净制对乌梅质量的影响及乌梅肉质量标准的研究

目的:研究净制对乌梅质量的影响,完善乌梅肉质量标准。方法:首先采用蒸与润2种方法分别净制3批乌梅肉样品,比较其产率、浸出物以及枸橼酸含量差异,确定净制方法;根据确定的净制方法,对12批乌梅药材进行净制,比较乌梅肉和核中浸出物及枸橼酸含量差异,探讨净制对乌梅质量的影响。对21批乌梅肉饮片的外观性状、显微、薄层鉴别、水分、水溶性浸出物和枸橼酸含量分别按照药典要求进行测定,拟定乌梅肉质量标准限度。结果:蒸法与润法净制乌梅质量(产率、水分、枸橼酸及浸出物)无显著性差异,但蒸法所用时间为30 min,远短于润法润制过夜。乌梅肉的浸出物及枸橼酸的含量72.5%、33.1%远高于乌梅核17.9%、8.0%,二者存在极显著差异。乌梅肉的平均水分为(11.0±1.4)%;浸出物为(72.0±3.4)%;枸橼酸含量为(33.8±4.5)%。结论:乌梅净制可以去除非药用部位,提高枸橼酸及浸出物含量,具有科学道理,蒸法和润法2种净制方法均可行,蒸法更易操作。

不同炮制工艺对雄黄性状及成分含量影响的研究

目的对雄黄不同炮制品粒径、颜色及主要成分含量进行测定,考察干研法、水飞法、水洗法、醋酸飞法、醋酸洗法、盐酸飞法及盐酸洗法对雄黄饮片质量的影响。方法采用激光法和色差仪分别对雄黄不同炮制品粒径和颜色进行测定,采用《中国药典》(2020年版一部)雄黄项下滴定法测定雄黄不同炮制品中As2S2含量。结果雄黄经飞法处理后,粒径明显降低,洗法并不会改变雄黄粒径大小,不同溶剂对粒径影响不大。飞品和洗品的b*值具有统计学差异,L*和a*值差异不明显。不同炮制方法得到的雄黄其总砷含量均是飞法>洗法;不同溶剂飞雄黄其As2S2差异不明显。结论飞品与洗品及干研品可以通过性状和含量两方面进行区分,飞和洗的工艺方法是影响雄黄饮片质量的主要因素,而与辅料种类关系很小,飞法除杂效果最好。

三七生长年限对5个皂苷及其抗血栓作用的影响

目的:通过比较分析不同生长年限对三七质量、皂苷含量及抗血栓作用的影响,为确定三七药材适宜的采收年限提供数据支持。方法:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、三七皂苷R15个主要皂苷,比较1—6年不同生长年限的三七有效成分的积累情况。同时,利用斑马鱼血栓模型比较1、2、3年生三七的抗血栓作用。结果:1—3年生三七质量、5个皂苷含量均随生长年限的增加逐渐累积,其中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量均较高,随年限变化最显著;而4—6年生三七中质量、皂苷含量受批次个体等影响较大,皂苷含量波动较大,与3年生三七相比差异无统计学意义。1—3年生三七抗血栓作用比较中发现,在相同剂量下,生长年限越长,疗效越好;在相同生长年限下,剂量越大,疗效越好。结论:综合品质、产量、种植成本及活性等因素,结合目前产地种植三七的实际情况,3年生三七整体品质较高且趋于稳定,可为三七标准化采收提供依据。

乌梅炭炮制过程中颜色与内在质量的相关性及其炮制终点研究

目的 研究乌梅炭炮制过程中颜色与内在质量的相关性,为乌梅炭炮制终点的确定提供参考。方法 利用色差仪对乌梅炭粉末进行色度值测定,选择水分、水溶性浸出物、枸橼酸和鞣质含量对乌梅炭进行内在质量测定,分析不同炮制时间下乌梅炭色度值、水分、水溶性浸出物、枸橼酸和鞣质含量的动态变化趋势,对颜色和上述指标含量进行相关性分析,建立内在质量-色度值回归方程。同时结合主成分分析(PCA)、层次聚类分析(HCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)法分析乌梅炭不同炮制时间的差异,以确定其炮制终点。结果 随着炮制时间的延长,样品颜色逐渐加深;样品色度值L*与E*先升高后下降,色度值a*与b*下降,最终均趋于稳定;样品中水溶性浸出物、枸橼酸与鞣质含量均呈先升高后下降的趋势,样品中水分含量随炮制时间的延长而下降,最后趋于稳定。相关性分析结果显示,水分、水溶性浸出物、枸橼酸、鞣质含量与L*、a*、b*、E*均呈显著正相关(P<0.001)。PCA及HCA结果显示,不同炮制时间的乌梅炭饮片可聚为2类:0~30 min炮制样品与40~60 min炮制样品。PLS-DA发现,水分和水溶性浸出物是乌梅炭炮制过程中的重要质量指标,b*是乌梅炭炮制过程中的重要色度指标。炮制50 min和60 min样品的色度值无明显差别,炮制60 min样品的水分、水溶性浸出物、枸橼酸与鞣质含量小于炮制50 min的样品。结论 乌梅炭颜色与内在质量具有一定相关性,乌梅炭的炒制应以40~50 min为宜。

基于Aβ42转基因果蝇对红参多糖防治阿尔茨海默病作用及机制的研究

目的:观察红参多糖对β淀粉样蛋白(Aβ)42转基因果蝇阿尔茨海默病模型行为学的影响,并检测果蝇脑组织β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、环腺苷酸(cAMP)及乙酰胆碱酯酶(AChE)水平,评价红参多糖对阿尔茨海默病的治疗作用并探讨其可能的作用机制。方法:正常野生型果蝇作为空白组,Aβ42转基因果蝇随机分为3组,即模型组、红参多糖组、盐酸多奈哌齐阳性对照组。8 d后比较果蝇的攀附指数、进入无障碍可食离心管果蝇的个数以及果蝇脑组织中Aβ1-42、SOD、MDA、cAMP及AChE含量。结果:攀附指数显示红参多糖组、阳性对照组均极显著高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01),且红参多糖组与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在各时段内,红参多糖组、阳性对照组进入无障碍可食离心管果蝇个数均显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。红参多糖组、阳性对照组果蝇SOD活性均显著高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01),红参多糖组、阳性对照组果蝇Aβ1-42、MDA、cAMP、AChE含量均显著低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01),且红参多糖组与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红参多糖可提高果蝇脑组织中SOD活性、降低其Aβ1-42、MDA、cAMP及AChE水平,推测红参多糖可能是通过改善Aβ沉积、抗氧化和改善神经细胞信号转导等方面,对Aβ42转基因果蝇起到较好的治疗作用,且其效果与阳性对照药相当。

基于分子网络图结合液质联用技术的莲子皮中生物碱类成分分析及含量测定

目的:利用分子网络图结合超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS)鉴定莲子皮中生物碱类成分,采用高效液相色谱法对莲子皮中甲基莲心碱含量进行测定。方法:选用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-0.1%氨水(B)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,75%~40%B;30~40 min,40%~20%B),流速为0.2 mL·min^(–1),柱温为30℃,进样量为2μL,正离子模式下进行数据采集,将采集得到的MS/MS数据导入全球天然产物社会分子网络(GNPS)构建分子网络图并进行可视化分析。选用Aglient ZORBAX XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺(62∶38)为流动相等度洗脱,流速为1.0 mL·min^(–1),检测波长为282 nm,柱温为25℃,进样量为20μL,对莲子皮中甲基莲心碱进行含量测定。结果:从莲子皮中共鉴别出14个生物碱类化合物,其中甲基莲心碱质量分数为0.033 mg·g^(-1)。结论:莲子皮中含有丰富的生物碱类成分,为莲子炮制带皮入药提供了一定的科学依据。

基于9个甾体皂苷成分含量的多元统计分析区分正品重楼及其混淆品

目的探究正品重楼及其混淆品中9个皂苷类有效成分含量差异,为重楼鉴别及扩充重楼资源提供理论依据。方法采用高效液相色谱法测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅳ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H的含量,进一步采用多元统计方法对其含量结果进行分析。结果长柱重楼和南重楼分别与云南重楼与七叶一枝花相似,但含量不及2种正品;白花重楼的9个皂苷含量明显低于2种正品重楼,但也有一定的入药价值;毛重楼与凌云重楼中皂苷含量极低,药用价值低。结论基于9个甾体皂苷能够通过高效液相色谱法对重楼正品及混淆品进行初步鉴别,并且该研究为重楼的质量评价提供了一定的数据支持,也为缓解野生重楼资源紧缺现状提供了思路。

三七多糖对阿尔兹海默症模型果蝇(Aβ42转基因果蝇)的影响及其机制研究

目的 测定三七多糖含量,观察三七多糖对Aβ42转基因果蝇影响,探讨三七多糖对阿尔茨海默症的治疗作用及其作用机制。方法 利用苯酚硫酸法测定三七总多糖含量;野生型果蝇为空白组、Aβ42转基因果蝇随机分为3组,即模型组、三七多糖组、阳性对照组(盐酸多奈哌齐),分别设置0.008、0.04、0.20、1.00、5.00 mg/mL5个给药浓度。检测各组果蝇攀爬能力;比较各组果蝇存活时间,包括平均寿命、半数死亡时间、最高寿命,并利用酶联免疫试剂盒测定果蝇脑组织中β-淀粉样斑块、丙二醛、环磷酸腺苷、乙酰胆碱酯酶含量及超氧化物歧化酶活性。结果 果蝇的攀爬指数在1 mg/mL前呈剂量依赖性,即随着给药浓度的升高,果蝇的攀爬指数相应升高(P<0.01),在给药浓度为1 mg/mL时,攀爬指数为85.11%达到峰值;三七多糖组果蝇的平均寿命、半数死亡时间、最高寿命均显著高于模型组(P<0.01);三七多糖组果蝇脑组织超氧化物歧化酶活性显著高于模型组(P<0.01);三七多糖组果蝇脑部Aβ-42(P<0.05)、丙二醛(P<0.01)、乙酰胆碱酯酶(P<0.05)含量均显著低于模型组。结论 三七多糖对Aβ42转基因果蝇具有较好的治疗作用,推测其治疗作用可能与改善β淀粉样蛋白沉积、抗氧化、减少乙酰胆碱水解等相关。

基于液质联用技术的白芍净制研究

目的采用液质联用技术,对比研究白芍及其根皮物质基础,初步探讨白芍净制的科学内涵。方法将收集到的白芍除去头尾及细根,置于沸水中煮10分钟左右取出,刮去外皮,晾干,得到白芍饮片和白芍根皮。采用Waters UPLC HSST3色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,全扫描/数据依赖二级质谱扫描(Full MS/dd MS2)模式分析,根据碎片信息及参考文献对白芍和白芍根皮的成分进行分析鉴定。采用赛默飞的质谱分析软件(Thermo Xcalibur Qual Browser)提取白芍及白芍根皮中化学成分的峰强度,通过对比各成分的峰强度,对白芍及白芍根皮中的化学成分的峰强度(含量)进行分析。结果白芍及其根皮中共解析出38种化合物,其中白芍中未检测到脱落酸和邻苯二甲酸二丁酯,白芍根皮中未检测到没食子酸甲酯。白芍与其根皮中所含化学成分的含量差异较大,白芍中芍药苷、没食子酰基芍药苷、4-羟基白芍苷、牡丹皮苷(F、I、E、H)、氧化芍药苷、没食子酸、没食子酸甲酯等16种成分含量高于白芍根皮;芍药内酯苷、芍药内酯苷B、鞣花酸、原儿茶酸、山奈酚、脱落酸、邻苯二甲酸二丁酯等18种成分含量在白芍根皮中较高。结论白芍去皮除去了杂质和非药效成分;经水煮、去皮后,白芍与同来源的赤芍化学成分的种类及含量均发生变化,是二者药效具有差异的主要原因,初步阐释了白芍净制的科学内涵。

牵牛子生品、炒品酚酸类成分的HPLC-MS分析

目的:采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术对牵牛子生品、炒品中化学成分进行分析。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,在负离子模式下扫描,记录总离子流图。结果:从牵牛子生品和炒品中共分离鉴定了9个共有化合物,其中7个酚酸类,1个黄酮苷类,1个酯类。结论:牵牛子炒制前后化学成分发生变化。牵牛子生品、炒品化学成分种类未发现变化,但成分含量发生变化,酚酸类成分咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C等峰强度均发生变化。其中咖啡酸、绿原酸、异绿原酸B炒后含量降低,新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C炒后含量升高。

HPLC法同时测定牛黄解毒片中黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素的含量

目的：建立牛黄解毒片多成分（黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素）含量测定方法,完善牛黄解毒片质量控制标准。方法：以Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm,5μm）为色谱柱,检测波长：260nm,进样量：10μL,柱温：30℃,流速：1.0m L/min,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸为流动相B,进行梯度洗脱。结果：含量测定中黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素的线性范围依次是5.06~202.4μg/m L、1.836~30.6μg/m L、0.196~7.84μg/m L、0.992~19.84μg/m L;相关系数R2依次是0.999 7、0.999 1、0.999 8、0.999 8;平均回收率分别是99.17%（RSD=0.72%）、97.46%（RSD=0.85%）、97.91%（RSD=1.97%）、98.23%（RSD=0.82%）（n=6）。结论：该方法准确度高,可以用于牛黄解毒片的质量评价。

菟丝子生品及3种炮制品中总黄酮含量的比较研究

目的:建立菟丝子总黄酮含量测定方法,并比较生品及3种炮制品的总黄酮含量。方法:采用紫外分光光度法,以金丝桃苷为对照品,建立菟丝子总黄酮的含量测定方法,并用此方法测定生品及3种炮制品的总黄酮含量。结果:建立了菟丝子总黄酮的含量测定方法,用此方法测定菟丝子生品中的总黄酮含量为1.68%,清炒品为2.26%,酒炙品为2.27%,盐炙品为2.22%。结论:本方法简便、准确,适合于菟丝子总黄酮含量的测定,菟丝子炮制后的总黄酮含量较生品有了显著升高,其中酒炙品升高最多。

市售雄黄药材及饮片质量考察

目的：进行了市售雄黄药材及饮片的晶形结构及主成分硫化砷含量的测定,考察了市售雄黄药材及饮片的质量。方法：采用X射线衍射法对市售雄黄药材及饮片进行了物相（晶形）分析,采用《中国药典》（2010年版一部）雄黄项下滴定法测定了雄黄药材及饮片中硫化砷含量。结果：12号、13号雄黄药材主成分是α雄黄（As S）和β雄黄（As4S4）混合体,14号、15号雄黄药材主成分是α雄黄（As S）,16号雄黄药材主成分是β雄黄（As4S4）,6号雄黄饮片为二氧化硅和α雄黄（As S）的混合体。市售药材中硫化砷含量均在92%~99%范围内,含量均大于90%;雄黄饮片中硫化砷含量均在7%~87%范围内,含量均小于90%。结论：X射线衍射法可以对雄黄进行定性鉴别,市售雄黄饮片整体的质量存在参差不齐的现状。

氢溴酸槟榔碱对斑马鱼胚胎发育及心脏毒性的研究

目的探讨氢溴酸槟榔碱对斑马鱼胚胎发育及心脏的影响。方法 (1)将生长发育良好的斑马鱼胚胎随机分为对照组和200、300、400、500 mg/L氢溴酸槟榔碱暴露组,每孔20个胚胎,每组设置4孔重复。各剂量组斑马鱼胚胎分别于相应质量浓度的氢溴酸槟榔碱中暴露4天,对照组斑马鱼胚胎不予给药。在显微镜下记录斑马鱼胚胎发育情况与形态变化,包括鱼体长度、畸形情况和各脏器是否异常、受精后24小时的自主抽动次数、受精后48小时的心率、受精后48和72小时的孵化率;(2)将生长发育良好的受精后4天的斑马鱼幼鱼随机分为对照组和25、50、100μg/mL氢溴酸槟榔碱暴露组,每孔20尾,每组设置4孔重复。各剂量组斑马鱼幼鱼分别于相应质量浓度的氢溴酸槟榔碱中暴露24小时,对照组斑马鱼幼鱼不予给药。利用显微镜对药物暴露24小时后的幼鱼心率、血流量及血流速、表型、静脉窦—动脉球间距及病理组织学进行评价。结果 (1)氢溴酸槟榔碱呈浓度依赖性地使斑马鱼胚胎发育迟缓,自主抽动次数增加(P<0.01),幼鱼体长减小,心囊及卵黄囊水肿,脊柱弯曲,运动缓慢,尾部畸变,眼部黑色素沉积减少,孵化率降低(P<0.01);(2)氢溴酸槟榔碱使斑马鱼幼鱼出现心率加快(P<0.01),心律失常,血流量减少(P<0.01)等心脏毒性反应,造成静脉窦和动脉球之间距离增加(P<0.01),导致心脏功能受损,同时改变斑马鱼心脏的形状并减少心肌细胞的数量。结论氢溴酸槟榔碱可引起斑马鱼胚胎发育及心脏的毒性效应。

真实世界研究对我国中药新药人用经验合理应用的启示

近年来,真实世界研究(RWS)越来越受到国内外的普遍重视,作为随机对照试验(RCT)的补充,基于RWS产生的真实世界证据已被各国监管部门认可,将其作为药品、医疗器械审评审批的依据。随着我国监管部门对中药新药注册管理指导思想的转变,人用经验成为中药新药研发的重要方法。但中药人用经验尚缺乏统一的标准和技术指导原则,人用经验如何应用于中药新药申请审批尚不明确。本文梳理了国内外RWS的一系列法规和指导原则,借鉴RWS的成功案例和研究方法,主要从制定和完善中药人用经验相关政策法规、建立中药人用经验数据云平台、建立组织保障、注重方法学研究4方面对中药人用经验的发展应用做出思考和建议。

菟丝子醇提物对肾阳虚证模型大鼠免疫功能的影响

目的:研究菟丝子乙醇提取物对氢化可的松致肾阳虚证模型大鼠免疫功能的影响。方法:40只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、金匮肾气丸组及菟丝子乙醇提取物组,氢化可的松肌肉注射14天制备肾阳虚证大鼠模型,造模成功后分别用阳性药金匮肾气丸和菟丝子乙醇提取物灌胃,给药30 d后测定各组大鼠的胸腺及脾脏指数、外周血白细胞计数、腹腔巨噬细胞吞噬能力、T淋巴细胞亚群及血清免疫球蛋白水平。结果:菟丝子乙醇提取物可提高阳虚证大鼠胸腺及脾脏指数、白细胞计数和腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.05);促进Th淋巴细胞表达,抑制Tc淋巴细胞表达,调整T淋巴细胞亚群比值;并能改善肾阳虚证大鼠血清IgM和IgG水平。结论:菟丝子乙醇提取物能显著改善肾阳虚证大鼠的免疫功能,具有很好的免疫调节作用。

PITC、OPA两种柱前衍生方法测定瓜蒌皮中精氨酸含量的比较研究

目的:选择一种准确、简便的测定瓜蒌皮精氨酸含量的方法。方法:对异硫氰酸苯酯(PITC)和邻苯二甲醛(OPA)两种柱前衍生方法测定精氨酸的含量进行比较。结果:PITC衍生法有副反应产物,干扰测定结果。OPA衍生法简化了衍生过程,衍生方便、快速,衍生产物单一,测定结果相对准确。结论:PITC衍生法测定瓜蒌皮中精氨酸含量不准确,操作繁琐,不可作为测定瓜蒌皮精氨酸含量测定的方法。OPA衍生法测定瓜蒌皮中精氨酸含量较准确,操作简便,可为中药精氨酸含量测定方法选择提供参考。

苦杏仁药材及其饮片质量标准提高

目的:针对《中华人民共和国药典》(2015年版)苦杏仁标准中存在的显微鉴别不全面、水分项缺失以及炒苦杏仁限度不合理等问题,通过实验研究,为建立更为完善的质量标准提供参考。方法:采用5%氢氧化钾解离,稀甘油装片,显微观察苦杏仁外种皮细胞;比较甲苯法和烘干法测定水分的差异,并进行水分测定;HPLC测定苦杏仁苷的含量。结果:苦杏仁中存在多边形的外种皮细胞;采用甲苯法测定苦杏仁及其饮片的水分,20批苦杏仁的平均水分为3.6%,燀苦杏仁的平均水分为3.5%,炒苦杏仁的平均水分为3.2%;所测20批市售燀苦杏仁样品中苦杏仁苷的平均质量分数为3.0%,炒苦杏仁的平均质量分数为3.4%。结论:建议《中华人民共和国药典》标准进行相应修订,苦杏仁外种皮细胞呈类圆形或多边形;采用四部通则0832第四法测定苦杏仁及其饮片的水分,水分限度定为苦杏仁不得超过7.0%、燀苦杏仁不得超过7.0%、炒苦杏仁不得超过6.0%;炒苦杏仁中苦杏仁苷的质量分数不得少于2.4%。

防风色原酮类成分的近红外光谱定量分析

目的:本文建立了能快速测定防风中升麻素、4种色原酮含量之和的近红外光谱定量模型。方法:用高效液相色谱法测定55批防风饮片的4种色原酮的含量作为参考值,结合偏最小二乘回归法(PLS)建立回归模型。筛选了不同的光谱预处理方法、波段及最佳因子数,最终模型通过相关系数(R2)、预测均方根误差(RMSEP)和校正均方差(RMSEC)来评估其稳健性。结果:升麻素的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 025 0、0. 024 0、0. 949 9,4种色原酮含量总和的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 2460、0. 1720、0. 9110。结论:本研究建立的近红外光谱定量模型较准确,可用于对防风质量的快速检测。

不同净制工艺对三七质量的影响

目的:分析不同净制工艺对三七主根、剪口、筋条质量的影响,为建立该药材合理的净制工艺提供参考。方法:选取超声清洗5 min,超声清洗10 min,流水冲洗,锉刀打磨和清水浸泡5种清洗方式对三七进行净制处理,并参照药典的方法对其外观性状、水分、总灰分、醇溶性浸出物及有效成分含量进行测定,将各参数结合方差分析等多元统计分析进行比较。结果:超声清洗5 min更适合根和筋条有效成分的保留,超声清洗5 min和锉刀打磨2种净制方式均适用于剪口;醇溶性浸出物和人参皂苷Rg1,Rb1和三七皂苷R1含量均为剪口>主根>筋条。结论:超声清洗作为一种新型的净制方法,适用于三七所有药用部位的清洗。