灭活母牛分枝杆菌雾化吸入对哮喘小鼠γδT细胞TLR3的影响

目的:探讨灭活母牛分枝杆菌雾化吸入对哮喘小鼠γδT细胞TLR3表达的影响。方法:将雄性Balb/c小鼠24只随机分为4组,正常组、哮喘组、低浓度组、高浓度组,每组6只。哮喘组、低浓度组、高浓度组用鸡卵清蛋白(OVA)建立小鼠哮喘模型,低浓度组用1.125μg/mL灭活母牛分枝杆菌雾化吸入干预,高浓度组用2.250μg/mL灭活母牛分枝杆菌雾化吸入干预,正常组用PBS进行处理和干预,哮喘组用PBS进行干预。OVA末次激发后24 h内,测小鼠气道相对阻力,麻醉处死小鼠后取左肺包埋切片行HE染色、糖原染色(PAS染色)观察小鼠病理改变,行免疫组织化学染色观察小鼠肺NF-kB蛋白表达;取右肺行流式细胞术检测肺γδT细胞TLR3表达百分比,用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测IRF3蛋白表达。结果:与正常组相比,哮喘组小鼠的气道反应性升高,肺组织损伤明显,炎症细胞浸润增加,肺组织γδT细胞TLR3表达、肺组织NF-κB及IRF3蛋白表达升高(P<0.05)。与哮喘组相比,低浓度组和高浓度组小鼠的气道反应性降低,肺组织损伤改善,炎症细胞浸润减少,肺组织γδT细胞TLR3表达、肺组织NF-κB及IRF3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:灭活母牛分枝杆菌雾化吸入对哮喘小鼠气道高反应性和炎症有改善作用,其机制可能与抑制γδT细胞TLR3及IRF3/NF-kB通路有关。

不同品系小鼠哮喘模型的建立与比较

目的:比较不同品系小鼠哮喘模型的差异。方法:将BALB/c和C57BL/6两品系雄鼠随机分为对照组与哮喘组,每组6只。采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液致敏和激发小鼠,激发过程中观察小鼠哮喘症状。取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ浓度,苏木精—伊红(HE)染色及过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺组织病理学改变。Western blotting及免疫组织化学染色法检测肺组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、caspase 1和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白表达。结果:BALB/c小鼠哮喘组出现点头呼吸、腹部痉挛、抓耳挠腮、呼吸减慢等更具特异性的哮喘症状,而C57BL/6小鼠哮喘组仅表现为少动、呼吸深快。与BALB/c对照组及C57BL/6哮喘组比较,BALB/c哮喘组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞比例、血清IL-4含量及肺组织NLRP3、caspase 1和ASC蛋白表达量升高,血清IFN-γ水平下降(均P<0.01),肺组织可见特征性的病理改变。与C57BL/6对照组比较,C57BL/6哮喘组BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数及肺组织炎症小体相关蛋白表达量升高(P<0.01),但IL-4与IFN-γ浓度无改变(P>0.05)。结论:BALB/c小鼠哮喘模型较C57BL/6小鼠哮喘模型更为稳定,两者间的差异可能与异常激活的NLRP3炎症小体有关。