高频度微卫星不稳定性大肠癌“修饰型”微卫星变化与MLH1及KRAS基因突变密切相关(英文)

本研究通过方法学的改良和观察方式的创新试图阐明这种现象的原因。微卫星非传统的检测方法仅能实现微卫星定性检测,我所在的研究组开发了自动片段分析双荧光标识技术,提高了微卫星检测的感度和重复性,并实现了微卫星片段变化长度的定量。小于6碱基的微卫星变化被定义为修饰型微卫星不稳定,大于8碱基的变化被定义为跳跃型微卫星不稳定,它们的电泳谱截然不同。前者表现为在非肿瘤来源微卫星位点基础上的增加或减少,后者表现为距离非肿瘤微卫星片段远隔部位的新波形的出现。通过研究我们发现,在DNA错配修复缺陷细胞系及基因敲除大鼠自发肿瘤样本,仅有修饰型微卫星不稳定性检出;在人类DNA错配修复缺陷细胞系连续80次传代也没有检出跳跃型变化。跳跃型变化不能通过简单重复序列不稳定基础上的增加或减少的累加而获得。在76例散发大肠癌,我们检测了微卫星不稳定性,KRAS基因突变,并对高频度微卫星不稳定性病例的两个主要DNA错配修复基因MSH2和MLH1进行了全长测序。我们发现,在大肠癌,按频度的传统分类与按波形变化的分类有高度的一致性,高频度微卫星不稳定性病例均检测到跳跃型表现,低频度微卫星不稳定性都表现为修饰型变化。在12例高频度微卫星不稳定病例,有三例检出了跳跃型和修饰型同时存在微卫星不稳定的特殊表型,这3例均检出KRAS的突变,更有趣的是该3例病例也同时检出了DNA错配修复基因MLH1的变异。而在其他9例高频度微卫星不稳定病例,KRAS突变及MLH1、MSH2突变未检出。通过对突变谱的分析我们还发现,修饰型微卫星不稳定与KRAS基因12号密码子的转换型突变高度相关,而微卫星稳定的病例检出的KRAS基因12号密码子突变多为颠换型突变。修饰型微卫星不稳定表型检出的高频度转换突变可由DNA错配修复缺陷的分子背景解释。通过本研究,我们认为以波形为基础的微卫星不稳定新分型可能是解决目前微卫星研究领域矛盾的一个选项。一直公认为高频度微卫星不稳定性是"真正"的DNA错配修复缺陷表型,我们的研究提示实际上高频度微卫星的可能是多元的。修饰型微卫星不稳定与DNA错配修复缺陷直接关联,而跳跃型微卫星不稳定的原因尚未阐明。在高频度为微型不稳定中,携带修饰型变化的病例可以通过DNA错配修复系统缺陷来解释其病因。

早期胃癌淋巴结转移的规律及危险因素分析

目的探究早期胃癌(early gastric carcinoma,EGC)患者发生淋巴结转移的危险因素。方法回顾性分析1980年6月至2012年9月在中国医科大学附属第一医院肿瘤外科经手术病理确诊的383例EGC患者的临床资料,记录并比较其临床资料和病理结果情况,并对相关危险因素进行分析。结果383例EGC患者淋巴结转移率为15.14%(58/383)。主癌部位、病理大体分型、浸润度、组织分型、淋巴管癌栓不同的患者淋巴结转移情况比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析表明,主癌部位、病理大体分型、浸润度、组织分型、淋巴管癌栓是EGC发生淋巴结转移的危险因素,其中浸润度是独立危险因素。结论主癌部位、病理大体分型、浸润度、组织分型、淋巴管癌栓是EGC发生淋巴结转移的危险因素。分析早期胃癌患者淋巴结转移的危险因素,能够帮助医师制定合理的治疗方案,是手术治疗合理化的关键,也是指导和改善预后的重要因素。

微卫星不稳定性检测技术的现状

微卫星不稳定性(MSI)现象在多种人类肿瘤中被确认,DNA 错配修复(MMR)系统缺陷可能是导致 MSI 表型的重要原因之一。MMR 系统与体内 DNA 代谢密切相关。但大量 MSI 相关研究的结论仍存在较大争议,不能排除来源于样本分子背景的差异造成结果的差异,但检测方法的偏差可能是导致结论分歧的根源。文章就 MSI 检测方法进行综述,分析了传统测序电泳放射性自显影方法存在的三种根本问题,并介绍了高通量双荧光标志 MSI 解析法(HRFMA)。该方法不仅可以对 MSI 定性判断,而且能够观察MSI 变化的特点。它的推广有助于推进 MSI 相关研究。