酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究

【目的】为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;【方法】构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apa1dn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性。将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况。将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex75分子筛纯化。纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛。【结果】成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apa1dn16蛋白。得到了分子量约为36kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上。质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确。将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶。此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apa1dn16蛋白晶体。【结论】利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apa1dn16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究。

急性心肌梗死早期局部与整体左心室功能变化的基础研究

目的探究急性心肌梗死早期局部与整体左心室功能的变化。方法成年杂种犬9只,使用球囊封堵前降支远端的方法建立实验犬AMI模型。结果左心室梗死区在AMI1H出现收缩舒张功能明显减低并缓慢恢复。非梗死区室壁动度缓慢减低。结论应用TDI和AQ技术可敏感、精确测量并评价上述心功能变化。

STEMI患者急诊PCI前口服阿托伐他汀对炎症介质及左心室功能的影响

目的探讨急性ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者在接受急诊经皮冠状动脉介入手术(PCI)前口服阿托伐他汀40 mg,对外周静脉和梗死相关冠状动脉(ICA)中的炎症介质水平与左心室功能的影响。方法选取接受急诊PCI的STEMI患者60例,随机分为治疗组(PCI术前口服阿托伐他汀40 mg,n=32)和对照组(n=28)。两组分别于PCI术前即刻、术后24 h抽取外周静脉血和术中抽取ICA血,测定并比较白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和可溶性CD40配体(sCD40L)的浓度;PCI术后1周常规行超声心动图检查,测定左心室舒张末期容积(EDV-LV)、左心室收缩末期容积(ESV-LV)、左心室射血分数(LVEF)、左心室峰值射血率(PER-LV)、左心室峰值充盈率(PFR-LV)。结果组间对比,PCI术前,治疗组外周静脉中IL-6的浓度显著低于对照组;PCI术后24 h,治疗组外周静脉血中的IL-6、sCD40L和MMP-9浓度显著低于对照组。AMI后第7天,治疗组的EDV-LV、ESV-LV、LVEF、PER-LV、PFR-LV较对照组无显著变化;组内对比,在两组患者中,PCI术前ICA中的IL-6s、CD40L和MMP-9浓度均显著高于其外周静脉水平。术后24 h,所有患者外周静脉血IL-6和MMP-9的浓度均显著增高(P均<0.05),而sCD40L的浓度只有对照组明显升高(P均<0.05)。结论STEMI发生时,ICA中的MMP-9I、L-6和sCD40L的水平显著高于外周静脉,而患者于急诊PCI术前口服阿托伐他汀能够不同程度降低炎症介质的水平,但对近期左心室功能无明显改善。