多元整合的实验室安全管理体系建设

通过对国外发达国家代表性高校实验室安全管理的比较,结合国内高校实验室安全管理的典型案例分析,发现国内高校在快速吸收借鉴国际先进经验的同时,及时融入本土化优势元素,创建出既能与国际接轨,又能体现中国特色的多元整合的高校实验室安全管理体系。针对当前实验室安全体系的研究热点以及存在问题,通过加强党的领导,完善安全专项巡察、人员培训、准入管理等机制,建设信息化系统和规范化实验室,推动风险评估、系统化检查与责任管理有机融合,多元整合有效提升了安全管理成效,共同推进高校实验室安全管理水平。

据实场景式实验室事故应急演练

据实场景式应急演练是近几年出现的实验室事故应急演练模式,在几所高校中已有成功实践案例。高校根据实验室实际情况设计演练场景,让学生自主设计应急响应方案。据实场景式应急演练能够充分锻炼学生对实验室事故的应急响应能力,同时能帮助学校和学院进一步完善应急预案,提升应急管理水平。

UiO-66孔道调控及四甲苯吸附分离性能的实验研究

为了对多孔材料孔道结构实现调控,开展了UiO-66孔道调控及四甲苯的吸附分离研究。通过加入调节剂乙酸和改变配体种类,经溶剂热法合成5种UiO-66材料;经氮气吸附-脱附表征分析,获得UiO-66孔径分布和比表面积,发现乙酸的加入对UiO-66的孔径影响不大,而氨基的引入使孔径分布变窄,尺寸有所减小;通过静态吸附实验,以均四甲苯和连四甲苯的选择性为指标,研究了5种UiO-66材料对于均四甲苯和连四甲苯混合溶液的吸附性能,发现其对四甲苯的分离选择性主要归因于UiO-66不同的孔道结构。该研究为类似MOFs材料的合成、孔道调控,及对同分异构体的吸附分离性能的改变提供了参考。

新工科背景下高校学生实验室安全素养培育路径探究

针对高校实验室安全文化缺失、安全培训不成体系、安全课程体系不完整和安全管理体系不健全的现状,聚焦于新工科背景下高校学生实验室安全素养教育体系,明确主体责任,建立分级管理和安全课程体系,强化实验室准入机制,并在安全教育过程中融入思政元素,厚植安全文化土壤。由此营造良好的实验室安全文化氛围,提升学生安全素养与意识。可为高校学生实验室安全素养培育提供参考。

人肝细胞癌中促凋亡基因bax的原位检测及其临床意义

目的 研究促凋亡基因bax在人肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学和原位杂交方法检测石蜡包埋的人HCC标本中促凋亡基因bax的表达。结果 在免疫组织化学检测的 40例人HCC中 ,bax阳性 19例 ;14例肝硬变组织中 ,bax阳性 11例 ;bax在HCC中的表达低于肝硬变 (P <0 .0 5 ) ;高、中分化型HCC的bax表达高于低分化型 ,而且AFP≤ 40 0 μg/L的患者bax表达高于AFP >40 0 μg/L的患者 ,HCC临床分期为 Ⅰ～Ⅱ期者明显高于Ⅲ期者 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;但在不同性别和不同年龄组 (>6 0岁与≤ 6 0岁 )患者之间则无显著性差异 (均P >0 .0 5 )。原位杂交证实 ,baxmRNA在HCC中的阳性率与免疫组织化学检测结果无显著性差异。结论 促凋亡基因bax在HCC中的表达对肝癌细胞的凋亡起调节作用 ,并与HCC分化程度、临床分期。

抗癌胚抗原单链抗体的原核表达及对人胃癌的检测

目的:探讨T84．66单链抗体的原核表达及对6 种胃癌细胞系及胃癌组织的特异性亲和力．方法:将抗CEA单链抗体T84．66的cDNA插入噬菌粒载体pcANTAB5E,获得噬菌粒载体T84．66-scFv-pCANTAB5E．将后者转化入 E．coli HB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达．采用细胞培养及免疫细胞／组织化学方法,检测胃癌细胞中及石蜡包埋的胃癌组织中的癌胚抗原表达．结果:SDS-PAGE及Western blot证实,T84．66 单链抗体蛋白分子正确表达．T84．66单链抗体可结合KATOIII,HGC-27和MKN45,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;单链抗体不能结合SGC7901,GC803,BGC823．42例胃癌组织癌胚抗原阳性率早期和进展期分别为55％(6／11)和61％(19／31),在正常胃黏膜组织标本中无表达,二者之间存在显著性差异 (P<0．05)．结论:KATOIII等胃癌细胞系可表达癌胚抗原．后者在胃癌组织表达水平较高,而正常胃组织不表达．

肿瘤相关糖蛋白-72抗原在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义

目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72（TAG-72）抗原的表达及其与原发性胆囊癌（PGC）病理特征的关系。方法用原核表达获得抗TAG-72单链抗体，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western blot得以验证；用免疫组化方法检测TAG-72抗原在PGC的表达。结果通过原核表达获取大小为31kDa的抗TAG-72单链抗体并得以证实。TAG-72抗原在胆囊良、恶性组织阳性率分别为59．6％、6．7％（P〈0．05）。高分化PGC的TAG-72抗原表达显著低于中低分化PGC（P〈0．05）；肿瘤直径≤2cm者TAG-72表达显著低于〉2cm者（P〈0．05）；在PGC Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期与Ⅳ～Ⅴ期间则无显著性差异（P〉0．05）。结论获得了抗TAC-72单链抗体的原核表达方法。TAG-72抗原可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用，为抗TAG-72单链抗体在PGC诊治中的应用奠定实验基础。

靶向性肿瘤相关抗原TAG-72的scFv-CD28融合基因的真核表达载体的构建

目的 构建含抗肿瘤相关抗原TAG 72单链抗体及CD2 8胞内区及跨膜区融合基因的哺乳细胞表达载体 ,为制备消化道肿瘤靶向性嵌合锚定T细胞 ,并探讨其对消化道肿瘤的杀伤活性。方法 应用PCR法 ,将抗TAG 72单链抗体 (singlechainvariablefragment ,scFv)克隆入哺乳细胞表达载体pcDNA3 .0 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常人外周血T细胞克隆CD2 8胞内区及跨膜区的cDNA ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在 5′端及 3′端引入相应的酶切位点。结果 抗TAG 72scFvcDNA片段为 72 9bp ,与已知的序列相符 ;CD2 8胞内区及跨膜区的cDNA片段为 2 40bp ,与Genebank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳测序加以证实。结论 完成了抗肿瘤相关抗原TAG 72scFv及CD2 8胞内区及跨膜区融合基因scFv CD2 8 pcDNA3 .0的构建 ,为制备消化道肿瘤靶向性嵌合锚定T细胞奠定了实验基础。

雌激素受体和凋亡相关基因bcl-x及bax在人原发性胆囊癌中表达的临床意义

目的 研究凋亡相关基因bcl x、bax和雌激素受体 (ER)在原发性胆囊癌 (PGC)中表达的意义。方法 应用免疫组织化学LDP法检测石蜡包埋的PGC标本中ER和凋亡相关基因bcl x及bax的表达。结果 bcl x、bax和ER在 47例PGC中表达阳性率分别为 72 .3 % (3 4/4 7)、66.0 % (3 1/4 7)和 5 9.6% (2 8/4 7) ,在 15例胆囊不典型增生中表达阳性率分别为 40 .0 % (6/15 )、93 .3 % (14 /15 )和 93 .3 % (14 /15 )。bax和ER在PGC中的表达显著低于胆囊不典型增生(P<0 .0 5 ) ,而bcl x则高于后者 (P<0 .0 5 )。ER和bax的表达在高分化型PGC显著高于中、低分化型 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x则低于后者 (P<0 .0 5 ) ;ER和bax的表达在男性PGC患者显著低于女性患者 (P<0 .0 1) ,而bcl x的表达则男性显著高于女性 (P<0 .0 5 ) ;ER表达在肿瘤直径 ≤2cm者显著高于 >2cm者 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x及bax的表达则差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。bcl x、bax和ER的表达在PGC的Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期和Ⅳ～Ⅴ期间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 凋亡相关基因ER和bcl x及bax的表达与PGC的分化程度、性别等因素有关 。

抗肿瘤相关糖蛋白-72单抗在人乳腺癌中的表达

目的检测肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)在人乳腺癌细胞系的表达,为利用抗TAG-72单链抗体(singlechainvariablefragment,scFv)诊治乳腺癌提供实验依据。方法将人乳腺癌细胞系MCF-7和Bcap-37通过细胞培养至对数生长期,并固定于载玻片上。用原核表达的抗TAG-72scFv经免疫细胞化学方法检测TAG-72在乳腺癌细胞中的表达。结果TAG-72在乳腺癌细胞系MCF-7中表达为阳性,在Bcap-37中表达为阴性,表明TAG-72在部分人乳腺癌细胞中得以表达。结论TAG-72在人部分乳腺癌中阳性表达,表明TAG-72抗原可作为一个肿瘤标志物在临床中应用,也为抗TAG-72scFv在乳腺癌诊治中应用奠定了实验基础。

bcl-x、bax基因表达与肝细胞癌临床病理特征的关系

目的研究凋亡相关基因bcl-x及bax在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与HCC临床病理学特征的关系及其意义。方法采用免疫组织化学方法，检测石蜡包埋的HCC标本中凋亡相关基因bcl-x及bax的表达。结果在40例HCC中，bcl-x和bax阳性者分别为20 例和19例；14例肝硬变bcl-x和bax 阳性者分别为12例和11例。bcl-x和bax 在HCC细胞中的表达均低于肝硬变(均P∨0.05)；bcl-x和bax在高中分化型HCC细胞中的表达均高于低分化型。AFP≤400μg/L的患者二者的表达均高于AFP∧400μg/L的患者。在临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的HCC细胞中的表达均高于Ⅲ期, 彼此间均有显著性差异；而在男性与女性患者间, 在年龄∧60岁与∨60岁患者间，均无显著性差异(均为P∧0.05)。凋亡相关基因bcl-x及bax在HCC细胞的表达呈正相关(r=0.5602, P∨0.001)。结论凋亡相关基因bcl-x和bax在HCC细胞中的表达，对肝癌细胞的凋亡具有调节作用, 并与HCC的分化程度、临床分期和AFP的水平有关。

Bcl-w蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的 研究 Bcl- w蛋白在原发性胆囊癌 (prim arygallbladder carcinoma,PGBC)中的表达及其意义 .方法 以特异性羊抗兔 Bcl- w抗体 ,DAKO Envision TM系统 (L DP法 )免疫组织化学方法检测石蜡包埋的 PGBC标本中 Bcl- w蛋白的表达 .结果 47例 PGBC中 Bcl- w阳性 2 8例 (6 0 % ) ;15例胆囊腺肌瘤样增生 (GBADH) Bcl- w阳性 14例 (93% ) ;Bcl- w在 PGBC中表达低于 GBADH(P<0 .0 5 ) ;Bcl- w在高分化PGBC中的表达高于中低分化 PGBC,其间有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;PGBC中的 Bcl- w表达在肿块体积≤ 2 cm,男性及>5 5岁患者分别高于体积 >2 cm,女性及 <5 5岁患者 ,其间有显著性差异 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,但 Bcl- w表达与 PGBC的 Nevin分期无关 .结论 抗凋亡蛋白 Bcl- w参与了 PGBC发病过程的凋亡调变 ,其表达水平的不同与 PGBC临床病情有关 .

肿瘤相关糖蛋白-72嵌合锚定T细胞对肝癌的抑癌效应

目的制备肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,体内外实验检测其对肝癌的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞转染,将已制备的重组真核表达载体抗TAG-72 scFv-CD3ζ-pcDNA3.0导入PBMC,获得肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,以此为实验组治疗细胞;用SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞中抗TAG-72 scFv-CD3ζ嵌合分子的表达,并用Western blotting证实。用转染空载体pcDNA3.0的PBMC作为对照组治疗细胞。将实验组及对照组的治疗细胞分别经尾静脉注射治疗荷TAG-72+肝癌细胞HepG2、荷TAG-72-肝癌细胞BEL7402裸鼠动物模型,观察对裸鼠的抑癌效应。结果 SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞嵌合分子抗TAG-72 scFv-CD3ζ的表达,显示大小为47 kDa的融合蛋白片段,与抗TAG-72 scFv-CD3ζ的理论值相符;Western blotting证实该片段CD3呈阳性表达。TAG-72嵌合锚定T细胞与肝癌细胞HepG2共培养后可对后者产生G1期阻滞。用TAG-72嵌合锚定T细胞经尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,发现实验组细胞对荷HepG2细胞裸鼠存活时间、体质量、肿瘤包块大小等方面疗效优于荷BEL7402细胞裸鼠的疗效,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性抑制荷TAG-72+肝癌细胞裸鼠的肝癌细胞生长;该治疗策略将为肝癌的临床诊治提供一种有希望的途径。

抗凋亡基因bcl-2在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义

为探讨抗凋亡基因ｂｃｌ２与胆囊肿瘤发生、分化及临床预后的关系，采用免疫组织化学方法对４５例原发性胆囊癌和３９例胆囊腺瘤抗凋亡基因ｂｃｌ２的表达进行了观察。结果显示：ｂｃｌ２在原发性胆囊癌和胆囊腺瘤的表达率分别为７１．１％和８７．２％，两者比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；ｂｃｌ２在原发性胆囊癌高、中、低分化型的表达率分别为８２．３％、８２．４％和５０．０％，彼此间存在显著性差异（Ｐ＜０．０１）；ｂｃｌ２表达在原发性胆囊癌临床Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ期的阳性率分别为８１．３％、６５．３％，彼此间无显著性差异，表明ｂｃｌ２表达可能与原发性胆囊癌临床分期无直接关系。

一种新型胃肠道癌特异性单链抗体的表达及其在胃癌中的检测

目的通过原核可溶性表达将我们制备的抗胃肠道肿瘤特异性单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)基因表达出单链抗体蛋白,初步鉴定并检测其在几种胃癌细胞中的表达。方法通过基因原核表达、Western blot、ELISA等方法检测单链抗体的表达;通过免疫细胞化学方法检测其对几种胃癌细胞的肿瘤相关抗原的识别。结果 获得的单链抗体分子量31 KD,与理论分子量基本一致,并通过Western blot、ELISA加以证实;免疫细胞化学方法证明该单链抗体可识别胃癌细胞KATOⅢ、HGC-27、肝癌细胞SMMC7721等细胞,不能识别SGC7901。结论通过对单链抗体的原核表达,明确了单链抗体对胃癌细胞的识别能力,为进一步临床应用提供理论基础。

凋亡相关基因bcl-2和bax在结肠肿瘤的表达及意义

用免疫组织化学厅法观察39例结肠癌凋亡相关基因bcl-2和bax的表达,以17例结肠腺瘤作为对照。结果显示:bcl-2(包括强和弱阳性)和bax在结肠癌和结肠腺瘤的表达率分别为33.33％、41.03％、30.77％和41.18％、23.53％、41.18％,结肠癌和结肠腺瘤中bcl-2和bax表达率比较均无显著性差异(均P>0.05)。bcl-2在结肠癌高、中分化型与低分化型阳性表达其强阳性问均存在显著性差异(P<0.05);而bax则否(P>0.05)。研究表明,bcl-2与结肠癌分化有关。bcl-2和bax在结肠癌中的表达呈显著性正相关(r=0.67,P<0.01)。二者与结肠癌Dukes临床分期无直接相关。

药剂软化中臭氧与混凝预处理的比较

将臭氧、混凝工艺分别与传统药剂软化工艺结合,考察组合工艺的软化效果并就促进机理进行分析。在水中n(Ca):n(总碱度)=1:1的情况下,臭氧-药剂软化法较传统药剂软化法硬度去除率增幅为5.7%,混凝-药剂软化法增幅为52.07%。臭氧预处理虽然可以有效地破坏不饱和官能团,但其氧化产物多为小分子有机物,仍然具有阻垢作用,导致臭氧预处理效果不佳。混凝工艺通过去除大分子有机物来促进软化过程,无抑制软化产物生成,因此混凝工艺更适合作为药剂软化的预处理工艺。

血管内皮生长因子及其受体在原发性胆囊癌中的分布及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在原发性胆囊癌(PGC)生长、转移等生物学行为中的作用。方法:采用免疫组织化学LDP法研究47例PGC组织中VEGF及其受体(KDR)的定位与表达。结果:PGC组织中VEGF表达的阳性率为65.96%,阳性物质主要位于肿瘤细胞胞浆,KDR阳性物质位于癌细胞及癌组织旁的血管内皮细胞。VEGF表达在PGC高分化型(62.86%),Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期(56.25%)和淋巴结未转移者(47.62%),显著性低于中低分化型(75%)、Ⅳ～Ⅴ期(86.67%)和有淋巴转移者(80.77%)(均P<0.05),但在胆囊腺癌(62.5%)和其它病理类型癌(73.33%)间无显著性差异(P>0.05)。结论:VEGF及其受体KDR的作用在PGC的生长、进展和转移中可能有重要作用。

肝癌特异性血管抑制疗法的真核表达载体的构建及其表达

目的构建受甲胎蛋白(AFP)增强子和白蛋白(Alb)启动子调控的含有血管抑制素(angiostatin)K5序列的真核表达载体,通过基因转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞,观察angiostatinK5的表达。方法用RT-PCR法从正常人真核细胞扩增出angiostatinK5基因,将AFP增强子和Alb启动子调控序列定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并将angiostatinK5cDNA置于上述调控序列之下,从而构建得到重组真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His。利用细胞培养、脂质体介导的细胞转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞。利用SDS-PAGE和Westernblot法检测肝癌细胞中angiostatinK5的表达。结果通过酶切鉴定及DNA测序证实目的真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His与预期的结果相同。SDS-PAGE及Westernblot分析证明,angiostatinK5在肝癌细胞中得以表达。结论构建的肝癌特异性重组真核表达载体可增加对AFP阳性肝癌细胞的治疗的特异性,并用于实现对肝癌的特异性血管抑制作用。

肝细胞癌临床病理学特征与凋亡相关基因bcl-x表达的关系

目的:研究凋亡相关基因bcl-x在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与HCC临床病理学特征的关系。方法:使用免疫组织化学检测石蜡包埋的HCC标本中凋亡相关基因bcl-x的表达。结果:免疫组织化学检测40例HCC中bcl-x阳性19例;14例肝硬变bcl-x阳性11例;bcl-x在HCC中表达低于肝硬变(P<0.05);bcl-x表达在高中分化型HCC高于低分化型,在AFP≤400μg/L的患者高于AFP>400μg/L的患者,在临床分期Ⅰ～Ⅱ期HCC高于Ⅲ期,其间均有显著性差异(分别为P<0.005,P<0.01,P<0.05)。结论:凋亡相关基因bcl-x在HCC中的表达对肝癌细胞凋亡起调节作用,并与HCC分化程度、临床分期、AFP水平有关。