河豚毒素处方前初步研究

目的考察河豚毒素(TTX)在不同溶剂中的溶解性及稳定性,以及温度和pH值对稳定性的影响。方法配制TTX不同介质的溶液,采用高效液相色谱法(HPLC)测定其在不同温度、不同pH缓冲液中的浓度,分析计算其溶解度及稳定性。结果TTX在pH值为3.5时溶解度最大,随着pH值增加其溶解度逐渐降低。TTX在强碱条件下降解最为迅速,在70℃条件下、0.1mol/L的氢氧化钠溶液中,20min即完全降解。稳定性试验结果同样证明TTX在碱性条件下的稳定性最差,在37℃、pH值=7.4的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中,TTX浓度在1~10 h时开始持续降低,28天降解率为88.07±0.27%。结论TTX易溶于pH值=3.5的酸性水溶液,几乎不溶于碱性水溶液。其稳定性与温度、介质pH值密切相关,在酸性水溶液中较为稳定,在碱性条件下易降解,温度升高会加速其降解过程。

河豚毒素原料药及有关物质含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法的建立

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)方法,测定河豚毒素(TTX)原料药及有关物质的含量。方法选用TSK Gel amide-80(150 mm×2 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-含5 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液(70∶30,V/V)为流动相,流速0.2 ml/min,柱温40℃。ELSD漂移管温度105℃,雾化器温度80℃,气体流量1.8 L/min。结果TTX在10~100μg/ml浓度范围内,线性关系良好,相关系数R^(2)为0.9995,检测限(S/N=3)为5 ng,定量下限(S/N=10)为10 ng。准确度试验相对标准差为0.93%;日内/日间精密度试验相对标准差均<2%;破坏试验中降解产物与TTX的分离度均>2.0;耐用性试验相对标准差均<2%。结论本方法适用于TTX和有关物质的含量检测,可为TTX原料药质量控制及其制剂开发提供参考。