兔颈静脉血管内皮细胞的培养

目的建立稳定的兔颈静脉血管内皮细胞的体外培养方法,为自体的细胞移植提供种子细胞.方法取单侧兔颈静脉,保留对侧;用0.25%胰蛋白酶液进行灌注消化;M199培养基进行培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化进行血管内皮细胞鉴定.结果培养后1-3 d可见细胞贴壁,3 d后细胞变形,7-10 d细胞融合成片,14 d后可进行传代培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化阳性,证实所培养的细胞为血管内皮细胞;取材后实验兔一直存活,未出现死亡.结论本实验方法可以稳定地获取体外培养的兔颈静脉血管内皮细胞,并保证了实验兔的存活,为后续自体细胞移植的开展创造了条件.

自体血管内皮细胞移植替代角膜内皮层的实验研究

目的探讨自体血管内皮细胞(VECs)移植替代角膜内皮层的可行性。方法40只家兔随机分为4组。A组,家兔VECs培养移植于去后弹力层的自体角膜植片内表面;B组,角膜植片去后弹力层后移植回原植床;C组,角膜植片取下后移植回原植床;D组,家兔不做处理。术后观察VECs生长状况及角膜植片透明度,A型超声测其厚度。结果A组角膜植片混浊,1周内最明显,后混浊减轻,2周可见前房。细胞生长良好,部分细胞形状不规则。B组角膜植片混浊且不改善。C、D两组角膜无混浊。结论VECs可替代自体角膜内皮层的屏障功能,维持角膜的透明状态。

兔血管内皮细胞对角膜后弹力层代谢的影响

目的:检测移植后生长于角膜内皮面的自体血管内皮细胞对角膜后弹力层代谢的影响。方法:家兔26只随机分成3组:实验组10只,将培养的自体血管内皮细胞移植到无后弹力层的角膜内皮面;实验对照组10只,移植无角膜内皮层的自体植片;空白对照组6只,移植带角膜内皮细胞的自体植片,术后观察3组角膜植片的水肿变化。术后15d,取下各组角膜植片做病理切片HE染色观察各组植片的角膜后弹力层变化及其上的细胞分布情况。结果:实验组角膜植片的内皮面长满培养的自体血管内皮细胞。病理切片显示,生长的细胞呈单层分布,内皮面未见明显的后弹力膜样物质形成;实验对照组角膜植片高度增厚,内皮面无细胞生长和后弹力膜样物质形成;空白对照组角膜植片内皮面可见明显的后弹力层,其上可见单层细胞分布。结论:血管内皮细胞具有一定的角膜内皮细胞样功能,但不能产生角膜后弹力层样物质。

翻转消化法和灌注消化法分离培养兔耳缘静脉内皮细胞的比较

目的比较翻转消化法和灌注消化法对培养血管内皮细胞生长的影响,以探讨培养血管内皮细胞的最佳方法。方法采用胰蛋白酶用翻转消化和灌注消化分别获取和培养兔耳缘静脉内皮细胞,并记录各组细胞生长情况,取第3代细胞用第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定所获得的细胞。结果两种消化方法首次获得的血管内皮细胞数量差别不大,但培养5d、10d后,灌注法组的细胞生长情况要明显优于翻转法组的细胞(P<0.01)。免疫组织化学检测细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原呈阳性。结论采用胰蛋白酶灌注法获取的内皮细胞生长情况要比翻转法获取的细胞好。

羊膜作为载体培养血管内皮细胞替代自体角膜内皮细胞的研究

目的将羊膜作为血管内皮细胞的生长载体，探讨血管内皮细胞代替自体角膜内皮细胞生理功能的可行性，为大泡性角膜病变的治疗新方法提供实验依据．方法取实验家兔的一侧颈静脉（约3—4cm），用0．25％胰蛋白酶＋0．02％EDTA灌注法收集血管内皮细胞进行原代培养．取新鲜羊膜并去除其表皮细胞，剪成1．5cm×1．5cm大小，表皮面向上平铺于24孔培养板中，再将原代培养的血管内皮细胞传代于羊膜表面，当血管内皮细胞贴壁并长满整个羊膜表面后，我们将载体同血管内皮细胞一起移植到带有大泡性角膜病变的角膜内表面，1～2个月后观察其角膜透明度的变化．结果术后12d左右。实验组和实验对照组（各10只）的角膜水肿及透明度有明显差别．实验组术后4—5d时植片呈白色，高度水肿，通过植片看不见前房，10d后，水肿开始减轻，角膜混浊开始好转，其中7只实验家兔的角膜透过植片能看见前房的组织结构．实验对照组的绝大部分角膜植片水肿加剧，部分角膜植片由于高度水肿而出现坏死溃疡，经统计学分析P〈0．05，两者具有差异性．结论血管内皮细胞具有类似于角膜内皮细胞的生理功能，但其长期的功效有待于进一步的观察和探讨．

自体双层大网膜移植重建结膜囊

目的:研究自体双层大网膜重建结膜囊恢复正常眼表解剖结构和生理功能的可行性。方法:用电凝器热烧伤的方法损伤实验家兔约1/2范围的球结膜、穹窿结膜和睑结膜。第2天,于腹上中线偏左剪开约3cm长的切口,暴露胃小弯部,剪取少许大网膜放入含生理盐水的培养皿中待用。将电凝损伤坏死区的结膜分离去除,大网膜呈双层折叠式覆盖于损伤区,10-0尼龙线褥式缝合大网膜和结膜的交接部分。结果:术后12d,全部大网膜与结膜缘融合生长,眼表的解剖结构和生理功能得以逐渐恢复,角膜无明显的新生血管形成。结论:自体双层大网膜重建结膜囊是治疗睑球黏连性疾病的理想方法。

散光和非散光有晶体眼后房型人工晶体植入术后拱高的比较

比较散光和非散光有晶体眼后房型人工晶体植入术后分别使用Pentacam和OCT的前节模式测量的拱高。方法 以2019年1月-2019年6月于我院眼住院手术患者38人共计74眼为研究对象。随机分成植入TICLV4C(术前柱镜度≥-2.00D)和植入ICLV4C(术前柱镜度<-2.00D)两组,比较两组患者术后1天和1月时分别使用Pentacam和OCT的前节模式测量中央区拱高。结果 植入TICL组术后1天,使用Pentacam测量拱高为(622±218)μm,术后1月时拱高低于术后1天,平均(526±241)μm,但比较无显著差异(P>0.05)。植入TICL组术后1天,使用OCT前节模式测量拱高为(687±264)μm,术后1月时拱高低于术后1天,平均(577±184)μm,但比较无显著差异(P>0.05)。结论 OCT的前节模式测量拱高与Pentacam测量,具有分辨率高、非接触性、无创性、操作简单及实时记录结果等特点。但在青年近视患者中涉及散光的测量或是植入的人工晶状体与散光轴位有关时,可优先考虑选择 OCT的前节模式。

SMILE术后角膜前弹力层微皱褶和角膜上皮厚度的远期临床对照观察

观察SMILE术后远期角膜前弹力层微皱褶的变化以及角膜上皮厚度的分布特点。方法 从已行SMILE手术4年以上的患者中非随机抽取23人,44眼进行回顾性研究,按术前屈光度分为高度(≥-6.0D)和中低度(<-6.0D)近视两组,除行常规围手术期检查外,应用眼前节OCT分别水平位和垂直位观察角膜前弹力层微皱褶的形态并计数;同时分析角膜各个部位上皮厚度和角膜厚度的分布特点。结果 23人中男性6人,女性17人,男女比例 1:3 ,平均年龄32.0±6.7岁。所有患者手术顺利且无并发症。安全指数为X,有效指数为X。44眼中有40眼裸眼视力均达到20/20,眼前节OCT观察到高度近视组中有12眼(12/17)角膜前弹力层微皱褶仍然存在,总的数量为14209μm,平均为835.5μm,较术后早期数量减少。垂直位较水平位明显,数量分别为10242μm和4337μm,差异有统计学意义(P<0.05)。微皱褶的分布与散光轴位有关。中低度组中只有1眼垂直位仍能观察到角膜前弹力层微皱褶,数量为490μm。角膜上皮厚度高度组中央区为54.6±4.5μm,中低度组为57.1±3.1μm。上皮厚度分布呈上方薄下方厚的趋势,平均上方厚度为49.8±3.4μm,平均下方厚度为53.9±5.0μm。且在高度组中由中央区到周边区逐渐减少,两组均是术后远期比术后早期厚度增加。而角膜厚度则呈现上方厚下方薄的趋势。结论 SMILE术后远期角膜前弹力层微皱褶在高度近视组还可观察到,且垂直位比水平位明显,与散光轴位有关,与散光度数无关。角膜上皮厚度的分布呈上方薄下方厚的趋势,术后远期比术后早期厚度增加。而角膜厚度则呈现上方厚下方薄的趋势。作为对SMILE术后早期角膜前弹力层微皱褶的情况的后续及远期观察,本次研究再次验证了SMILE手术的安全性和有效性。