益生菌通过调节ROS/JNK信号通路在代谢相关脂肪性肝病治疗中的作用及机理研究

目的探讨益生菌通过调节ROS/JNK信号通路在代谢相关脂肪性肝病治疗中的作用和机制。方法选取18只C57BL/6雄性小鼠,随机分成模型组(n=6)、对照组(n=6)及益生菌组(n=6)。给予模型组及益生菌组小鼠MCD饮食来构建代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠模型,对照组小鼠喂养MCS饮食,益生菌组小鼠以益生菌灌胃,每天灌胃一次,每次0.5 mL,模型组和对照组予以等量生理盐水灌胃,连续灌胃4周。益生菌治疗4周后将小鼠麻醉处死,检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)、血浆D-乳酸(D-Lac)、血清及小肠二胺氧化酶(DAO)水平变化情况。选取肝脏及回肠组织切片后行HE染色。同时检测各组小鼠肝组织中活性氧(ROS)水平。使用免疫印迹技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、紧密连接蛋白ZO-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)。使用免疫组化技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平。使用PCR检测各组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达。结果肝脏HE染色病理学结果分析:喂养C57BL/6小鼠MCD饮食4周后通过HE染色观察肝小叶结构紊乱,肝细胞内可见脂滴沉积并伴有严重的炎性细胞浸润,证明成功建立MAFLD动物模型。益生菌治疗4周后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝小叶结构变得完整,肝细胞内脂肪变性和炎性细胞浸润减少。生化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠血清中血脂(TC、TG)及转氨酶(ALT、AST)、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝组织中ROS水平较对照组明显增高。而在使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠的血清TC、TG、ALT、AST、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝脏中ROS水平均明显下降(P<0.05)。Western blot结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax表达水平明显增加,肠道ZO-1的表达水平明显降低;而使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低,而ZO-1的表达水平增加(P<0.05)。PCR结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达水平较对照组明显增加;而益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达降低(P<0.05)。免疫组化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平较对照组升高;在使用益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低(P<0.05)。小肠HE染色病理学结果分析:对照组小鼠的回肠粘膜结构正常,无充血水肿、溃疡、剥脱。与对照组相比,模型组小鼠的回肠粘膜结构严重破坏,肠粘膜出现水肿、溃疡、剥脱现象。使用益生菌干预后,益生菌组小鼠肠粘膜结构变得较为完整,肠粘膜无明显水肿、溃疡、剥脱,见图。相较于对照组,模型组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分更高。使用益生菌干预后,相较于模型组,益生菌组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分降低(P<0.05)。结论ROS、P-JNK、Caspase-3、Bax在MAFLD中表达增加,表明其与MAFLD的发病有关。使用益生菌治疗后可以明显改善MAFLD的组织学及血清学相关指标。Western blot、PCR及免疫组化结果都证实益生菌能通过调节ROS/JNK信号通路相关因子表达,减轻氧化应激从而抑制细胞凋亡达到治疗MAFLD的目的。

益肠内营养联合益生菌对非酒精性肝病肝纤维化的治疗效果及临床应用价值

目的探讨肠内营养联合益生菌对非酒精性肝病肝纤维化的治疗效果及临床应用价值。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月西南医科大学附属医院收治的非酒精性肝病肝纤维化患者80例,分为对照组和干预组各40例,其中对照组给予常规治疗,干预组在常规治疗的基础上予以肠内营养联合肠道益生菌治疗,观察并记录治疗前、治疗后4周两组患者的肝功能天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清总胆红素(TBiL)及直接胆红素(DBiL),营养指标血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)及转铁蛋白(TF),凝血功能凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),炎症指标C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)以及肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)。结果与治疗前比较,治疗4周后两组各肝功能指标及肝纤维化指标均降低,干预组治疗4周后TBil、DBiL、ALT、AST水平低于对照组,HA、PC-Ⅲ、LN、Ⅳ-C水平低于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗4周后两组各营养状态均改善,干预组TP、ALB和TF水平高于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗4周后两组各凝血功能均改善,干预组PT和APTT低于对照组(P<0.05)。治疗4周后,两组SOD、GSH-Px水平高于治疗前,MDA水平低于治疗前,且干预组均优于对照组(P<0.05)。与治疗前比较,治疗4周后两组各炎症反应均减轻,干预组血清CRP、IL-6和TNF-α低于对照组,IL-10高于对照组(P<0.05)。结论肠内营养联合肠道益生菌治疗非酒精性肝病肝纤维化临床疗效显著,可有效抑制肝纤维化,改善患者肝功能、营养状态及凝血功能,同时可对机体氧化应激及炎症反应发挥良好的调节作用,且安全性良好。

肠道菌群与非酒精性脂肪肝病发病的关系

肠道微生物群是一个多样化的生态系统,同时对人体代谢起着重要作用,它包含了肠道菌群,肠道菌群组成及结构失衡称为菌群失调。近年来,越来越多的研究表明肠道菌群对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)病程的进展有重要意义。肠道菌群可能在各种代谢过程、胰岛素抵抗、炎症损伤中发挥作用,进而导致NAFLD的发生。而益生菌可以通过各种途径减轻肝脏损伤,延缓NAFLD的进展,但肠道菌群及益生菌在NAFLD中的作用机制尚未明确。本文主要从肠道菌群及益生菌与NAFLD的发病关系进行综述,为治疗NAFLD提供新思路。