酒川芎增强阿美替尼对EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的抑制作用

目的探讨酒川芎(WCR)增强阿美替尼抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。方法建立人脑内皮细胞(hCMEC/D3)和PC9非小细胞肺癌细胞共培养体系,采用流式细胞术考察酒川芎水提液(2 mg/mL)联合阿美替尼(10、20μmol/L)对PC9细胞凋亡的影响;通过ABCB1-MDCK单层细胞模型评估酒川芎水提液(0.5、1、2 mg/mL)对阿美替尼(8μmol/L)跨膜转运的影响。以Western blot法检测血脑屏障完整性相关的紧密连接蛋白表达;建立裸鼠非小细胞肺癌脑移植瘤模型,考察酒川芎(1 mg/g)联合阿美替尼(10 mg/kg)抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。结果与单用阿美替尼组(20μmol/L)对比,酒川芎(2 mg/mL)联合阿美替尼(20μmol/L)组给药可致细胞凋亡百分率增加21%(P<0.01)。酒川芎(0.5、1、2 mg/mL)联合阿美替尼的双侧转运Papp(A→B)较单用阿美替尼均显著增加(P<0.05)。与酒川芎联合后,紧密连接蛋白zonula occludens(ZO)-1,claudin-5和外排蛋白P-glycoprotein的蛋白表达明显减少(P<0.05)。在PC9-Luc脑移植瘤裸鼠模型中,酒川芎联合阿美替尼可明显提升单用阿美替尼的抑瘤效果,缓解脑移植瘤裸鼠体质量的下降,并延长脑移植瘤裸鼠的生存时间(P<0.05);病理组织学染色结果显示,酒川芎联合阿美替尼可明显增加脑移植瘤裸鼠脑组织中肿瘤细胞的凋亡百分率(P<0.05),并改善瘤周脑组织神经损伤。免疫组化染色结果显示,酒川芎能明显下调脑组织中紧密连接蛋白ZO-1和claudin-5的蛋白表达。结论酒川芎能增加阿美替尼抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用,其机制可能与下调ZO-1,claudin-5和P-glycoprotein蛋白表达,从而促进阿美替尼透过血脑屏障有关。

川芎通过多成分、多靶点、多信号通路和多生物学功能发挥抗肺癌脑转移作用

目的利用网络药理学方法和分子对接技术研究川芎治疗肺癌脑转移的潜在分子机制。方法通过中药系统药理学分析平台TCMSP数据库获取川芎的化学成分和作用靶点;通过GeneCards数据库筛选肺癌脑转移的相关靶点;借助ClusterprofilerR包进行GO和KEGG富集分析;利用Cytoscape及STRING数据库构建川芎“活性成分-靶点-疾病”网络、蛋白相互作用网络,根据拓扑学参数筛选川芎治疗肺癌脑转移的核心成分及作用靶点,并将两者进行分子对接;最后,通过川芎处理人肺癌细胞PC9,运用Western blot法检测相关蛋白表达对核心靶点进行初步验证。结果本研究共筛选出(Z)-藁本内酯、丁苯酞、油酸、杨梅酮等48个有效成分;INS、BDNF、FOS、VEGFA、PTGS2、ESR1、MAPK14、PTGS1等49个靶点蛋白;核受体活性、配体激活、转录因子活性等57个生物学功能;Prolactin signaling pathway、Breastcancer、Etrogen signaling pathway等40条信号通路。分子对接结果显示,杨梅酮、丁苯酞、4-羟基-3丁基苯酞、(Z)藁本内酯、洋川芎内酯-E等成分与BDNF、FOS、PTGS2、MAPK14等7个核心靶点有较强亲和能力。Western blot结果显示,0.1 mol/L和1 mol/L川芎处理肺癌细胞PC9后PI3K的磷酸化水平分别为(86.51±13.09)%、(71.58±5.56)%,AKT的磷酸化水平分别为(87.49±13.09)%、(71.47±13.02)%,VEGF的水平分别为(84.39±8.95)%、(80.65±10.07)%,且差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论川芎通过多成分、多靶点、多信号通路和多生物学功能发挥抗肺癌脑转移的作用。

基于双波长高效液相色谱法同时测定九蒸九晒熟地黄中7种成分的含量

目的 建立同时测定九蒸九晒熟地黄中梓醇、益母草苷、地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、5-羟甲基糠醛(5-HMF)等7种成分含量的方法。方法 采用超声法提取九蒸九晒熟地黄炮制过程中每一次蒸晒后的样品,然后应用高效液相色谱(HPLC)法同时测定样品中7种成分的含量;色谱柱为赛默飞C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,柱温30℃,检测波长203,332 nm,进样量10μL。结果 7种成分在各自线性范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.57%~100.58%,RSD为0.60%~1.78%。结论 该方法准确、稳定,重复性好,可用于九蒸九晒熟地黄饮片的质量控制。

斑蝥酸钠对肝癌细胞侵袭、迁移影响的实验研究

目的:探讨斑蝥酸钠对人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞侵袭、迁移的影响。方法:斑蝥酸钠4、8、16、32、64μmol/L处理SMMC-7721和HepG2细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测SMMC-7721和HepG2细胞存活率。通过CCK-8试验确定斑蝥酸钠给药浓度为4、8、16μmol/L,并设置空白对照组,集落克隆法检测斑蝥酸钠对SMMC-7721和HepG2细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察SMMC-7721和HepG2细胞形态学变化;划痕实验和Transwell小室法检测SMMC-7721和HepG2细胞的侵袭和迁移能力;Western Blot检测SMMC-7721和HepG2细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)的表达。结果:相较于空白对照组,斑蝥酸钠4、8、16μmol/L组细胞增殖、侵袭、迁移的抑制率明显升高,集落克隆显著减少,划痕损伤愈合的趋势明显减少,细胞皱缩发亮,数目减少失去了正常形态,E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:斑蝥酸钠具有抑制肝癌细胞SMMC-7721和HepG2侵袭和迁移的作用。