LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)在体外构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒检测LDH释放总量;采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达;caspase-Glo3检测试剂盒评估caspase 3活性;双萤光素酶报告基因实验验证TUG1或PDCD4与miR-181b-5p的靶向关系。结果 与NG组比较,HG组细胞活性降低,LDH释放总量、凋亡率、Bax、cleaved caspase 3表达及caspase 3活性升高(P<0.05),敲低TUG1或上调miR-181b-5p表达可拮抗上述变化(P<0.05)。抑制miR-181b-5p可减轻TUG1沉默对高糖处理下心肌细胞活力和凋亡的影响(P<0.05)。PDCD4过表达可减弱miR-181b-5p上调对高糖处理的心肌细胞活力的促进作用和对凋亡的抑制作用。TUG1可通过吸附miR-181b-5p上调PDCD4表达(P<0.05)。结论TUG1通过下调miR-181b-5p、上调PDCD4表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡。

基于内质网应激-自噬通路研究茯苓多糖对2型糖尿病小鼠肠道屏障功能损伤和炎症反应的影响

目的:探讨茯苓多糖(PCP)对2型糖尿病(T2DM)小鼠肠道屏障功能损伤和炎症反应的影响及潜在机制。方法:取C57BLKS/JNju小鼠为对照(control)组,将db/db小鼠分为模型(model)组、低剂量(6 mg/kg)PCP(PCP-L)组、高剂量(12 mg/kg)PCP组(PCP-H)组、内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(Tm;1 mg/kg)组、PCP(12 mg/kg)+Tm(1 mg/kg)组,每组12只。进行口服葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验;检测小鼠空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);检测肠道通透性,以及血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)、内毒素(ET)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察小鼠肠组织病理学变化和肠上皮细胞自噬情况;检测肠组织闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、p-PERK、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、beclin-1和p62蛋白水平。结果:与control组相比,model组小鼠各时点血糖和曲线下面积,FBG、FINS和HOMA-IR,荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖浓度,肠组织损伤评分,血清DAO、D-LA、ET、IL-6、TNF-α和IL-1β水平,自噬小体数量,肠组织p-PERK/PERK比值、p-eIF2α/eIF2α比值、LC3-II/LC3-I比值,以及ATF4、CHOP和beclin-1蛋白水平显著升高,肠组织occludin、ZO-1和p62蛋白水平显著降低(P<0.05);与model组相比,PCP-L组和PCP-H组小鼠上述指标显著改善(P<0.05);Tm可显著激活自噬,减弱PCP对T2DM小鼠肠道屏障功能的保护作用(P<0.05)。结论:PCP可减轻T2DM小鼠肠黏膜损伤和炎症反应,改善肠道屏障功能,其作用机制可能与抑制ERS引起的自噬激活有关。

高良姜素抑制IRAK-1/MAPK/NF-κB信号通路对糖尿病大鼠心肌损伤的影响

[目的]探讨高良姜素通过抑制白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK-1)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路实现对糖尿病大鼠心肌损伤的缓解。[方法]高糖高脂连续饲养8周后,一次性腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)造模,糖尿病模型成功大鼠随机分为模型组、高良姜素组、高良姜素+pc-NC组、高良姜素+pc-IRAK-1组,每组8只。对照组8只大鼠正常饲养相同时间。血糖仪测量血糖水平;心脏超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF);Masson染色检测心肌组织纤维化情况,分析心肌胶原容积百分比(CVF);透射电镜观察心肌组织超微结构;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)水平;蛋白质免疫印迹检测心肌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、IRAK-1、p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达情况。[结果]建模后给药前,大鼠血糖水平升高(P<0.05),说明造模成功。给药后,模型组大鼠心肌细胞间质和血管旁着色深,且透射电镜下可见心肌结构紊乱,部分肌丝溶解;高良姜素组上述症状均有所缓解,高良姜素+pc-IRAK-1组症状介于模型组和高良姜素组之间。与对照组相比,模型组血糖、LVEDD、LVESD、CVF水平,MDA含量,iNOS、IRAK-1、p38 MAPK、NF-κB p65蛋白水平升高(P<0.05),LVEF水平,CK、NO含量,SOD、LDH活性,NOS活力及eNOS蛋白水平降低(P<0.05);与模型组相比,高良姜素组血糖、LVEDD、LVESD、CVF水平,MDA含量,iNOS、IRAK-1、p38 MAPK、NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05),LVEF水平,CK、NO含量,SOD、LDH活性,NOS活力及eNOS蛋白水平升高(P<0.05);在高良姜素处理基础上升高IRAK-1的表达可抑制高良姜素的作用效果。[结论]高良姜素可通过抑制IRAK-1/MAPK/NF-κB信号通路实现对糖尿病大鼠心肌损伤的缓解。

LncRNA GAS5靶向miR-103减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)靶向微小RNA(miR)-103,从而减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的机制。方法培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组(转染pEGFP-C1空载体)、GAS5过表达组(转染pEGFP-C1-GAS5载体)、GAS5过表达+mimic NC组(转染pEGFP-C1-GAS5+mimic NC)、GAS5过表达+miR-103 mimic组(转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic)。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平;液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IRS-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定miR-103与GAS5的靶向位点。结果诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显,呈"指环样"结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 m RNA水平降低(P<0.05);与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,miR-103 mRNA水平升高(P<0.05)。miR-103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达可减轻3T3L1脂肪细胞IR。

甲巯咪唑联合阿仑膦酸钠对甲状腺功能亢进症患者血清骨代谢指标的影响

目的探讨甲巯咪唑联合阿仑膦酸钠对甲状腺功能亢进症患者血清骨代谢指标的影响。方法将102例甲状腺功能亢进症患者按照随机数字表法分为两组,每组51例。两组均给予给予甲巯咪唑片治疗,研究组在此基础上给予阿仑膦酸钠片治疗,观察3个月。治疗前后比较两组血清骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶、降钙素、促甲状腺激素、游离三碘甲腺原氨酸、游离甲状腺素水平,比较两组不良反应发生率。结果治疗后两组骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶水平均较治疗前显著降低(P<0.01),降钙素水平较治疗前显著升高(P<0.01),研究组较对照组变化更显著(P<0.01)。治疗后两组血清促甲状腺激素水平较治疗前显著升高(P<0.01),游离三碘甲腺原氨酸、游离甲状腺素水平较治疗前显著降低(P<0.01),两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲巯咪唑联合阿仑膦酸钠可有效改善甲状腺功能亢进症患者骨代谢紊乱情况,安全性高,具有较高的应用价值。

钙剂联合骨化三醇治疗绝经后骨质疏松症对照研究

目的探讨绝经后骨质疏松症患者骨密度、骨代谢标志物水平及钙剂联合骨化三醇治疗对其的影响。方法对102例绝经后骨质疏松症患者(病例组)和102名健康体检者(健康组)L 1-4骨密度、骨代谢标志物(骨钙素、骨源性碱性磷脂酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b、I型胶原C末端肽)水平进行检测分析。将病例组患者按随机数字表法分为对照组与研究组(各51例),对照组予以钙剂治疗,研究组予以钙剂联合骨化三醇治疗,治疗24周。比较研究组和对照组治疗前后疼痛程度、L 1-4骨密度、骨代谢标志物水平、不良反应。结果病例组L 1-4骨密度显著低于健康组(P<0.01),骨钙素、骨源性碱性磷脂酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b、I型胶原C末端肽水平显著高于健康组(P<0.01)。治疗12周、24周末研究组视觉模拟评分法评分显著低于对照组(P<0.01);治疗24周末研究组L 1-4骨密度显著高于对照组(P<0.01),骨钙素、骨源性碱性磷脂酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b、I型胶原C末端肽水平显著低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝经后骨质疏松症患者体内骨密度、骨代谢标志物水平异常,对其予以钙剂联合骨化三醇治疗后患者骨密度增加,骨代谢标志物水平降低,骨骼疼痛症状缓解,安全性较高。

DC-CIK生物免疫疗法用于甲状腺癌术后的疗效及对患者IL-16、TNF水平的影响

目的研究DC-CIK生物免疫疗法用于甲状腺癌术后的疗效及对患者IL-16、TNF水平的影响。方法随机选取甲状腺癌患者60例,随机分为2组:化疗组采用CMF化疗方案辅助治疗,DC-CIK生物免疫疗法组(30例)在CMF化疗方案辅助治疗基础上进行DC-CIK生物免疫治疗,统计分析2组患者的临床疗效、T细胞水平、血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平。结果DC-CIK生物免疫疗法组患者的总缓解率为86.7%(26/30),显著高于CMF化疗方案辅助治疗组的60.0%(18/30)(P<0.05);CD4+Th17均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05),Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均显著高于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05),血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05)。结论DC-CIK生物免疫疗法能够有效降低甲状腺癌患者术后IL-16、TNF水平,提升临床疗效。

薯蓣皂苷激活PERK-Nrf2-HO-1通路改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗的机制探究

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的抗氧化作用,研究薯蓣皂苷改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法 将小鼠随机分成对照组,糖尿病组(建模),薯蓣皂苷低剂量组(建模+25 mg/kg薯蓣皂苷)、薯蓣皂苷中剂量组(建模+50 mg/kg薯蓣皂苷)、薯蓣皂苷高剂量组(建模+100 mg/kg薯蓣皂苷)和二甲双胍组(建模+100 mg/kg二甲双胍),各组小鼠9只。药物处理30 d后,对各组小鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和体重进行检测;通过HE染色检测小鼠肝脏组织病理学情况;通过试剂盒检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和活性氧自由基(ROS)水平及肝脏细胞凋亡指数(AI);通过Western blot检测肝脏组织中PERK、Nrf2、HO-1及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-6的表达情况。结果 与对照组相比,糖尿病组小鼠FBG、FINS、MDA、ROS、AI及Bax、cleaved caspase-6蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);而体重、SOD活性及PERK、Nrf2、HO-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与糖尿病组相比,薯蓣皂苷组能够明显降低糖尿病小鼠FBG、FINS、HOMA-IR、MDA、ROS、AI及Bax、cleaved caspase-6蛋白表达水平(P<0.05),明显提高小鼠体重、SOD活性及PERK、Nrf2、HO-1蛋白表达水平(P<0.05)。结论 薯蓣皂苷能够通过激活PERK-Nrf2-HO-1信号通路,减轻氧化应激及肝脏细胞凋亡,改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗。

左甲状腺素钠片联合甲巯咪唑对老年毒性弥漫性甲状腺肿患者甲状腺功能及生活质量的影响

目的研究左甲状腺素钠片联合甲巯咪唑对老年毒性弥漫性甲状腺肿患者甲状腺功能及生活质量的影响。方法选取我院196例老年毒性弥漫性甲状腺肿患者,按照随机抽签法对照组和观察组,各98例。对照组采取甲疏咪唑治疗,观察组采取左甲状腺素钠片+甲巯咪唑治疗。比较两组治疗效果、治疗前后甲状腺功能促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、甲状腺体积及生活质量(SF-36)评分。结果观察组总有效率为95.92%,高于对照组的85.71%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,观察组TSH水平较对照组高,FT3、FT4水平较对照组低,甲状腺体积较对照组小,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗3个月后总体健康、生理职能、躯体疼痛、生理功能评分较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左甲状腺素钠片联合甲巯咪唑对老年毒性弥漫性甲状腺肿患者,疗效显著,可显著改善甲状腺功能,提高生活质量。

探究精蛋白锌重组赖脯胰岛素联合伏格列波糖治疗老年肥胖T_2DM的临床效果

目的:探究精蛋白锌重组赖脯胰岛素联合伏格列波糖治疗老年肥胖T2DM的临床效果。方法:选取2016年9月～2018年6月我院收治的老年肥胖T2DM患者118例为研究对象,按照随机数字表法分为观察组与对照组,每组59例。对照组予精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液治疗,观察组予精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液联合伏格列波糖治疗。观察两组治疗效果、治疗前后血糖及血脂指标变化。结果:观察组总有效率明显高于对照组,P<0.05;治疗后,观察组HbAlc、2 hPBG、FPG、TC、TG、LDL-C指标均明显低于对照组,HDL-C指标均明显高于对照组,P<0.05。结论:精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液联合伏格列波糖应用于老年肥胖T2DM患者,疗效显著,可有效控制血糖指标,改善血脂指标。

木犀草素对抗2型糖尿病大鼠心肌纤维化的机制研究

目的 探究木犀草素(LUT)是否通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子3(SIRT3)信号对抗2型糖尿病(T2D)大鼠心肌纤维化。方法 体内构建T2D模型。Masson染色观察病理学特征并测定心肌胶原容积分数(CVF);Western blot检测纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白I(collagen I)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK和SIRT3表达。体外培养心肌细胞H9C2,流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot分析各蛋白表达。结果 在体内,T2D模型大鼠心肌间质胶原纤维增加,CVF增大,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3水平降低(P<0.05);LUT干预后可明显改善以上情况(P<0.05)。在体外,高糖诱导后H9C2细胞凋亡水平升高,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3蛋白水平降低(P<0.05);LUT干预可改善HG对H9C2细胞的影响(P<0.05);添加Com. C可逆转LUT对高糖诱导的H9C2细胞的作用(P <0.05)。结论 LUT激活AMPK-SIRT3信号对抗T2D大鼠心肌纤维化。

格列齐特缓释片联合沙格列汀对老年2型糖尿病患者FPG、2hPG水平变化及生活质量的影响

目的探讨老年2型糖尿病患者采用沙格列汀联合格列齐特缓释片治疗的临床疗效。方法随机将治疗2型糖尿病的194例患者分为两组,A组采用沙格列汀治疗,B组在A组治疗基础上联合格列齐特治疗,比较两组的疗效差异。结果两组治疗前FPG、2hPG水平、SF-36评分比较差异不明显(P>0.05),B组患者治疗后2hPG、FPG水平明显低于A组,SF-36评分明显高于A组(P <0.05)。结论 2型糖尿病患者采用沙格列汀联合格列齐特缓释片治疗,能有效控制患者血糖水平,改善其生活质量,适合用于临床推广。