用ELISA和Dot-ELISA方法检测植物病原的比较研究

比较了ELISA和Dot-ELISA方法检测番茄巨芽类菌原体(Tomato Big Bud Mycoplatma-Like Organism,TBB-MLO)、番茄斑萎病毒(Tomato Spotted Wilt Virus,TSWV)和青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum)的差异,结果表明,两种方法对番茄斑萎病毒无明显差异,对番茄巨芽类菌原体,用Dot-ELISA比用ELISA的检测灵敏度高50—100倍,对青桔假单胞菌,用Dot-ELISA比用ELISA检泓抗原的灵敏度高20倍,而检测抗体的灵敏度高100倍。

分泌抗马铃薯Y病毒单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系的建立及抗体稳定性测定

用大鼠的骨髓瘤细胞系(IR983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU/c)脾细胞融合,建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克隆抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对PVY^n具有特异性反虚;其二对PVY°具有特异性反应;其三对PVY^n和PVY°均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELISA间接法检测,上述(McAb)同TMV、CMV、TEV、AMV、TuMV、PLRV、PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化特性进行了鉴定。

用于检测马铃薯X病毒HB株系的单克隆抗体的研制

经诱导耐受性免疫、细胞融合及克隆化培养,建立了2类6株稳定分泌抗马铃薯X病毒(PVX)株系特异性高滴度的单克隆抗体(McAb)小鼠杂交瘤细胞系。间接DAS—ELISA测定表明:Ⅰ类细胞系(1—6G8,1-7E8,2—5G9)分泌的抗体只与PVX—HB和PVX—c反应,Ⅱ类细胞系(1-6F1,1-9C11,1—9C8)分泌的抗体与测试的5个株系均有反应,但当用病毒直接包被ELISA板时,Ⅲ类抗体同PVX—C不产生反应。因此将两类单克隆抗体配合使用可鉴别诊断PVX—HB株系。用辣根过氧化物酶(HRP)对McAb1—7E8进行了标记并成功地以DAS—ELISA法检测。这两类能鉴别诊断PVX—HB株系的抗体对马铃薯抗病品种的选育、无病毒种薯的生产及进口种苗的检测都是相当有用的试剂。

分泌抗马铃薯X病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用马铃薯X病毒(PVX)免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经3次克隆化后,筛选出3类分泌抗PVX株系特异性的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,该细胞株经传代20代以上,并经液氮冻存一年以后仍表现稳定。3个杂交瘤细胞株染色体数目集中在92—102条之间,其免疫球蛋白亚类均为IgG3,用ELISA间接法测定细胞培养上清滴度为1∶320—1∶640,小鼠腹水抗体滴度为1∶102400—1∶204800,后者比兔抗血清滴度(1∶320)高300倍以上。McAb对抗原具有中和作用,中和滴度为1∶10~2。经反复冻融、硫铵沉淀和冻干后,抗体活性无明显变化。