雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。

Akt/mTOR通路相关蛋白在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP中的表达研究

目的:用大剂量冲击诱导法建立卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。通过检测Akt/mTOR通路相关蛋白在SKOV3/DDP细胞株中的表达,以探讨顺铂耐药的可能机制。方法:采用顺铂20μg/ml,反复间歇24h冲击诱导法建立卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,验证其耐药指数(RI)及生物学指标。Western blot法检测SKOV3/DDP、SK-OV3细胞中Akt/mTOR通路相关蛋白p-Akt、mTOR、p70S6K的表达。结果:(1)SKOV3/DDP细胞耐药指数(RI)为3.079,较SKOV3细胞升高约3倍;(2)SKOV3/DDP细胞的生长速度较SKOV3细胞明显减慢;SKOV3/DDP与SKOV3的G0～G1期细胞所占比例分别为59.02%,44.32%,两者比较差异显著(P=0.029),其中前者出现G0～G1期阻滞;(3)Western blot检测结果显示:①无顺铂作用下,SKOV3/DDP与SKOV3细胞相比,p-Akt蛋白水平升高,mTOR、p70S6K水平下降。②30μg/ml顺铂作用后,p-Akt蛋白表达水平在SKOV3细胞中显著升高,而在SKOV3/DDP细胞中变化不明显;p-mTOR蛋白水平在两者中均有上调趋势,但在SKOV3/DDP细胞中变化较显著;p70S6K蛋白水平亦在两者中均有上调趋势,但趋势不显著,SKOV3/DDP细胞的总体水平低于SKOV3细胞。结论:大剂量冲击诱导方式可以成功建立卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP;Akt/mTOR通路与顺铂耐药细胞株形成有关。

雷帕霉素逆转卵巢癌细胞系SKOV3/DDP顺铂耐药及其机制探讨

【目的】研究雷帕霉素对卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP的逆转作用并探讨其相关分子机制。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP的耐药倍数、雷帕霉素对其细胞毒性及逆转倍数;Western blot法检测雷帕霉素对细胞内Akt/m TOR相关通路蛋白表达的影响。【结果】(1)MTT法检测出雷帕霉素浓度分别为25、50、100、500和1 000μg/L对卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP的抑制率分别为4.48%、25.30%、35.86%、67.82%和81.43%。选择抑制率小于5%的最大雷帕霉素浓度即25μg/L作为逆转浓度;(2)卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药指数RI为2.21;(3)25μg/L雷帕霉素对卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP逆转倍数为1.63;(4)Western blot结果:加用雷帕霉素后,卵巢癌细胞SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的p-mTOR及其下游的p-p70s6k表达均明显降低。同时,雷帕霉素作用于SKOV3及SKOV3/DDP细胞后,均出现p-Akt反馈性增高。【结论】雷帕霉素对卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP具有耐药逆转作用,其机制可能为通过抑制Akt/mTOR通路中mTOR及下游相关蛋白表达进而抑制耐药细胞的增殖并促进其凋亡进程。

煤炭企业绿色化发展转型评价体系与路径研究

煤炭是我国能源消费的主体,也是不可再生的资源,但煤炭开采与利用往往伴随严重的环境污染与生态破坏。如果不进行绿色转型,传统高能耗、高污染、低回收的煤炭生产模式必然被淘汰。因此,宣传绿色理念、引入绿色技术,构建绿色的全产业链,成为煤炭企业转型发展的必由之路,这也是完成节能减排任务的重要内容。本文基于煤炭企业绿色化发展转型评价体系,提出了煤炭企业绿色化发展路径。

适应新形势,加大毕业生思想教育的工作力度

毕业生思想政治教育工作在高校德育工作中占有重要的地位 。

妊娠合并自身免疫性肝病的孕期管理

妊娠期肝脏疾病的发生率约为3%,是妊娠期肝功能障碍的最常见原因。妊娠合并自身免疫性肝病(autoi mmune liver disease, AILD)属于妊娠期非特有肝病,为妊娠前已存在的非病毒性肝脏疾病。AILD以肝胆组织作为免疫攻击对象,根据组织及临床特征,主要分为自身免疫性肝炎(autoi mmune hepatitis, AIH)、原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis, PBC).

ATM服务存在的主要问题及政策建议

随着我国金融电子化的改革深入，以自动柜员机（以下简称ATM）交易为代表的自助交易逐步成为现代商业银行为客户服务的主流渠道。然而，南于ATM机存在假钞识别系统不完善、安全防范措施相对薄弱、系统故障频发等服务问题，使ATM服务成为媒体关注的集点，需引起高度重视。

意外发现的宫颈癌宫旁广泛切除和阴道上段切除术的临床分析

[目的]总结因意外发现的宫颈癌接受宫旁广泛切除术和阴道上段切除术患者的临床病理特点、围手术期并发症以及预后.[方法]回顾性分析中山大学孙逸仙纪念医院2005年1月至2013年7月因子宫切除术后意外发现的宫颈浸润癌选择行宫旁广泛切除术的13例患者的临床资料及随访结果.[结果]13例患者平均年龄42.6岁.切除子宫的指征分别为CIN3 5例,功能失调性子宫出血3例,子宫脱垂2例,子宫肌瘤2例,子宫腺肌症1例.13例患者中鳞癌9例,腺癌4例;临床分期Ⅰb1期9例,Ⅰa2期4例;3例患者有肉眼可见病灶,病灶大小10～30 mm;在复核切除的子宫标本中有1例患者病灶浸润宫颈间质外1/2;10例无肉眼可见病灶的患者中浸润深度4～9 mm;4例患者LVSI阳性;两次手术间隔中位时间为20 d;手术平均时间242 min;术中平均出血量400 mL,术中输浓缩红细胞1例;术中损伤肠管1例.切除的组织术后病理结果13例患者均无病灶残留及宫旁组织浸润,仅1例患者出现淋巴结转移术后接受了同期放化疗.2例患者术后出现并发症,包括1例膀胱阴道瘘及1例小肠低位梗阻.拔除尿管平均时间为16.7 d;第一次拔除尿管平均残余尿量125 mL;住院时间平均17.5 d.中位随访时间为53个月,1例患者（第10例）出现阴道残端复发.[结论]宫旁广泛切除术和阴道上段切除术的围手术期并发症发生率较高,预防意外发生的宫颈癌是关键.

半乳糖凝集素-3与β-Catenin在上皮性卵巢癌中的表达和临床指标及预后关系

【目的】探讨半乳糖凝集素-3(Galectin-3 Gal-3)和β-Catenin在上皮性卵巢癌组织中的表达情况及临床意义。【方法】采用免疫组织化学方法,检测77例上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中Gal-3和β-Catenin蛋白表达的情况,并分析其与患者临床病理特征、治疗效果及预后的关系。【结果】在77例卵巢癌组织中,Gal-3阳性表达率为(70/77)90.9%。β-catenin阳性表达率为(65/77)84.4%。正常卵巢上皮不表达Gal-3和β-Catenin蛋白。Gal-3和β-Catenin的表达常表现为正相关关系,相关系数r=0.437,P=0.000。将弱阳性与强阳性合并为阳性后进行统计分析,Gal-3与病理类型相关,β-Catenin与病理类型、是否复发相关,P<0.05。单因素(Cox回归)分析显示,临床分期(P=0.019)、复发(P=0.007)、铂耐药(P=0.000)及Gal-3表达(P=0.007)为影响上皮性卵巢癌患者术后总体生存(OS)的因素。多因素分析显示,铂类耐药(HR=0.233,P=0.001)与Gal-3表达(HR=2.325,P=0.036)与预后明显相关。【结论】Gal-3和β-Catenin可能与上皮性卵巢癌的发生发展有关,并可作为上皮性卵巢癌预后不良的预测指标,Gal-3可能通过β-Catenin激活经典的Wnt通路,在在上皮性卵巢癌中,发生、发展中起重要作用。

上皮性卵巢癌的病理类型与术后紫杉醇联合铂类化疗疗效以及预后的关系

目的基于卵巢癌二元论分类,比较高级别与低级别上皮性卵巢癌患者对初次紫杉醇与铂类药物联合化疗的疗效以及预后有无不同。方法收集中山大学孙逸仙纪念医院经病理学诊断上皮性卵巢癌的患者197例,均为初次手术治疗的患者。按照卵巢癌二元论观点将其分为低级别肿瘤和高级别肿瘤两组,分别为95例和102例。比较两组患者的一般临床病理特征和铂敏感率,使用生存分析方法比较两组患者的预后差异。结果两组患者初次化疗疗效及预后情况:低级别组与高级别组的铂敏感率差异无统计学意义(68.5%vs 73.5%,P=0.287)。但是低级别肿瘤的无进展生存时间(PFS)(P<0.001)和总生存时间(OS)(P=0.001)均长于高级别肿瘤。FIGOⅠ~Ⅱ期患者两组铂敏感率(87.8%vs 100.0%,P=0.227)及PFS(P=0.061)和OS(P=0.062)差异无统计学意义;FIGOⅢ~Ⅳ期行满意减瘤术的患者中,低级别肿瘤组对铂类化疗药物欠敏感(58.6%vs 83.7%,P=0.018),但两者PFS(P=0.850)和OS(P=0.514)差异无统计学意义;中晚期行不满意减瘤术的患者中,两组患者铂敏感率差异无统计学意义(21.4%vs 44.4%,P=0.133),PFS(P=0.243)和OS(P=0.740)差异无统计学意义。结论中晚期行满意减瘤术的患者,高级别卵巢癌患者采用TP化疗方案较合适,低级别卵巢癌患者TP方案不一定是最好选择。对于低级别卵巢癌患者,有待开发更新更有效的化疗方案。

《2014 NCCN卵巢癌包括输卵管癌和原发性腹膜癌临床实践指南(第二版)》解读

近日，美国国立综合癌症网络（NCCN）公布了《2014 NCCN卵巢癌包括输卵管癌和原发性腹膜癌临床实践指南（第2版）》。现对新版指南进行简要解读。l与临床处理密切相关的主要更新1．1手术治疗原则更新①大多数患者采用开腹手术，部分患者可以选择微创手术进行手术分期和减瘤术，用于评估是否能进行满意的减瘤术，评估复发病灶能否切除等，但必须由有经验的妇科肿瘤医生施行。②儿童，青春期患者的手术原则与成人有所不同，保留生育功能者需进行全面的分期手术，但儿童期和青春期的早期生殖细胞肿瘤可不切除淋巴结。③交界性肿瘤是否切除淋巴结不影响总生存率，但大网膜仍需切除并进行腹膜多点活检。④复发患者二次减瘤术需满足下列条件：化疗结束1年以上、孤立病灶可以完整切除、无腹水。

俄罗斯中央银行极力推动本币结算扩大化的原因分析

2004年9月，中俄双方央行签署纪要，将边贸本币结算试点范围扩大到两国所有的边境口岸及俄方与我国接壤的六个联邦主体。在此后的连续三届分委会上，经过中俄双方代表团的共同努力，于2006年11月将两国本币结算扩大到中方黑龙江、吉林、内蒙古、新疆四省全境；2007年11月，两国央行签署将本币结算协定的适用范围扩展到边境旅游服务的纪要。在几次谈判过程中，俄方代表对本币协定扩大适用范围方面表现得异常积极，其背后的真正原因值得深入研究。

半乳糖凝集素-3对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)对上皮性卵巢癌细胞OVCAR3生物学行为的影响。方法使用小干扰RNA(siRNA)和质粒转染方法,分别下调和过表达Gal-3后,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,细胞划痕实验和Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,蛋白质印迹法检测c-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的蛋白表达水平。结果在上皮性卵巢癌OVCAR3细胞中过表达Gal-3后,c-myc、cyclin D1和MMP-7表达增加,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(P<0.05);下调Gal-3表达后,cmyc、cyclin D1和MMP-7表达下降,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.001)。结论 Gal-3能促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭,针对Gal-3的靶向治疗有望成为治疗上皮性卵巢癌的新靶点。

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株凋亡和周期的影响

目的:探讨雷帕霉素单独及联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,流式细胞术检测雷帕霉素单独及联合顺铂对细胞凋亡及周期分布的影响;实时RT-PCR检测对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。结果:雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖,引起G1期阻滞,S期及G2-M期细胞明显减少,使得大部分细胞处于有丝分裂间期,进而促进细胞凋亡,呈现明显的时间依从性,72 h效果最明显;联合顺铂凋亡率明显高于单独用药组(P<0.01)。实时RT-PCR结果显示,雷帕霉素作用24 h可引起mTOR mRNA表达下调,72 h抑制表达低于24 h(P<0.05)。结论:雷帕霉素作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路的mTOR位点,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与传统化疗药顺铂有协同效应,可增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。

超声乳化吸引器在改良保留神经广泛子宫切除术中的应用

【目的】观察使用超声乳化吸引器(CUSA)改良保留神经广泛全子宫切除术的临床效果。【方法】选取中山大学孙逸仙纪念医院妇科2011年1月至2014年12月住院接受腹式CUSA保留盆腔自主神经的广泛全子宫切除术+盆腔淋巴结切除术的宫颈癌患者16例作为实验组(NSRH组),按年龄和分期作为匹配条件,以1:1的比例在同期住院接受广泛全子宫切除术+盆腔淋巴结切除术的患者中随机选取16例宫颈癌患者作为对照组(RH组)。观察手术时间、术中出血量、术后膀胱、直肠功能恢复情况、围手术期并发症及住院时间。【结果】NSRH组的手术时间和术中出血量多于RH组,差别具有统计学意义,P<0.05,NSRH组尿管停留时间、残余尿量、肛门排气时间和排便时间、住院时间均少于RH组,差别具有统计学意义,P<0.05。两组均未出现围手术期并发症。【结论】使用CUSA改良保留神经广泛子宫切除术,能提高盆腔自主神经的辨认和分离,利于神经的保留,有助于术后膀胱功能和肠道功能的恢复。

外阴合并盆腔转移尤文肉瘤1例及文献复习

骨外尤文氏肉瘤（extrasketal Ewings sarcoma,EES）是一种罕见的发生在软组织的恶性肿瘤,其来源于神经外胚层,故临床又称为外周原发性神经外胚层瘤（peripheral primitive neuroectodermal tumor,PPNET）。发生于骨外系统,特别是泌尿生殖系统的尤文肉瘤非常少见。