GDNF和HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞Bcl-2表达的影响

为了进一步探索治疗神经系统损伤的新途径 ,本研究用传代培养的骨骼肌卫星细胞加入胶质细胞源性神经营养因子(GDNF )和单纯疱疹病毒介导的 GDNF(HSV-GDNF) ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72 h的细胞进行 Bcl-2单克隆抗体的免疫组织化学反应 ,观察了 GDNF和 HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞 Bcl-2表达的影响。结果发现 :GDNF、HSV-GDNF组的肌卫星细胞 Bcl-2表达较对照组明显增强 ,细胞存活数量高于对照组 ,但 GDNF组、HSV-GDNF组两组之间无显著性差异。提示 :GDNF、HSV-GDNF可促进骨骼肌卫星细胞的增殖、分化 。

CD34在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞发育的免疫组织化学研究

目的 观察CD34在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布 ,探讨CD34在发育中的大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用。 方法 原代培养骨骼肌卫星细胞 ,第 1次传代后 ,取贴壁 2、4、8、16、2 4、4 8和 72h的细胞行CD34多克隆抗体的免疫组织化学染色。 结果 CD34免疫阳性反应存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中 ,但在形成肌管后 ,细胞核免疫反应转为阴性 ,同时成纤维细胞呈弱阳性反应。 结论 CD34在发育中的骨骼肌卫星细胞中有一定量的分布 。

干细胞因子在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞表达和发育的免疫组织化学研究

目的 观察干细胞因子 (SCF)在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布 ,探讨SCF在大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用。 方法 原代培养骨骼肌卫星细胞 ,经两次传代后 ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72h的细胞行SCF单克隆抗体的免疫组织化学染色。 结果 SCF免疫阳性反应物存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中 ,形成肌管后 ,细胞核呈强阳性反应。 结论 SCF在发育的骨骼肌卫星细胞中有表达 ,它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用。

GDNF及HSV-GDNF对体外培养大鼠脊髓运动神经元受损后凋亡的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)及单纯疱疹病毒载体介导的 GDNF(HSV- GDNF)对体外培养的胎鼠脊髓运动神经元在划痕损伤后凋亡的影响。 方法 对培养 12 d神经元行划痕损伤 ,并将其分成 4组 (无血清对照组、血清组、HSV- GDNF组和 GDNF组 ) ,给予不同培养液 ,定期观察各组的运动神经元存活数。分别于划痕损伤第 4d和第 7d时对神经元作 TU NEL 染色 ,检测运动神经元凋亡数 ,并在图像分析仪上对凋亡神经元作平均光密度的色谱分析。 结果 各组内运动神经元存活数与培养时间成反比。从对照组、HSV- GDNF组到 GDNF组 ,运动神经元凋亡数和凋亡神经元的平均光密度均依次减少 ,但对照组和血清组、GDNF组和 HSV-GDNF组间的运动神经元凋亡数以及凋亡神经元平均光密度均无显著差异。 结论 GDNF和 HSV- GDNF能挽救生长发育过程中受损的脊髓运动神经元的凋亡 ,对体外培养的受损脊髓运动神经元具有一定的保护作用。

GDNF和HSV-GDNF对培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧后的Bcl-2表达的影响

目的:观察细胞胶质源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和单纯疱疹病毒介导的GDNF(GDNF transformed by herpes simplex virus vector,HSV-GDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧-复氧时的作用和Bcl-2表达的影响。方法:观察缺氧2h、4h和缺氧4h后恢复供氧24、72h时,脊髓运动神经元存活数,并用抗Bcl-2抗血清行免疫组织化学染色,对Bcl-2免疫反应阳性神经元作平均光密度分析。结果:经GDNf、HSV-GDNF孵育的脊髓运动神经元缺氧-复氧后Bcl-2表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且HSV-GDNF组的效果更好。结论:GDNF、HSV-GDNF对缺氧-复氧的大鼠脊髓运动神经元有保护作用,HSV-GDNF比GDNF更能增强缺氧-复氧后脊髓运动神经元Bcl-2的表达,提高神经元存活数,抑制缺氧后神经元的死亡。

质粒型HSV载体介导的GDNF和GFP基因在BHK细胞和骨骼肌细胞中的转移和表达

为了进一步探索治疗中枢神经损伤的新途径 ,本实验以质粒型单纯疱疹病毒 ( H SV)为载体 ,分别构建了含有胶质细胞源性神经营养因子 ( GDN F)和绿色荧光蛋白 ( GFP)基因的重组载体 H SV - GDNF和 H SV- GFP,用包装出的混合毒株分别感染体外培养的 BHK细胞及原代培养的大鼠骨骼肌细胞。 2 d后 ,对感染 HSV - G DNF组的细胞进行 G DNF免疫组织化学反应 ;感染HSV- GFP组的细胞在荧光显微镜下进行观察。结果发现 :质粒型 H SV载体可成功地将外源性 GDN F和 GFP基因导入 BH K细胞和原代培养的大鼠骨骼肌细胞。提示 :质粒型 H SV载体可以作为转基因 GDN F治疗中枢神经系统损伤的转移载体 ,为中枢神经系统损伤的治疗展示了广阔的前景。 GFP作为报告基因 ,也可因其适用广谱。

质粒型单纯疱疹病毒载体介导GDNF和GFP基因在体外培养的BHK细胞和大鼠脊髓、背根节神经元中的转移和表达

为了观察质粒型单纯疱疹病毒载体介导的外源性胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因在体外培养的金黄地鼠肾细胞以及脊髓神经元和背根节神经元中的转移和表达 ,本研究采用了以质粒型单纯疱疹病毒载体为基础构建的分别含有重组胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因的混合毒株 dv HSV-GDNF和 dv HSV-GFP感染体外培养的金黄地鼠肾细胞、脊髓神经元和背根节神经元。用免疫组织化学方法和荧光显微镜观测法分别检测了胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因的转移和表达。结果发现 :质粒型单纯疱疹病毒载体可以成功地将外源性胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因导入金黄地鼠的肾细胞以及脊髓神经元和背根节神经元中。提示质粒型单纯疱疹病毒载体可以作为转基因胶质细胞源性营养因子治疗脊髓损伤的转移载体 ,为脊髓损伤的基因治疗提供了实验基础。绿色荧光蛋白作为报告基因 ,也可因其适用广泛、观察简便等特性而得到更加广泛的应用。

胶质细胞源性神经营养因子在大鼠生后腰段脊髓中分布的实验研究

为探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠脊髓运动神经元的作用 ,采用免疫组织化学方法 ,观察GDNF在大鼠生后 1、3、7、10、14和 2 8天腰段脊髓中的分布。结果发现 ,在生后 1、7和 2 8天脊髓灰质前角运动神经元有强阳性染色 ,生后 3天脊髓灰质前角运动神经元呈弱阳性染色 ,生后 1、3、7和 2 8天脊髓灰质后角神经元和少量胶质细胞也呈阳性反应。此外 ,在各组大鼠腰段脊髓后根内的胶质细胞亦可见GDNF免疫阳性反应。提示GDNF可能对脊髓运动神经元的发育、存活以及功能的正常发挥起重要作用。

GDNFR-〆在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子受体 - α(GDNFR- α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布 ,探讨 GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用。 方法 原代培养脊髓和背根节神经元 ,5 d后行抗 GDNFR- α多克隆抗体免疫组织化学 SP法染色。 结果 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中。 结论 GDNF可能对脊髓神经元。

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 。

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养大鼠脊髓运动神经元划伤后Bcl-2表达的影响

为检测大鼠肌源神经营养因子对体外培养大鼠脊髓运动神经元划痕损伤后 Bcl-2表达的影响 ,本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取出肌源神经营养因子。在胎鼠脊髓运动神经元培养第 7d时将其随机分成对照组和实验组 (成鼠组和乳鼠组 ) ,取 10 0μl肌源神经营养因子 ( 0 .1μg/ ml)加入实验组 ,对照组加入等量的 PBS,同时进行划痕损伤。损伤后第 3d计数各组存活的运动神经元 ,行 Nissl染色和免疫组化反应 ,计数 Bcl-2免疫反应 ( Bcl-2 -IR)阳性神经元数量 ,并在图像分析仪上对 Bcl-2 -IR阳性神经元作光密度分析。结果发现 ,损伤后第 3d,实验组运动神经元存活数 ,Bcl-2 -IR阳性神经元数和平均光密度均明显高于同期对照组 ,而乳鼠肌源神经营养因子组功效优于成鼠肌源神经营养因子组。结果提示 ,大鼠肌源神经营养因子对体外培养的受损运动神经元具有增强 Bcl-2表达、减少凋亡和损伤修复等作用 。

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。

巢蛋白在体外培养的大鼠骨骼肌卫星细胞发育过程中的表达——免疫细胞化学研究

为了观察巢蛋白 (nestin)在骨骼肌卫星细胞发育过程中的分布状况以进一步探讨 nestin在肌细胞发育中的作用 ,本实验对新生 Wistar大鼠股部骨骼肌传代培养后 ,在不同发育期进行 nestin单克隆抗体的 ABC免疫组织化学反应 ,并以抗 actin,desmin单克隆抗体作同期对照 ;计算阳性肌卫星细胞数量并进行统计学分析。结果发现 :actin,desmin,nestin三组间在同一培养时间点上的阳性肌卫星细胞数量无差异 (P>0 .0 5 ) ,但在时间点之间的比较上 ,4h组较 2 h组的阳性肌卫星细胞数量有所增加 (P<0 .0 5 ) ,其余各时间组的阳性肌卫星细胞数量则显著高于 2 h组、4h组 (P<0 .0 1)。提示

神经上皮干细胞蛋白在体外培养的大鼠肌卫星细胞中的表达

本实验运用免疫组织化学方法，观察神经上皮干细胞蛋白(Nestin>在肌卫星细胞中的表达，试图进一步探索肌组织与神经组织之间的关系，为肌细胞治疗中枢神经系统损伤提供一定的实验依据。实验选取新生1天Wistar大鼠后肢骨骼肌，参考Joon Yung Lee和D．C．McFarland等方法，分离培养肌卫星细胞。

GDNF及dvHSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的影响

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子及单纯疱疹病毒载体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (dv HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的作用 ,本实验对成年大鼠造成双侧坐骨神经损伤后 ,于右侧损伤处分别施加胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF;左侧损伤处施加生理盐水作为对照。分别取损伤后 4、7、14和 2 8d大鼠的脊髓 L4 ～ L6 节段 ,经石蜡包埋切片后行 Nissl染色 ,计数前角运动神经元数量并进行统计学分析。结果发现 :坐骨神经损伤后 4、7、14和 2 8d,右侧脊髓前角运动神经元的数量明显高于左侧。提示 :胶质细胞源性神经营养因子和 dv

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