :报告子 pS0 与ERα真核表达载体共转染细胞的相对荧光素酶活性较非共转染组及 pS0 /ERβ表达载体共转染组显著升高 ,并且在两种细胞中的升高幅度接近。结论 :LRP16是受雌激素调控的一个新识别的靶基因 ,具体调控途径由雌激素变构激活的ERα直接介导 ,其临床意义有待进一步研究。

高强度聚焦超声治疗晚期胰腺癌的临床观察

目的探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗晚期胰腺癌的疗效和安全性。方法对41例晚期胰腺癌患者行HIFU治疗,观察治疗前后的影像学变化及临床症状,评价HIFU治疗的近期有效率（RR）、临床受益率（CBR）、生存期及不良反应。结果全组RR为29.3%,CBR 85.4%,中位生存期6.7个月（3.5~10.8个月）,未发生皮肤烧伤、胰腺炎、胃肠道损伤等并发症。结论 HIFU是一种治疗胰腺癌的有效方法,具有无创和较高的安全性,应用范围广,适合病情较重、不能耐受其他方法治疗的患者。

急性淋巴细胞白血病复发相关基因的筛选及生物信息学分析

目的:利用开放性基因芯片数据库筛选急性淋巴细胞白血病复发相关候选基因并对候选基因的表达谱进行生物信息学分析。方法:数据来源于美国加利福尼亚大学分子和细胞生物学系Michael Eisen实验室公布的23例复发与缓解急性淋巴细胞白血病基因表达的芯片检测结果,筛选复发和缓解二组表达水平差异具有统计学意义的基因;利用SAGE和GeneCard进一步分析候选基因的表达谱;根据人类基因组Genbank数据库提供的平台对候选基因进行功能预测分析。结果:共筛选出2条急性淋巴细胞白血病复发相关候选基因。结论:充分利用开放性基因芯片数据库,可以经济、方便和快捷地筛选疾病相关候选基因,并对已知序列的候选基因进行功能预测。

LRP16基因启动子的亚克隆及表达调控载体的构建

目的 :为深入研究LRP16基因的表达调控机制 ,克隆及亚克隆了LRP16基因的启动子序列 ,构建LRP16基因启动子表达调控载体。方法 :在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点 5′侧翼区约 3kb的基因组序列设计PCR扩增引物 ,从健康外周血中扩增获得该片段 ,以此序列为基础进行亚克隆 ,分别获得 6条 5’端不等、3’端平齐的片段 ,最后插入用于表达调控研究的 pGL3 Basic载体。 结果 :获得了 7条长度依次差别约为 4 0 0bp的LRP16启动子克隆 ,分别构建了调控荧光素酶报告基因的真核表达载体。结论 :上述载体的成功构建为信息资源与实验手段的有效结合克隆启动子序列提出了一种模式 。

LRP16基因启动子克隆及特征分析

克隆LRP16基因启动子分子,并对启动子特征进行分析,预测启动子区调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5'侧翼区2.7kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增;利用Genomatix程序对5'侧翼区近1000bp进行启动子特征分析。获得了与GenBank序列一致、长度为2.7kb的LRP16基因启动子DNA序列,该序列具有典型的真核生物RNA聚合酶II启动子特征及多个核受体结合位点,如α视黄酸受体及RAR相关孤生受体。

Dieulafoy病的急诊金属止血夹钳夹止血治疗体会

我院和上海华东医院自1999年2月～2002年12月,共收治Dieulafoy病患者11例,急诊内镜下行金属夹钳夹治疗,全部止血成功,现报道如下.