猪增生性肠炎套式PCR检测方法的建立及初步应用

本试验旨在建立检测猪增生性肠炎(porcine proliferative enteropathy,PPE)的套式PCR方法,为临床快速鉴别诊断和防控该病提供病原学依据。根据GenBank上已发表的的劳森氏胞内菌(Lawsonia intracellularis,LI)的基因组序列(登录号:AM180252)设计2对特异性引物,以疑似PPE病猪粪便中纯化的DNA为模板,建立了套式PCR方法,并对PCR产物进行序列测定,所扩增的序列与GenBank上登录的劳森氏胞内菌相应序列的同源性在99%以上。应用本试验建立的套式PCR方法对疑似PPE病猪的粪便进行检测,结果表明,本方法具有快速、方便和敏感度高等优点,可用于PPE的临床检测。

抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体的制备及其与三肽囊素分子结合特性分析

为研制抗三肽囊素(Bursin,KHG-NH2)单克隆抗体(MAb),本研究采用EDC法、SMCC法将Bursin分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA、OVA)定向偶联,分别制备Bursin人工抗原BSA-KHG-NH2、OVA-KHG-NH2和BSA-S-KHG-NH2。以BSA-KHG-NH2免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选得到二株能够稳定分泌抗Bursin MAb的杂交瘤细胞株,命名为4A11和7B2。这二株MAbs均能够与BSA-KHG-NH2、OVA-KHG-NH2和BSA-S-KHG-NH2反应,不能与BSA和OVA反应;MAbs与OVA-KHG-NH2的反应均能够被KHG-NH2、GKHG-NH2、HHHHHHKHG-NH2肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断。结果表明,在Bursin分子甘氨酰胺(G)上的氨基未与其他氨基酸连接时,本实验制备的二株MAbs均能够与Bursin分子特异性结合。抗Bursin MAbs的制备,为进一步以MAb为靶分子筛选Bursin模拟表位、Bursin的生物活性关键基团等研究奠定了基础。

表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定

为探索猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF2基因,以猪痘病毒JX20G株为亲本病毒,采用同源重组技术分别构建了两株表达PCV2衣壳蛋白的重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C。结果显示,重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C均成功表达了PCV2衣壳蛋白,表达的蛋白能与PCV2单克隆抗体6E12发生特异性反应;痘苗病毒启动子P28的启动效果明显优于P7.5,P28适合用于启动目的基因;利用重组猪痘病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫小鼠后,rSWPV11-28C疫苗组的PCV2抗体水平与某PCV2商品疫苗相当,该重组病毒的成功构建为PCV2相关疾病及其他疫病在猪群中的防控提供了新的方向。

一例仔猪魏氏梭菌病诊治的报告

猪魏氏梭菌病是由魏氏梭菌感染所引起的急性传染病，该病具有发病急、病程短，常无任何前期症状而突然死亡，以全身实质器官及消化道出血坏死为特征。该菌可分为A、B、C、D和E5个血清型，不同血清型的细菌可引起不同的动物发病。

一起保育猪链球菌病的诊治

2013年5月，江西省新余市某自繁自养规模化猪场保育猪出现散发的关节肿大、跛行，偶尔可见倒地划水症状的传染病。根据发病情况、临床症状、剖检病变及实验室检测，诊断为关节炎型链球菌病，采取相应治疗措施后，疫情得到控制。

猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联活疫苗紧急免疫效果观察

在福建省三明市某发生猪流行性腹泻疫情的猪场,采用猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻(T-P)二联活疫苗对母猪群实施紧急免疫接种后,持续观察临床表现和统计临床生产数据。结果显示:母猪群在紧急免疫T-P二联活疫苗7 d后,该场腹泻疫情开始出现明显改善;在免疫后的7~45 d内,所分娩仔猪发病窝数显著降低至2.13%,哺乳仔猪发病率明显降低,且生产状态良好。

猪痘病毒江西分离株JX08的分离鉴定

采用PK15细胞培养,对江西省某猪场疑似猪痘的病猪皮肤丘疹进行病毒分离,分离到1株猪痘病毒,命名为SWPV JX08,。根据猪痘病毒基因组序列设计了5对引物,对分离毒株进行TK基因、P35基因、P23基因、TK基因上游和下游片段分别进行PCR扩增,扩增片段与GenBank收录的猪痘病毒（AF410153.1）的核苷酸序列的同源性分别为97.5%、98%、98.6%、98.2%和98%。该分离毒株不但能使PK15细胞产生稳定的细胞病变,还能适应非猪源性的Vero细胞,并产生细胞病变;电镜下可见感染的PK15细胞内形成椭圆形或圆形的包涵体,胞浆中有大量椭圆形、砖形的典型猪痘病毒粒子,病毒粒子中央为哑铃状芯髓,病毒粒子大小为（244~340）nm×（164~263）nm。该毒株皮下或静脉接种25日龄仔猪,感染7~11d后,表现典型猪痘的症状（皮肤出现丘疹）,其血清中可检测到SWPV抗体。