靶向MIF的siRNA对大肠癌细胞侵袭的影响

目的:研究化学合成的siRNA干扰巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration-inhibitory factor,MIF)后,对大肠癌CT-26细胞侵袭的影响并探讨其可能的机制.方法:实验组用靶向MIF的siRNA处理CT-26细胞,对照组用非特异性的siRNA处理CT-26细胞,空白组不添加任何干扰剂.Transwell细胞侵袭试验检测细胞侵袭情况,ELISA检测培养上清中MIF蛋白的含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MIF、CD74、T淋巴瘤侵袭转移因子1(tiam1)、E-Cadherin mRNA的表达,Western blot检测细胞内MIF及CD74蛋白表达.结果:实验组经化学合成的MIFsiRNA处理大肠癌CT-26细胞24h后,与对照组和空白组相比,其侵袭受到明显抑制(P=0.012);实验组培养上清中MIF蛋白的含量与对照组和空白组比较有显著下降(P=0.02);实验组中MIF、CD74、tiam1的mRNA的表达较对照组和空白组相比显著下降(PMIF=0.001;PCD74=0.001;Ptiam1=0.004);实验组中E-Cadherin的表达较对照组和空白组升高(PE-Cadherin=0.001);实验组细胞内的MIF及CD74蛋白较对照组和空白组表达明显下降(PMIF=0.006;PCD74=0.016).结论:化学合成的MIFsiRNA抑制了CT-26细胞的侵袭,其可能机制是靶向MIF的siRNA抑制了MIF的表达,降低了CD74与tiam1的表达,升高了E-Cadherin的表达.

靶向MIF的siRNA对大肠癌细胞凋亡的影响

目的研究化学合成的siRNA干扰巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)对大肠癌CT-26细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法实验组用靶向MIF的siRNA处理CT-26细胞,对照组用非特异性的siRNA处理CT-26细胞,空白组不添加任何干扰剂。流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,ELISA检测培养上清中MIF蛋白的含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MIF、CD74、Caspases3、Caspases8 mRNA的表达,Western blot检测细胞内MIF、CD74、Caspases8蛋白的表达。结果化学合成的MIF siRNA处理大肠癌CT-26细胞24 h后,CT-26细胞凋亡率增加;实验组培养上清中MIF蛋白的含量与对照组和空白组比较显著下降;实验组MIF、CD74的mRNA表达量显著下降,Caspases3、Caspases8 mRNA的表达量明显升高;实验组细胞内MIF、CD74蛋白表达降低,而Caspases8蛋白表达升高。结论化学合成的MIF siRNA提高了CT-26细胞的凋亡率,其机制可能是靶向MIF的siRNA降低了MIF和CD74的表达,升高了Caspases3、Caspases8的表达。

GLS1基因调节胃癌细胞迁移、侵袭和EMT的研究

目的研究谷氨酰胺酶1(glutaminase1,GLS1)对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胃黏膜上皮细胞GES1和胃癌细胞N87、MKN28、BGC826和BGC803。设计合成靶向GLS1的siRNA片段(si-GLS1-1#和si-GLS1-2#),分别转染N87和BGC823细胞,以无意义siRNA为对照(si-con)。采用qRT-PCR检测细胞中GLS1 mRNA表达,CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中GLS1蛋白和上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达。异种移植瘤实验评估干扰GLS1对胃癌细胞体内生长的影响。结果胃癌细胞中GLS1 mRNA和蛋白均呈高表达(P<0.05)。与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组细胞中GLS1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。细胞功能实验结果显示,与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组细胞的增殖活力、克隆形成能力及迁移、侵袭能力均被抑制(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。异种移植瘤实验结果显示,与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组移植瘤体积和重量均明显减小(P<0.05),移植瘤中N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论干扰GLS1能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力及EMT,促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞的体内生长。

利用蛋白质组学与人工神经网络构建大肠癌肝转移诊断模型

目的应用双向电泳联合质谱技术筛选大肠癌肝转移血清特异性标志物,并利用这些标志物以数据挖掘技术构建人工神经网络大肠癌肝转移诊断模型。方法收集大肠癌无肝转移、伴肝转移患者各12例血清样本,同组血清等量混合进行双向电泳,用ImageMaster V5.0软件分析两组蛋白质的差异,差异蛋白质进行MALDI-TOF-MS鉴定。ELISA法测定差异蛋白及CEA含量。用受试者工作曲线评价其对大肠癌肝转移的诊断价值,以人工神经网络方法,筛选出准确度最高者作为大肠癌肝转移诊断模型。结果双向电泳显示,大肠癌伴肝转移组与无肝转移组相比较有4个蛋白有统计学意义,其中2个上调的蛋白质分别是Transferrin和Complement component C9;2个下调的蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serum albumin。受试者工作曲线分析与大肠癌肝转移相关性依次为Transferrin>Haptoglobin>CEA。人工神经网络的诊断方法以Transferrin和Haptoglobin这两个蛋白联合建立的模型预测准确度最高,为88.57%,其敏感度为63.64%,特异度为100%。结论利用蛋白质组学与人工神经网络构建了Transferrin与Haptoglobin联合的大肠癌肝转移诊断模型,横断面验证有较高的准确度,开辟了诊断大肠癌肝转移的新方法。

缺血性结肠炎患者结肠镜下表现及缺血修饰白蛋白的诊断价值分析

目的探究缺血性结肠炎(IC)患者结肠镜下表现及血清缺血修饰白蛋白(IMA)的诊断价值。方法选取2018年1月-2021年3月该院收治的IC患者267例(IC组),另选取同期因便血接受治疗的200例患者作为对照组。所有观察者行结肠镜检查,并用酶联免疫吸附试验检测IMA水平,将结肠病变组织行HE染色后观察病理形态。结果对照组存在糖尿病病史与脑梗死的患者分别占总人数的5.00%与2.00%,IC组存在糖尿病病史与脑梗死的患者分别占总人数的11.99%与9.74%,两组患者比较,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组患者住院时间为(3.54±1.86)d,存在腹部手术史、高血压、冠心病和心房颤动的患者分别占总人数的13.00%、17.00%、4.00%和2.00%,IC组患者住院时间为(9.13±4.28)d,存在腹部手术史、高血压、冠心病和心房颤动的患者分别占总人数的29.96%、43.45%、15.73%和10.11%,两组患者比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组IMA水平为(0.13±0.02)mg/mL,明显低于IC组的(12.48±1.25)mg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC)的曲线下面积为0.85,敏感度为87.26%,特异度为75.31%,准确率为83.41%,阳性预测值为89.26%,阴性预测值为71.33%,Kappa值为0.71。结论IMA在IC患者中呈现高表达,利用IMA诊断IC,无创、简便,灵敏度与特异度较高,其是临床诊断IC的一种安全、有效的新方法。

n-3多不饱和脂肪酸在食管癌细胞增殖和凋亡中的作用机制探讨

目的:探讨n-3多不饱和脂肪酸的两个活性成分二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)在食管癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法:采用CCK-8法测定不同浓度、不同时间点(培养后24 h、48 h、72 h)的DHA、EPA对食管癌细胞增殖的影响,用Western-blot法检测DHA、EPA对凋亡相关蛋白表达的影响,并用荧光染色和流式细胞仪检测DHA、EPA对食管癌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,DHA和EPA均能够抑制食管癌细胞的增殖并具浓度依赖性,但无时间依赖性。Western-blot显示DHA、EPA能激活Caspase-3和Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达。DHA和EPA作用24 h后,荧光染色可见部分食管癌细胞呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,DHA和EPA能够诱导食管癌细胞凋亡,且与浓度呈正比。结论:n-3多不饱和脂肪酸能够抑制食管癌细胞的增殖和诱导食管癌细胞的凋亡,调控Caspase-3活性以及Bcl-2家族促凋亡蛋白/抗凋亡蛋白之间的平衡来发挥其抑制食管癌细胞增殖和诱导食管癌细胞凋亡的作用。

靶向MIF的siRNA对大肠癌细胞增殖的影响

目的研究化学合成的靶向MIF的siRNA干扰MIF后,对大肠癌CT-26细胞增殖的影响并探讨其可能的机制。方法 MTT法检测细胞的增殖情况;ELISA检测培养上清液中MIF蛋白的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MIF、CD74 mRNA的表达;Western blot检测细胞内MIF和CD74蛋白的表达。结果实验组CT-26细胞的增殖与对照组和空白组相比受到明显抑制(P24 h;100 nmol=0.003),呈时间-计量依赖关系;实验组培养上清液中MIF蛋白的含量与对照组和空白组比较显著减少(P=0.02);实验组中MIF与CD74的mRNA表达量与对照组和空白组相比显著下降(PMIF=0.001;PCD74=0.001);实验组MIF、CD74蛋白表达与对照组和空白组相比降低(PMIF=0.006;PCD74=0.016)。结论化学合成的MIF siRNA抑制了CT-26细胞的增殖,其可能机制是MIF siRNA降低了CT-26细胞内MIF与CD74的表达。

上海市崇明区中学生功能性便秘筛查状况

目的了解上海市崇明区中学生功能性便秘(functional constipation,FC)的流行病学特征及相关因素。方法采用多级分层整群随机抽样法,于2019年3—6月对上海市崇明区18周岁以下的4969名在读初、高中生进行问卷调查。结果上海市崇明区中学生FC患病率为13.95%,不同性别、学段、城乡之间患病率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。在高中组中,临毕业年级组FC的患病率(17.36%,130/749)高于非临毕业年级组(13.77%,201/1460)(χ^(2)=5.01,P=0.03),市示范性高中组FC的患病率(18.23%,115/631)高于普通高中组(13.07%,49/375)和区示范性高中组(13.88%,167/1203)(χ^(2)=7.43,P=0.02)。多因素Logistic回归分析显示,体育锻炼频率、食用辛辣食品频率高、饮食中辛辣食品占比、食用蔬菜频率、饮食中蔬菜占比、每日饮水量、是否纳差、睡眠质量、是否就读于示范型学校与中学生FC有关(OR=0.11~7.71,P值均<0.05)。结论FC为上海市崇明区中学生的常见病,好发于高中临毕业年级组,且危险因素较多。