不同单位保种的艾氏腹水癌细胞核型及DNA含量的比较研究

目的 比较研究三个单位保种的艾氏腹水癌细胞（EAC）染色体数目及DNA含量。方法 取腹腔接种EAC 6 d的KM小鼠，腹腔注射秋水仙碱，取腹水，经低渗处理，固定后涂片，染色，显微镜下染色体计数；腹水传代的EAC，用70%乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果 山东省医学科学院药物研究所（山东）、武汉大学典型培养物保藏中心（武汉）和北京市肿瘤研究所（北京）保种的艾氏腹水癌细胞株，其染色体均数分别为28.31±7.78、29.16±12.25、23.22±10.21条，方差分析表明，除北京与山东外，武汉与北京、武汉与山东两两比较有极显著差异（P<0.01）。直方图分析显示主流染色体范围分别为25-27、22-24、22-24条。北京艾氏腹水癌细胞 DNA含量最多，山东艾氏腹水癌细胞DNA含量最少。结论 三个单位的艾氏腹水癌细胞株在某些方面已出现差异。

河北省实验动物从业人员现状及教育培训对策

实验动物是生命科学研究和技术创新的重要基础和条件,是＂活的精密仪器和试剂＂,作为人类的替难者,在医、药等科学研究中,发挥着重要作用。抓好实验动物工作,人是关键因素。实验动物许可证制度的实施对实验动物从业人员提出了具体要求。《实验动物许可证管理办法》明确规定,申请实验动物许可证,应＂具有保证正常生产和保证动物质量的专业技术人员、熟练技术工人及检测人员＂、

河北省科技基础条件网络平台暨实验动物信息网建设及运行情况

科技基础条件平台是服务于科学发展与技术创新的基础支撑体系。科技基础条件网络平台是科技基础条件平台的重要组成部分。按照河北省科技基础条件平台建设的总体要求,2005年批准建设＂河北省科技基础条件网络平台＂,其中＂实验动物科研与供应信息网＂是河北省科技基础条件网络平台的重要组成部分,作为整体网络平台的一部分和反映我们工作的窗口，自开通以来运行良好，为促进科技工作的发展发挥了重要作用。

不同单位保存的艾氏腹水癌细胞(EAC)的某些生物学特性比较研究

目的 比较研究不同单位保种的EAC瘤株生物学特性的差异。方法 选择研究了北京市肿瘤研究所、山东省医学科学院药物研究所及武汉大学保种中心保存EAC细胞的大小 ,细胞株体外培养时对血清的依赖性 ,接种小鼠皮下建立肿瘤动物模型肿块生长曲线 ,建立的动物模型对环磷酰胺CTX治疗的敏感性等指标。结果 发现三个单位保存的EAC细胞形态及大小基本一致 ;北京EAC体外培养容易生长 ,7 5%NCS即可生长良好 ,山东及武汉EAC体外培养生长力较弱 ;皮下接种BALB c小鼠后 ,北京EAC最易生长肿瘤 ,武汉EAC次之 ,山东EAC最差 ;建立的动物模型对CTX治疗的敏感性 ,依次为北京EAC ,武汉EAC ,山东EAC ,用CTX治疗的抑瘤率相应为 82 9% ,71 9% ,50 %。结果 可见三个不同单位保种的EAC瘤细胞生物学特性确已存在显著差异。

实验动物科学发展趋势及存在问题初探

实验动物科学发展趋势及存在问题初探徐增年李兴琴河北医科大学实验动物学部（石家庄０５００１７）实验动物科学作为生命科学研究基础学科，已受到政府的重视和科学家的关注。为此人们投入了相当可观的人力、物力和财力，以促进本学科的发展。目前，国外发达国家正围绕...

不同来源的艾氏腹水癌细胞株蛋白质特性的电泳及免疫组织化学比较研究

目的比较 3种来源的艾氏腹水癌 (Ehrlichascitescarcinoma,EAC)细胞蛋白质的特性。方法采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis ,PAGE)和免疫组织化学染色的方法观察 3种来源的EAC细胞蛋白质组成及Gai、TrkA、PDGF A、CDK2和NF κBp6 5抗体蛋白质表达。 结果电泳结果显示 ,北京来源的EAC蛋白质条带数最多 (2 8条 ) ,其次是山东来源的EAC(2 5条 ) ,武汉来源的EAC最少 (2 2条 ) ;免疫组织化学染色法测定 3个来源的EAC细胞的Gai、TrkA、PDGF A、CDK2和NF κBp6 5抗体蛋白质表达 ,结果不同来源的EAC与抗体的反应情况不同 ,山东来源的EAC 5种抗体的阳性表达分别为 0 %、 2 3.0 %、 0 %、 8.5 %和83.3%,北京来源的EAC分别为 77.8%、 6 .0 %、 9.0 %、 2 4 .0 %和 91.4 %,武汉来源的EAC分别为78.3%、4 .8%、8.0 %、2 7.8%和 10 0 %。结论 3种来源的EAC细胞蛋白质组成不仅有定量差异 ,而且有定性差异。

三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达

目的 比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法 对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果 武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。

大豆低聚糖对大鼠血脂和抗氧化作用的影响

大豆低聚糖对大鼠血脂和抗氧化作用的影响ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＡｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆＳｏｙｂｅａｎＯｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎＲａｔｓ王素敏刘福英徐增年＊＊董玉枝王薇刘树锋＊＊（河北省医学科学院生化研究室...

胡桃抗衰老作用的实验研究

胡桃对老龄小鼠某些衰老指标影响的结果表明:1.增强脑和肾Na—K—ATP酶活性28％和41.96％;2.降低血清总胆固醇含量29.95％,增加血清HDL含量32.22％;3.提高RBC—SOD活性18.40％,降低血清LPO含量38.17％;4.增加胸腺指数56.55％。提示胡桃对老龄小鼠具有抗衰老作用。

大豆低聚糖对大鼠实验性高脂血症的防治作用

大豆低聚糖对大鼠实验性高脂血症的防治作用王素敏，刘福英，董玉枝，徐增年，王薇，刘树锋（河北省医学科学院生化研究室，石家庄０５００２１）关键词：大豆低聚糖；血脂ＴｈｅＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｎｄＣｕｒａｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＳｏｙｂｅａｎＯｌｉｇｏｓａ...

大豆低聚糖对高脂大鼠脂质过氧化的影响

大豆低聚糖对实验性大鼠高脂血症的防治研究结果证明：能降低血清总胆固醇（ＴＣ）（Ｐ＜０．０５），提高血清高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）（Ｐ＜０．００１），提高ＨＤＬ－Ｃ／ＴＣ比值（Ｐ＜０．００１），降低血清甘油三酯（ＴＧ）水平（Ｐ＜０．００１）；降低心肌组织过氧化脂质（ＬＰＯ）水平（Ｐ＜０．０１），提高心肌组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性（Ｐ＜０．０１），有抑制脑组织过氧化损伤的趋势。结果提示：大豆低聚糖具有降低高脂大鼠血脂水平，拮抗过氧化损伤的作用。

S180克隆细胞株的选择及其细胞特性研究

目的 对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的S180进行了克隆培养，根据克隆细胞的腹水生长特性，从中选出8株克隆，对不同克隆S180细胞的特性进行研究。方法 免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布，流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量，扫描电镜观察克隆细胞表面结构，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果 其中3株克隆从可见腹水之日起，腹水即为血性；1株微显血性；4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构，各具特点，有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量，分别为8.5, 9.3，7.9，8.5，8.6，8.3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同，一旦与某抗体反应阳性，则阳性细胞比率均在97%以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞S1H10及S2D9的电泳图谱，S1H10克隆细胞有33条带，S2D9克隆细胞有30条带。 结论 8株克隆细胞各具特点。

肥胖易感及肥胖抵抗动物模型的建立与评价

建立肥胖易感(OP)和肥胖抵抗(OR)大鼠模型并进行评价。以高脂饲料喂饲雄性SD大鼠3周。根据体重筛选出OP和OR大鼠。继续喂饲高脂饲料10周,期间检测大鼠体重、体长,计算Lee’s指数、BMI指数。实验结束处死动物,测量体脂肪含量。OP组动物与对照组相比,体重、Lee’s指数、BMI指数、体脂含量等指标均具有显著性差异。OR组动物的各项指标与对照组动物相近,提示用高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗的动物模型造模成功。

玉米秸作为大鼠垫料对其生长发育及繁殖性能的影响

目的 对比观察不同原料制成的垫料对SD大鼠繁殖性能及其仔鼠生长发育的影响 ,探讨以玉米秸为原料制作实验动物新型垫料的可行性。方法 测定使用玉米秸、卫生纸、刨花三种垫料时SD大鼠的繁殖性能指标及仔鼠体重变化 ,并进行比较分析。结果 出生仔数、初生窝重、初生重三个指标三组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;离乳率三组间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,玉米秸组与卫生纸组差异有极显著性 (P <0 .0 1) ,玉米秸组最高 ,为99.79% ;三组之间胎次间隔差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,玉米秸组为 31.4 1d ;仔鼠生长发育指标 ,三组之间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 玉米秸作为垫料时 ,SD大鼠能保持较高的繁殖性能 ,可以作为大鼠垫料使用。

二种血瘀证动物模型内皮功能及血液流变学的比较

目的通过对二种血瘀证大鼠模型的内皮素(ET)、一氧化氮(NO)和血液流变学指标进行比较,探讨其在血瘀证量化诊断中的意义。方法SD大鼠50只,分别建立气虚血瘀证和气滞寒凝血瘀证动物模型,测定二种模型血浆ET和NO水平,用LBY-N6B全自动自清洗血流变仪对二种模型进行血液流变学的分析。结果(1)与模型对照组比较,气虚血瘀模型组全血黏度低切变率、毛细管血浆黏度均明显增加(分别为P<0.05),血浆ET水平显著升高(P<0.01),NO水平显著降低(P<0.01);(2)与空白对照组比较,气滞寒凝血瘀模型组全血黏度低切、中切、高切以及毛细管血浆黏度均明显增加(分别为P<0.01),红细胞聚集指数增加(P<0.05),血浆ET水平显著升高(P<0.01),NO水平显著降低(P<0.01)。结论内皮细胞损伤,ET和NO比例失衡可能是血瘀证量化诊断的重要指标。

四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立

目的探索tet-on四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线,构建四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼,为条件型功能基因研究及组织特异转基因斑马鱼疾病模型的建立奠定基础。方法构建肝脏特异启动子fabp10启动rt TA蛋白表达的重组质粒pfabp10-rt TA,联合p TRE-Tight-BI-Ac GFP1质粒转染He La细胞后给予doxycycline诱导,Western blot法验证;pfabp10-rt TA联合p TRE-Tight-BI-Ac GFP1质粒注射斑马鱼1-细胞期受精卵后,30μg/m L doxycycline诱导,荧光筛选稳定整合个体。结果共转染pfabp10-rt TA与p TRE-Tight-BI-Ac GFP1的He La细胞经1μg/m L浓度doxycycline诱导培养液诱导,GFP表达量显著高于不加doxycycline培养液对照组;筛选获得的稳定整合斑马鱼幼鱼,在浓度为30μg/m L doxycycline条件下,肝脏明显有绿色荧光表达,对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光。结论 Tet-On四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑马鱼肝脏特异表达外源基因;利用该技术可建立诱导肝脏表达GFP建立转基因斑马鱼品系,为建立条件型转基因斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供良好的模式动物工具。

复肝春6号对荷H_(22)小鼠抑瘤作用的实验研究

目的研究复肝春6号(FGC-6)抗肝癌作用及与5-氟尿嘧啶(5-Fu)的协同抗肿瘤作用。方法建立H22荷瘤小鼠模型并随即分为6组:模型组、5-Fu大、小剂量组、FGC-6大、小剂量组、FGC-6与5-Fu联用组,各组连续给药10 d。观察各组小鼠的瘤重;检测荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞分泌IL-2的能力。结果各组用药均可明显抑制H22移植瘤的生长,与模型组比较差异显著(P<0.05);FGC-6与5-Fu联用时,据金氏公式计算q值为1.37,大于1.15;与模型组比较,FGC-6大剂量组及FGC-6与5-Fu联用组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞IL-2分泌能力明显提高(P<0.05),而5-Fu大剂量组的如上3指标均明显降低(P<0.05)。结论FGC-6对H22肝癌移植瘤生长有明显抑制作用,其机制可能与提高荷瘤小鼠机体免疫功能有关;小剂量FGC-6与小剂量5-Fu联用具有协同抗肿瘤作用。

Baff转基因斑马鱼的构建及相关基因表达检测

通过RT-PCR法由斑马鱼脾脏克隆B细胞刺激因子baff基因,构建过表达斑马鱼baff且携带有绿色荧光标记蛋白的重组质粒pIRES2-GFP-baff;胚胎显微注射获得转基因斑马鱼胚胎;通过GFP荧光标记跟踪并筛选转基因阳性鱼;Western blot法鉴定Baff-GFP融合蛋白表达情况;qPCR检测baff,GFP及baff下游相关基因bcl-2,il-4mR-NA表达情况。结果表明细胞、胚胎及幼鱼baff和GFP均高表达,baff下游基因bcl-2激活和il-4基因抑制表达。通过胚胎显微注射法可成功获得过表达baff的转基因斑马鱼,此研究为建立红斑狼疮转基因斑马鱼模型及高通量筛选Baff拮抗剂奠定了基础。

HFJ和MIJ近交系大鼠RAPD特征与比较研究

目的利用人工合成的PCR随机引物,对本单位培育的HFJ和MIJ近交系大鼠基因组DNA进行扩增,建立HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征图谱;选择常用近交系大鼠Lewis和F344作为对照品系,观察HFJ和MIJ大鼠与对照品系大鼠的RAPD多态性。方法用酚-氯仿法分别提取4个不同品系大鼠的基因组DNA,从60条随机引物中筛选能够得到清晰扩增条带的30条引物,对HFJ和MIJ大鼠DNA进行扩增。再从30条引物中随机选择12条,对4个品系大鼠基因组DNA扩增,并对扩增条带多态性比较分析。结果 30条引物对HFJ和MIJ大鼠DNA进行扩增,均能获得1～7个较清晰条带,除引物O～08外,条带的分子大小均在200～1 100 bp之间,两品系的引物O-08扩增结果,均在2 000 bp以上的近原点处扩增出1条清晰的条带。HFJ和MIJ大鼠品系内个体间和两个品系之间,扩增的结果均完全一致;用12条随机引物对4个品系大鼠同时扩增,HFJ和MIJ大鼠扩增结果一致,与Lewis和F344比较,有5个引物出现差异条带。结论用30条随机引物建立了HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征性图谱。由于两品系来源于同一对Wistar封闭群大鼠,虽然遗传特性有显著差异,但是在所选30条引物扩增时,未发现多态性。两品系与Lewis和F344之间存在多态性条带。

犬传染性肝炎核酸疫苗的构建及免疫效果评价

目的获得犬传染性肝炎保护性抗原Loop重组蛋白及pVAX1-CpG-Loop重组质粒,并评价其诱导特异性免疫应答的水平。方法PCR扩增犬腺病毒Ⅰ型抗原表位Loop基因,构建至原核表达载体pET28a(+)和真核表达载体pVAX1-CpG(+)中;pET28a-Loop重组质粒转化BL21(DE3),表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、亲和层析纯化抗原蛋白,采用肌内注射、电转导方法,prime-boost免疫策略,pVAX1-CpG-Loop重组质粒股四头肌注射免疫小鼠,抗原蛋白加强免疫后进行免疫效果的评价。结果ELISA方法检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生,淋巴细胞增殖实验(MTT和CCK-8)、细胞因子和CD4+、CD8+分子测定表明DNA疫苗可以诱发TH1型免疫;中和实验表明表达蛋白诱导小鼠产生的抗体具有中和病毒的作用。结论构建的犬传染性肝炎pVAX1-CpG-Loop核酸疫苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力。