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结构域B在鼠冠状病毒S蛋白的抗原性及膜融合中的作用
1
作者
徐娅佳
王玉燕
叶荣
《微生物与感染》
2020年第1期22-30,共9页
棘突(spike,S)蛋白是冠状病毒表面必不可少的跨膜糖蛋白,在病毒进入宿主细胞时具有结合受体和诱导膜融合的双重作用。大部分冠状病毒S蛋白的受体结合域位于S1-CTD(即相对应的结构域B),而经典的乙型冠状病毒模型鼠肝炎病毒(mouse hepatit...
棘突(spike,S)蛋白是冠状病毒表面必不可少的跨膜糖蛋白,在病毒进入宿主细胞时具有结合受体和诱导膜融合的双重作用。大部分冠状病毒S蛋白的受体结合域位于S1-CTD(即相对应的结构域B),而经典的乙型冠状病毒模型鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)的受体mCEACAM1a与S1-NTD(即相对应的结构域A)结合,其结构域B的作用仍未完全清楚。本研究通过构建结构域B和S2膜融合元件的缺失突变体,并使其在鼠神经母细胞瘤细胞系Neuro-2a内成功表达,证实了结构域B对病毒S蛋白导致的细胞-细胞间膜融合是必需的。用不同方法处理的病毒颗粒作为抗原免疫小鼠,所获得的多克隆抗体进一步显示,结构域B不但是S蛋白的主要抗原决定簇,而且能诱导中和抗体明显抑制病毒感染和S蛋白介导的膜融合作用。此结果为阐述不同冠状病毒的致病性与感染性差异提供了新思路。
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关键词
鼠冠状病毒
棘突蛋白
结构域B
优势抗原
膜融合
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职称材料
鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析
被引量:
3
2
作者
郭佳慧
文荣
+4 位作者
王玉燕
张浩旸
刘红
徐娅佳
叶荣
《微生物与感染》
2017年第2期79-88,共10页
核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus,MHV)为乙型冠状病毒属的原型病毒,是研究冠状病毒N蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露N蛋...
核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus,MHV)为乙型冠状病毒属的原型病毒,是研究冠状病毒N蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露N蛋白,另用原核表达纯化的重组N蛋白分别免疫小鼠,制备多克隆及单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白免疫印迹分析结果显示两类抗体均具有高灵敏度和特异度,与甲型冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的N蛋白无交叉反应。原核表达缺失突变的N蛋白分析结果显示,多克隆抗体与单克隆抗体2E6识别的鼠冠状病毒N蛋白抗原决定簇完全一致,位于N端结构域(N-terminal domain,NTD)C端与SR之间的58个氨基酸残基内。此外,基于单克隆抗体2E6的ELISA及免疫荧光法能检测到感染细胞中和培养上清液中的N蛋白组分,且其含量与病毒复制的滴度一致。这些结果表明,鼠冠状病毒复制过程中粒子与细胞中的N蛋白可能维持相似的结构,使NTD与SR之间的部分氨基酸残基一直暴露在表面,从而形成了优势抗原决定簇。
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关键词
鼠冠状病毒
核衣壳蛋白
抗体
抗原决定簇
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职称材料
DC-SIGN与mCEACAM1a分子相互作用调控鼠冠状病毒复制
被引量:
3
3
作者
张浩旸
郭佳慧
+5 位作者
赵兰娟
姚茜茜
文荣
徐娅佳
王玉燕
叶荣
《微生物与感染》
2018年第3期136-145,共10页
树突细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)和肝/淋巴结特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(liver/lymph node-specific interc...
树突细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)和肝/淋巴结特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(liver/lymph node-specific intercellular adhesion molecules-3-grabbing non-integrin,L-SIGN)是钙离子依赖的C型凝集素受体,通过识别病毒粒子表面含甘露聚糖或果糖寡聚糖的分子介导病毒进入细胞,但其在调节病毒复制中的作用较少被关注。本研究通过建立稳定表达DC-SIGN和L-SIGN及其功能域嵌合体的细胞系,分析两者过表达对鼠冠状病毒复制的影响。结果显示,L-SIGN比DC-SIGN更能显著抑制病毒复制,这种差异与两者胞内区序列和基序组成不同有关;鼠冠状病毒感染导致细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路分子磷酸化下调,过表达DC-SIGN和L-SIGN可抑制这种下调趋势。在没有鼠癌胚抗原相关细胞黏附分子1(mouse carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,mCEACAM1)存在时,DC-SIGN不能介导病毒感染。这些结果提示,DC-SIGN通过与mCEACAM1a分子相互作用和调节细胞信号通路分子功能以调控鼠冠状病毒复制。
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关键词
DC-SIGN
mCEACAM1a
相互作用
鼠冠状病毒
复制
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职称材料
题名
结构域B在鼠冠状病毒S蛋白的抗原性及膜融合中的作用
1
作者
徐娅佳
王玉燕
叶荣
机构
复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系
出处
《微生物与感染》
2020年第1期22-30,共9页
基金
国家自然科学基金(31970155、31100116)。
文摘
棘突(spike,S)蛋白是冠状病毒表面必不可少的跨膜糖蛋白,在病毒进入宿主细胞时具有结合受体和诱导膜融合的双重作用。大部分冠状病毒S蛋白的受体结合域位于S1-CTD(即相对应的结构域B),而经典的乙型冠状病毒模型鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)的受体mCEACAM1a与S1-NTD(即相对应的结构域A)结合,其结构域B的作用仍未完全清楚。本研究通过构建结构域B和S2膜融合元件的缺失突变体,并使其在鼠神经母细胞瘤细胞系Neuro-2a内成功表达,证实了结构域B对病毒S蛋白导致的细胞-细胞间膜融合是必需的。用不同方法处理的病毒颗粒作为抗原免疫小鼠,所获得的多克隆抗体进一步显示,结构域B不但是S蛋白的主要抗原决定簇,而且能诱导中和抗体明显抑制病毒感染和S蛋白介导的膜融合作用。此结果为阐述不同冠状病毒的致病性与感染性差异提供了新思路。
关键词
鼠冠状病毒
棘突蛋白
结构域B
优势抗原
膜融合
Keywords
Murine coronavirus
Spike protein
Domain B
Dominant antigen
Membrane fusion
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析
被引量:
3
2
作者
郭佳慧
文荣
王玉燕
张浩旸
刘红
徐娅佳
叶荣
机构
复旦大学基础医学院病原生物学系
出处
《微生物与感染》
2017年第2期79-88,共10页
基金
国家自然科学基金(31170786
31100116)
文摘
核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus,MHV)为乙型冠状病毒属的原型病毒,是研究冠状病毒N蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露N蛋白,另用原核表达纯化的重组N蛋白分别免疫小鼠,制备多克隆及单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白免疫印迹分析结果显示两类抗体均具有高灵敏度和特异度,与甲型冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的N蛋白无交叉反应。原核表达缺失突变的N蛋白分析结果显示,多克隆抗体与单克隆抗体2E6识别的鼠冠状病毒N蛋白抗原决定簇完全一致,位于N端结构域(N-terminal domain,NTD)C端与SR之间的58个氨基酸残基内。此外,基于单克隆抗体2E6的ELISA及免疫荧光法能检测到感染细胞中和培养上清液中的N蛋白组分,且其含量与病毒复制的滴度一致。这些结果表明,鼠冠状病毒复制过程中粒子与细胞中的N蛋白可能维持相似的结构,使NTD与SR之间的部分氨基酸残基一直暴露在表面,从而形成了优势抗原决定簇。
关键词
鼠冠状病毒
核衣壳蛋白
抗体
抗原决定簇
Keywords
Murine coronavirus
Nucleocapsid protein
Antibody
Antigenic determinant
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
DC-SIGN与mCEACAM1a分子相互作用调控鼠冠状病毒复制
被引量:
3
3
作者
张浩旸
郭佳慧
赵兰娟
姚茜茜
文荣
徐娅佳
王玉燕
叶荣
机构
复旦大学基础医学院病原生物学系
第二军医大学微生物学教研室
出处
《微生物与感染》
2018年第3期136-145,共10页
基金
国家自然科学基金(31170786
31100116)
文摘
树突细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)和肝/淋巴结特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(liver/lymph node-specific intercellular adhesion molecules-3-grabbing non-integrin,L-SIGN)是钙离子依赖的C型凝集素受体,通过识别病毒粒子表面含甘露聚糖或果糖寡聚糖的分子介导病毒进入细胞,但其在调节病毒复制中的作用较少被关注。本研究通过建立稳定表达DC-SIGN和L-SIGN及其功能域嵌合体的细胞系,分析两者过表达对鼠冠状病毒复制的影响。结果显示,L-SIGN比DC-SIGN更能显著抑制病毒复制,这种差异与两者胞内区序列和基序组成不同有关;鼠冠状病毒感染导致细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路分子磷酸化下调,过表达DC-SIGN和L-SIGN可抑制这种下调趋势。在没有鼠癌胚抗原相关细胞黏附分子1(mouse carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,mCEACAM1)存在时,DC-SIGN不能介导病毒感染。这些结果提示,DC-SIGN通过与mCEACAM1a分子相互作用和调节细胞信号通路分子功能以调控鼠冠状病毒复制。
关键词
DC-SIGN
mCEACAM1a
相互作用
鼠冠状病毒
复制
Keywords
DC-SIGN
mCEACAM1a
Interaction
Murine coronavirus
Replication
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结构域B在鼠冠状病毒S蛋白的抗原性及膜融合中的作用
徐娅佳
王玉燕
叶荣
《微生物与感染》
2020
0
下载PDF
职称材料
2
鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析
郭佳慧
文荣
王玉燕
张浩旸
刘红
徐娅佳
叶荣
《微生物与感染》
2017
3
下载PDF
职称材料
3
DC-SIGN与mCEACAM1a分子相互作用调控鼠冠状病毒复制
张浩旸
郭佳慧
赵兰娟
姚茜茜
文荣
徐娅佳
王玉燕
叶荣
《微生物与感染》
2018
3
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职称材料
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