GAGE-7自身抗体在食管鳞状细胞癌中的表达

目的:检测癌-睾丸抗原GAGE-7的自身抗体在食管鳞状细胞癌患者和正常人血清中表达的差异,评价GAGE家族作为肿瘤诊断标志物的可行性.方法:在原核细菌中表达并纯化重组GAGE-7蛋白,采用ELISA检测GAGE-7自身抗体在105份食管鳞状细胞癌患者血清和86份正常人血清中的表达水平.同时检测各血清中总IgG的表达量,计算GAGE-7自身抗体在总IgG中所占比例的差异.结果:血清中GAGE-7抗体在食管鳞状细胞癌中的含量与正常组比较差异显著(P<0.001),而GAGE-7抗体与总IgG比例,患者组明显高于正常组,逻辑回归模型分析c值为0.717,敏感性和特异性分别达到0.72和0.62,且差异显著(P<0.0001).结论:癌-睾丸抗原GAGE-7的自身抗体在食管鳞状细胞癌血清中有较高表达,且与正常组比较有显著差异,其表达特性可被看做是较为理想的癌症检测标志物.

抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

痛风性关节炎并发高脂血症的发病机制及从脾论治的研究现状

痛风性关节炎(GA)是以嘌呤代谢紊乱导致尿酸盐沉积于关节滑膜及其他组织中,引起关节及局部组织炎症,更甚者导致关节畸形及损伤,且常并发高脂血症、脂肪肝、高血压、肾脏病变的一种代谢性疾病。此外,GA并发症若控制不佳,会加速GA的病程进展,甚至累及泌尿及心血管系统,西药治疗GA并发高脂血症(HLP)多以服用阿托伐他汀钙、非诺贝特类药物为主,但长期服用会引起肝功能的损害。相对而言,中医药可通过含有的有效成分,多途径、多靶点的作用于本疾病,而且安全性高、不良反应小。基于此,本文通过查阅相关文献,对健脾类方药在改善胰岛素抵抗、调节肠道菌群、抗氧化应激、降低炎症因子等方面的研究进展进行论述,并进一步阐明GA并发HLP的发病机制,为中医药防治GA并发HLP的临床应用提供理论参考及科学依据。

信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

目的 研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法 以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果 成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论 载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。