美洲南瓜WRKY4基因克隆与序列分析

以美洲南瓜(Cucurbita pepo)幼叶为材料,采用Trizol方法进行总RNA的提取。根据GenBank上已提交的黄瓜WRKY4基因序列保守区域设计特异性引物,扩增得到1条长度为497bp的WRKY4转录因子基因片段,利用已知中间序列,通过RT-PCR和RACE(rapid amplification cDNA ends)等技术,克隆得到美洲南瓜WRKY4的cDNA全长序列,长度为1722bp,5'非翻译区为185bp,3'非翻译区为118bp,开放阅读框为1419bp,编码472个氨基酸,分子量约为51.40kD,等电点约为8.36,GenBank登录号为JX096811。用Blast和DNAMAN软件对其核苷酸序列进行分析,结果显示,美洲南瓜WRKY4与黄瓜WRKY4同源性达到87%。美洲南瓜WRKY4基因克隆及序列分析为以后研究此基因的功能奠定了基础。

茄子SmWRKY1转录因子基因克隆及序列分析

克隆茄子转录因子SmWRKY1基因,对其序列进行分析,为SmWRKY1基因在茄子抗逆分子育种的应用中提供理论依据。以茄子幼苗为试材,依据GenBank上已提交的番茄、甜椒、烟草的WRKY基因序列设计引物,提取总RNA利用RT-PCR方法扩增得到基因片段,克隆、测序并通过NCBI在线和DNAMAN等软件对其核酸及氨基酸序列进行分析。同源克隆得到SmWRKY1,核酸序列930 bp,翻译为310个氨基酸组成的蛋白序列,其中Ser和Thr量最多,分别占总氨基酸数的12.0%和11.0%。NCBI检索SmWRKY1属于WRKY基因超家族,第114至120个氨基酸含有WRKY保守结构域"WRKYGQK",其锌指结构为C2H2型,初步证实SmWRKY1属于第二大类WRKY转录因子。DNAMAN构建茄子SmWRKY1与不同植物WRKY蛋白的系统发育树,表明茄子WRKY1与番茄中的WRKY1蛋白亲缘关系最近,同源性达96%。WRKY基因在植物耐逆性的研究中有着重要的作用,通过克隆出SmWRKY1基因片段,为进一步克隆其全长、研究其功能做前期准备,为分子育种、培育茄子耐逆性新品种奠定了一定的基础。

茄子SmNAC1基因的克隆与表达分析

以茄子幼苗为试材,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得SmNAC1基因全长,并利用RT-qPCR技术检测该基因在GA、4℃低温、NaCl处理下的时空表达。结果显示:SmNAC1全长序列1 279 bp,开放阅读框为909 bp,编码302个氨基酸,推测其蛋白质分子量约35.04 kD;SmNAC1含有NAC家族的N端保守域,与番茄、马铃薯同源性高达90%。SmNAC1受GA、低温和高盐诱导,表达上调,但在根、茎、叶中的表达量有差异,在根中表达水平整体高于茎和叶中,显示SmNAC1在根中优势表达,且短时间(0.5～1 h)相对表达量较高,而在茎和叶中应答相对迟缓,且叶中表达水平趋于稳定。可见SmNAC1可能参与了茄子对外源GA诱导的响应及对低温、高盐胁迫的耐受调节过程。