兔骨髓间充质干细胞体外分离培养及多向诱导分化

背景:间充质干细胞不仅自身免疫原性弱,还可以调节细胞免疫功能,减轻移植物排斥反应,在组织工程中具有良好的应用前景。但骨髓中间充质干细胞含量稀少,约占单个核细胞的十万分之一到百万分之一。目的:建立一种分离、培养扩增兔骨髓间充质干细胞的方法,观察体外培养骨髓间充质干细胞的生长特性,及其潜在的诱导分化能力。方法:采用灌流法获取兔胫骨骨髓,密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增,相差显微镜观察其形态学特点,MTT法测定绘制传代骨髓间充质干细胞生长曲线,经成骨诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,0.1μmol/L地塞米松,200μmol/L抗坏血酸,10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)、成脂诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,1μmol/L地塞米松,200μmol/L吲哚美辛,0.5mmol/LIBMX,10mg/L胰岛素)、成软骨诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,10μg/L转化生长因子β1,0.1μmol/L地塞米松,50μmol/L抗坏血酸,6.25mg/L胰岛素)体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化,并分别经碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色法鉴定。结果与结论:通过密度梯度离心法联合贴壁培养法可在体外大量扩增、纯化骨髓间充质干细胞,所获细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能,原代及传代骨髓间充质干细胞为梭形。经成骨细胞诱导,细胞碱性磷酸酶染色阳性;经成脂肪细胞诱导,细胞内出现红色脂滴,经成软骨细胞诱导,甲苯胺蓝染色阳性。

基于网络的科研试剂耗材管理

目的:探讨一种基于网络的科研试剂耗材管理方法及流程,以提高医院科研试剂耗材采购管理水平。方法:在介绍科研试剂耗材管理现状及存在问题的基础上,通过分析科研试剂耗材网络化管理的必然性及意义,提出适用于医院科研试剂耗材的网络化管理流程。结果:基于网络的科研试剂耗材管理优化了资源配置,实现了采购流程的可控化。结论:科研试剂耗材的网络化管理方法提高了医院耗材管理的运行效率,节约了成本,提升了医院管理水平。

复合溶葡萄球菌酶消毒剂配合密闭式负压吸引技术治疗深Ⅱ度烫伤创面疗效观察

目的探讨应用复合溶葡萄球菌酶消毒剂冲洗配合密闭式负压吸引技术治疗深Ⅱ度创面的疗效。方法选取自2016年1月至2017年12月收治的深Ⅱ度四肢烫伤患者60例,采用随机数字表法分为常规组(n=30)与观察组(n=30)。常规组采用0.9%氯化钠溶液冲洗配合密闭式负压吸引技术治疗;观察组采用复合溶葡萄球菌酶消毒剂冲洗配合密闭式负压吸引技术治疗。伤后第5、10、15、20天更换负压引流,观察并比较伤后第5、10、15天创面愈合率,第1、5、10天创面细菌培养阳性率,以及创面完全愈合时间。结果观察组第10、15天的创面愈合率均明显高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前创面细菌培养阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组创面细菌培养阳性率为3.3%(1/30),显著低于常规组的23.3%(7/30),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组创面完全愈合时间为(16.5±2.1)d,明显短于常规组的(17.8±1.7)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复合溶葡萄球菌酶消毒剂作为密闭式负压吸引装置的冲洗剂,能有效控制创面细菌感染,缩短创面愈合时间。

研究型医院科技创新体系构建

研究型医院是以医学知识、医疗技术为基础,坚持临床与科研教学并举,不断推动临床诊疗水平、社会卫生事业,以及人类健康持续稳定发展的新型的一流现代化医院。构建符合其发展要求的科技创新管理体系,是保证研究型医院自主创新、高新技术研发、科技成果转化,以及高层次人才培养等内涵要素持续提高的关键环节。

烧伤整形外科临床医学专业实习生教学方法探讨

目的:提高烧伤整形外科临床医学专业实习生临床实际应用能力,改进烧伤整形外科临床教学效果。方法:选择2014年1-12月在我科实习的临床医学专业本科实习生60名,于入科和出科时分别进行两次烧伤整形外科临床能力评分,一个月实习期间进行针对性教学,比较两次评分结果。结果:实习生出科时临床能力评分显著高于入科时,差异具有统计学意义。结论:烧伤整形外科针对性教学,对实习生烧伤整形外科基础知识的实际应用和烧伤整形整体诊疗思路的建立,均有积极作用,显著提高了烧伤整形外科实习效果。

次声刺激诱导原代培养大鼠星形胶质细胞释放谷氨酸的研究

目的:观察16Hz,130dB次声刺激对原代培养的大鼠星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨其释放机制。方法:原代培养大鼠海马区星形胶质细胞,将其分为次声刺激组(IE group,n=6),Gap26+次声刺激组(Gap26+IE group),对照组(Ctrl group,n=6)。次声刺激组细胞暴露于次声舱中,分别给予15min,30min,60min,90min,120min和240min的次声刺激;对于Gap26+IE组,则在次声刺激前,选用Cx43半通道阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞;对照组也置于次声舱,但不给予次声刺激。次声刺激频率为16Hz,强度为130dB。为了排除Gap26对谷氨酸释放的影响,还选用乱序Gap26肽段(Scrb Gap26)来预处理星形胶质细胞(Scrb Gap26+IE group,n=6)。采用免疫荧光染色测定细胞Cx43的表达情况,采用高效液相色谱(HPLC)来测定细胞外液谷氨酸浓度。结果:次声刺激后,IE组细胞外液谷氨酸的浓度显著升高,并在刺激90min后,细胞外液谷氨酸浓度达峰值,为(4.6±0.3)nmol/ml,显著高于对照组(2.3±0.2)nmol/ml(P<0.05),这说明次声刺激可以显著增高星形胶质细胞外液的谷氨酸含量。此外,次声刺激后,IE组细胞Cx43的表达也显著升高,刺激60mins时,Cx43平均荧光强度达到峰值,为(198±33)(AUC),显著高于对照组(P<0.05)。而对于Gap26+IE组,次声刺激后细胞外液谷氨酸浓度的升高受到抑制,90min后,细胞外液谷氨酸浓度为(3.58±0.17)nmol/ml,显著低于次声刺激组(P<0.05)。结论:次声刺激可以诱导星形胶质细胞释放谷氨酸;Cx43半通道阻断剂Gap26抑制了谷氨酸释放,次声刺激诱导的谷氨酸释放可能是通过Cx43半通道来完成的。

人脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的:探索高效分离和扩增人脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)的方法,观察其生物学特性,并通过形态学、免疫表型及多向分化能力进行鉴定。方法:以手术中剩余的人皮下脂肪组织为材料来源,利用胶原酶消化法分离ADSCs,体外扩增后传代,倒置显微镜观察,MTT比色法测定细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标记CD29、CD31、CD34、CD45、CD90、CD105的表达。在DMEM及胎牛血清培养基、地塞米松、IBMX、吲哚美辛的诱导下向脂肪细胞定向分化;在DMEM及胎牛血清培养基、地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油、胰岛素的诱导下向成骨细胞定向分化。结果:原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好。细胞传代后2天内处于潜伏期,第3天进入生长期,5天后进入平台期。流式细胞仪检测CD29、CD31、CD34、CD45、CD90、CD105阳性率分别为73.4%、3.6%、4.5%、2.0%、97.3%、80.4%。经定向诱导分化后,细胞分别呈现脂肪细胞、骨细胞的表型特征。结论:酶消化法能有效分离纯化人ADSCs,细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有ADSCs的一般生物学特性,为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。

胸腔镜下食管癌手术对术后切口疼痛程度、非特异性和特异性免疫应答的影响

目的:探讨胸腔镜下食管癌手术对术后切口疼痛程度、非特异性和特异性免疫应答的影响。方法:收集在本院接受手术治疗的食管癌患者56例,回顾其手术方式及相关实验室检查,分为接受胸腔镜手术治疗的胸腔镜组27例、接受传统开胸手术治疗的开放手术组29例。术前、术后1d,采用散射免疫比浊法检测血清疼痛介质含量,采用流式细胞仪检测非特异性免疫指标、特异性免疫指标水平。结果:术前,两组血清疼痛介质含量以及非特异性免疫应答、特异性免疫应答指标的差异无统计学意义(P>0.05)。术后1d,胸腔镜组血清疼痛介质5-HT、K^+、NE的含量低于开放手术组(P<0.05);胸腔镜组外周血非特异性免疫应答指标NK细胞以及C3、C4的含量显著高于开放手术组(P<0.05);胸腔镜组外周血特异性免疫应答指标CD4^+、CD4^+/CD8^+、IgA、IgG的含量显著高于开放手术组(P<0.05)。结论:胸腔镜下食管癌手术创伤较小,对免疫应答系统的抑制较轻,是早中期食管癌患者的理想手术方式。

钻床的三维设计与仿真

近年来,随着数控机床、组合机床、加工中心、车削中心以及加工单元等高科技机床的出现,工件的钻孔,铰孔,攻丝变得更加精确、高效。因而工业生产、加工也得到了巨大的改善。与此同时,传统机床的存在因为科技的进步也受到了冲击甚至被替代。但是,出于经济成本的考虑一般精度的条件下,微型机床的使用,能很大程度地方便人们的生活。本次设计以能加工小孔的微型立式钻床为例。我们进行立式钻床的设计与在CATIA的基础上进行零部件的建模与装配。从钻床的简介、设计要求,设计方案与参数要求,用CATIA的建模与装配三个角度阐明微型钻床的设计与仿真。

以市场引导建立建耕地保护经济补偿机制

为了遏制耕地非农化非粮化以及撂荒现象的持续发展,本文主张应用经济激励方式对农业经营主体进行补贴。本文通过对于各地相关试点的回顾以及相关政策系的关系梳理,得出了应协调相关政策重点关注欠发达地区治理的结果。在具体的治理思路上应当充分整合相关资金,由农业补贴资金做引导,耕地保护资金做激励,重塑农户增产增收与耕地保护的一致性逻辑,建立长效可持续的激励性耕地保护经济补偿政策。

瓦伯格效应与严重烧伤后的代谢紊乱

瓦伯格效应的特征为糖酵解产生腺苷三磷酸提供的能量,取代线粒体的氧化磷酸化作用,这种代谢方式产能效率低,但速率却更高。瓦伯格效应最初在肿瘤细胞中被发现并就此开展了大量研究,近年来其在危重病及各种炎性疾病中的作用逐渐被发现并受到重视。严重烧伤的突出特点为代谢紊乱,包括高血糖、胰岛素抵抗、负担平衡等。本文通过回顾性分析瓦伯格效应的相关研究,探索利用瓦伯格效应深入开展严重烧伤后代谢紊乱的可行性,讨论利用瓦伯格效应针对烧伤后胰岛素抵抗开展研究的预期前景。

浅谈制图教学中的“成功教育”

素质教育是教学改革的方向,成功教育是对素质教育有益的探索,制图教学需要成功,更需要成功教育。我们要充分发挥课堂教学的资源优势,努力提高教育教学质量,培养出符合知识经济时代发展所需要的具有成功能力的合格人才。

胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞核因子κB核移位的抑制作用

目的 了解胰岛素对烧伤血清诱导的血管内皮细胞NF-κB核移位的抑制作用及其相关机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）.按照随机数字表法将细胞分为5组：空白对照组,不加任何刺激因素常规培养;正常血清对照组和烧伤血清刺激组,分别用含体积分数20%健康人血清、体积分数20%烧伤患者血清的培养液培养;烧伤血清＋胰岛素处理组,在烧伤血清刺激组培养液成分的基础上添加胰岛素（终浓度1×10-7mol/L）进行培养;抑制剂预处理组,预先加入蛋白激酶B（PKB或Akt）特异性抑制剂LY294002（50μmol/L）孵育细胞,30 min后改用培养液（成分同烧伤血清＋胰岛素处理组）培养.6 h后,采用扫描电镜观察各组HUVEC损伤情况;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞胞质磷酸化κB-α抑制蛋白（p-IκB-α）和磷酸化Akt（p-Akt）水平,以及胞核NF-κB-p65的蛋白表达变化.结果 （1）扫描电镜观察：与空白对照组HUVEC比较,烧伤血清刺激组、抑制剂预处理组细胞收缩明显,细胞间呈锯齿状连接或连接消失,胞核结构不规整.正常血清对照组及烧伤血清＋胰岛素处理组细胞结构有轻微改变,但细胞延展性及胞核结构明显好于烧伤血清刺激组.（2）细胞凋亡率：空白对照组为（15.7±2.2）%.烧伤血清刺激组为（28.5±2.3）%,烧伤血清＋胰岛素处理组为（22.3±1.8）%,抑制剂预处理组为（29.7±2.4）%,均明显高于空白对照组（F=14.288,P〈0.05或P〈0.01）;正常血清对照组细胞凋亡率为（17.0±2.5）%,与空白对照组比较差异无统计学意义（F=14.288,P〉0.05）.与烧伤血清刺激组相比,烧伤血清＋胰岛素处理组细胞凋亡率明显降低（F=14.288,P〈0.05）.（3）蛋白表达水平：与空白对照组相比,烧伤血清刺激组和抑制剂预处理组细胞胞质p-IκB-α与胞核NF-κB-p65的蛋白表达水平明显升高,p-Akt表达水平明显下降;正常血清对照组和烧伤血清＋胰岛素处理组3种蛋白水平均与空白对照组接近.结论 胰岛素通过调节磷脂酰肌醇3激酶/Akt信号通路抑制IκB-α磷酸化,继而限制NF-κB核移位,最终发挥改善内皮细胞功能的作用.

奥运水上项目优秀运动员伤病的流行病学调查

目的探讨奥运水上项目优秀运动员的伤病分布特点并对伤病原因进行分析。方法 2013年11月至2014年2月,对皮划艇、赛艇和帆船帆板项目国家冬季集训的优秀运动员进行伤病的医学筛查,对伤病分布部位以及不同运动项目之间的伤病差别进行统计和分析。结果奥运水上项目优秀运动员的伤病部位在不同项目之间有各自的特点。皮划艇项目伤病前3位分别是腰部、肩部和肘部,分别占全部伤病的37.9%、20.7%和17.2%;赛艇项目伤病前3位分别是腰部、膝部和臀部,分别占全部伤病的42.1%、31.6%和10.5%;而帆船帆板项目伤病前3位分别是膝部、腰部和肩部,分别占全部伤病的37.0%、29.6%和11.1%。不同项目之间腰背痛发生的实际部位存在差异。肩、肘部伤病主要发生在皮划艇项目。膝部伤病在赛艇项目中主要发生在单侧,而在帆船帆板项目中则常为双侧。结论水上运动项目不同单项的伤病有各其自身的特点,发生的原因主要与其运动模式有关;应具体分析各运动项目的伤病特点,从解剖学、生理学和运动生物力学角度有针对性地展开伤病预防和治疗研究。

新时代背景下中职班主任班级管理工作方法探讨

在新时代背景下,中职学校班主任的班级管理工作显得越来越重要。由于缺乏科学、系统的管理方式和方法,中职学生对班主任的管理工作逐渐产生抵触心理。如何有效提高管理效率,促进中职学生的成长,成为当前迫切需要解决的问题。笔者认为,首先要从加强校园文化建设入手,建立良好、和谐、友好的氛围;其次要完善班级管理制度并建立奖惩机制;最后要积极响应国家“新常态”号召进行教育改革创新,让中职学生在学习之余能得到更多锻炼的机会,提高自身素质和能力水平,增强社会服务意识。