微小RNA在氟骨症发病机制研究中的作用

氟的主要靶器官是骨相组织，临床表现为氟斑牙和氟骨症。其中，氟骨症发病机制不清且尚无特异的治疗手段，对人体健康危害较大。研究表明，氟对骨细胞调控的分子机制涉及较多信号通路蛋白和功能基因的异常改变，然而氟对这些信号蛋白和功能基因的调节机制仍不清楚。微小RNA（miRNA）是一类具有调节mRNA转录和蛋白表达功能的非编码RNA，在细胞的生长发育和分化中具有非常重要的作用。近年研究发现，miRNA与骨代谢调节密切相关，它在骨细胞的分化、生长和生物学活性等方面均具有调节作用。本文旨在探讨miRNA在氟骨症发病机制中可能发挥的作用，为氟中毒发病机制的深入研究提供新的思路和线索。

氟对大鼠骨组织破骨细胞的作用及机制研究

目的探讨氟对大鼠骨组织中破骨细胞的作用及其调节机制。方法将20只清洁雄性3周龄Wistar大鼠，按体重采用随机数字表法分为两组，每组10只。对照组饮用蒸馏水，染氟组饮用含氟100mg/L的蒸馏水，饲养3个月。观察大鼠氟斑牙情况，离子选择电极法检测骨氟蓄积量，光镜观察大鼠骨组织病理形态变化．抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法鉴定骨组织中破骨细胞，定磷法检测血清钙调磷酸酶（CaN）活力，二喹啉甲酸（BCA）法检测血清总蛋白浓度，比色法检测血清中钙（Ca）和丙二醛（MDA）含量，酶联免疫吸附法（ELISA）测定钙调蛋白（CaM）含量。结果实验结束时，对照组无氟斑牙检出，染氟组大鼠均有氟斑牙表现；染氟组大鼠骨氟含量[（4460．671±418．548）mg／kg]高于对照组[（582．5344-58．342）mg／kg，t=-29．020，P〈0．01]；与对照组比较，染氟组大鼠骨组织中呈现骨小梁普遍变粗、骨质融合、骨矿化不全等改变；染氟组大鼠骨组织中TRAP染色阳性信号强度均显著高于对照组，染氟组破骨细胞形成数量[10（5～12）个]也显著多于对照组[3（2～4）个，U=92．5，P〈0．01]；染氟组大鼠血清中CaN活力[（3．334±0．654）nmol／mgprot]显著高于对照组[（1．289±0．361）nmol／mgprot，t=-6．346，P〈0．01]，两组大鼠血清中Ca和CaM含量无显著差别，而染氟组MDA含量[（7．703±2．954）[mol／L]显著高于对照组[（3．958±1．965）μmol／L，t=-2．968，P〈0．05]。结论过量氟可导致大鼠骨组织中破骨细胞生成增多，其机制可能为氟通过氧化应激途径刺激机体内CaN活性的升高。

改水对氟暴露大鼠脾脏内质网应激反应的影响

目的 分析改水后氟暴露大鼠脾脏内质网应激反应（endoplasmic reticulum stress，ERS）水平的变化，探讨氟致免疫系统损伤机制，并为改水降氟防治工作提供科学依据。方法 选取SPF级Wistar雄性大鼠48只，按体质量（120 ~ 140 g）采用随机数字表法将其分为对照组和低、中、高氟剂量组，每组12只，各组饮用水中氟化钠（NaF）含量分别为0、50、100、150 mg／L。常规饲料喂养，自由饮水。染氟持续12周，每组选取6只大鼠分离脾脏；剩余6只大鼠改为饮用不含NaF的蒸馏水，继续饲养12周分离脾脏。采用实时荧光定量PCR（qRT- PCR）检测ERS相关基因葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、剪切型X盒结合蛋白（XBP1-s）、活化转录因子4（ATF4）、增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和半胱氨酸天冬氨酸酶12（Caspase-12）的mRNA表达水平。结果改水前，对照组，低、中、高氟剂量组的GRP78（1.00 ± 0.09、1.69 ± 0.35、1.39 ± 0.29、1.19 ± 0.19）、XBP1-s（1.00 ± 0.12、1.40 ± 0.23、1.24 ± 0.26、1.38 ± 0.11）、ATF4（1.00 ± 0.17、1.86 ± 0.56、2.33 ± 0.55、1.95 ± 0.74）、CHOP（1.00 ± 0.53、2.84 ± 0.68、3.06 ± 1.29、2.50 ± 0.35）和Caspase-12（1.00 ± 0.12、1.90 ± 0.29、1.56 ± 0.35、1.76 ± 0.23）的mRNA表达组间比较，差异有统计学意义（F = 8.45、5.38、6.38、8.21、11.31，P均 〈 0.05），除高氟剂量组的GRP78外，其他各染氟组的上述指标均高于对照组（P均 〈 0.05）；改水后，对照组，低、中、高氟剂量组GRP78（1.00 ± 0.36、0.75 ± 0.13、0.98 ± 0.41、0.47 ± 0.19）、XBP1-s（1.00 ± 0.25、0.70 ± 0.06、0.74 ± 0.17、0.65 ± 0.21）、ATF4（1.00 ± 0.51、0.66 ± 0.09、0.91 ± 0.34、0.81 ± 0.29）、CHOP（1.00 ± 0.36、0.92 ± 0.12、0.84 ± 0.16、0.67 ± 0.20）和Caspase-12（1.00 ± 0.45、0.65 ± 0.11、0.65 ± 0.25、0.51 ± 0.27）的mRNA表达组间比较，差异无统计学意义（P均 〉 0.05）；低、中、高氟剂量组XBP1-s、ATF4、CHOP、Caspase-12的mRNA表达改水前后比较差异有统计学意义（P均 〈 0.05），GRP78仅低氟剂量组比较差异有统计学意义（P 〈 0.05）。结论 氟暴露可以引起大鼠脾脏的ERS反应，使ERS相关基因表达上调，改水后有所下降，ERS反应减弱；改水措施有助于氟致免疫功能损伤的恢复。