2023年贵阳市猪群重要疫病的流行病学调查

为掌握2023年贵阳市部分屠宰场和规模养猪场猪群重要疫病的流行动态,在贵阳市7家生猪屠宰场采集了420份猪组织和420份猪抗凝血,在4家规模养猪场采集了480份猪抗凝血和240份环境拭子样品,采用荧光PCR或RT-PCR方法检测非洲猪瘟、口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病2型和3型等病原。调查结果显示,屠宰场和规模养猪场均出现不同程度的猪圆环病毒3型感染,其他病原未检出。

山羊痘病毒反向末端重复序列的克隆与序列分析

应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y、B-株反向末端重复序列片段,将其克隆至pMD18-T载体,构建了重组质粒pMD18-ITR,再将该重组质粒转化DH5α感受态细胞进行培养,对通过PCR、酶切鉴定为阳性的重组菌进行序列测定,并将所得序列与GenBank收录的2株山羊痘病毒、3株绵羊痘病毒全基因序列进行比较分析。结果:所测4个毒株序列与GenBank上收录的山羊痘病毒该片段核苷酸序列的同源性均为100%,与绵羊痘病毒该片段核苷酸序列的同源性均为98.3%。研究结果表明,山羊痘病毒反向末端重复序列与已收录的羊痘毒株之间该片段的同源性非常高,为今后兽医临床上应用PCR方法检测羊痘病毒提供了另一更为特异、保守的基因片段。

2020—2023年贵阳市家禽高致病性禽流感的免疫抗体监测及病原学检测

为评估贵阳市2020—2023年养殖鸡群高致病性禽流感疫苗的免疫效果及禽流感病毒(AIV)的分布情况,采集全市8个县(市、区)种禽场、商品代场、散养户已免疫AIV的鸡血清样品44138份进行AIV(H5亚型)免疫抗体监测,另采集养殖场(户)、农贸市场家禽泄殖腔及野生动物公园环境拭子样品6659份进行AIV病原学检测。结果:(1)2020—2023年贵阳市养殖鸡群AIV(H5亚型)免疫抗体平均个体合格率为94%(41491/44138),平均群体合格率为96.13%(1092/1136)。(2)AIV病原学检测均为阴性。(3)不同地区鸡免疫抗体个体合格率最高为2023年息烽县99.76%(1680/1684),最低为2020年清镇市82.46%(1570/1904)。(4)不同类型养殖主体鸡免疫抗体个体合格率依次为商品代场97.21%(12774/13140)、种禽场93.24%(2662/2855)、散养户92.58%(26055/28143),群体合格率依次为商品代场98.17%(321/327)、散养户96.05%(706/735)、种禽场87.84%(65/74)。结论:2020—2023年贵阳市不同年度、地区、养殖主体的鸡AIV(H5亚型)免疫抗体合格率均高于农业农村部规定要求(≥70%),推广使用的重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗免疫效果较好;AIV病原学检测未发现阳性样品,发生疫情的风险较低。

仔猪大肠杆菌病的诊断及治疗

本文通过阐述两起由大肠杆菌引起的仔猪黄痢及水肿病的诊断及治疗案例,以期为广大生猪养殖从业者、基层一线防疫工作者在服务畜牧产业高质量发展过程中疫病防控、诊断及治疗提供参考资料。

辨证分型治疗鸡白痢的疗效观察

鸡白痢对养鸡业危害较大,为探索中草药防治鸡白痢的方法,根据中兽医理论,将鸡白痢分为疫毒痢、湿热痢、寒湿痢和虚寒痢4种类型,根据辨证施治的思路分别采用白头翁汤、芍药汤、不换金正气散和桃花汤进行治疗,以土霉素为阳性对照。结果表明,白头翁汤疗效最好并优于土霉素,从而反证鸡白痢在辨证分型上以疫毒痢为主。研究结果为使用中草药防治鸡白痢提供了试验依据。

仔猪细菌性腹泻的综合防控

细菌性腹泻是影响仔猪生长的一种重要疾病,主要由大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌等细菌引起。本文从仔猪细菌性腹泻的病因、临床症状等进行归纳分析,提出综合防控措施,以期为养猪生产者提供参考。

感染细胞与痘疹样本中山羊痘病毒PCR检测方法的建立

比较Trizol法和SDS-蛋白酶K法提取山羊痘病毒DNA后,根据山羊痘病毒P32基因设计引物,建立了能检测感染细胞培养物与组织病料的PCR方法,结果显示以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量与纯度上均明显高于Trizol法;该PCR方法对山羊痘标准毒株细胞感染物能扩增出特异性的DNA条带,最小检出量为40.625ng;且能检出山羊痘疫苗毒Y株、贵州现场分离毒LD株和QL株的细胞感染物以及山羊痘疹样本中病毒DNA,而对鸡痘疫苗毒株感染细胞、正常细胞及正常山羊皮肤均为阴性反应。这些结果表明,建立的PCR方法具有特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点,可用于山羊痘的临床诊断。

贵州省山羊痘病例的病原学鉴定与病理学观察

为对近年来发生在贵州省部分地区疑似山羊痘的疫情做出确诊，取疑似山羊痘病羊皮肤及黏膜痘疹，处理后接种Vero—E6细胞，可观察到明显的细胞病变；反向间接血凝试验显示，细胞培养液血凝效价为2^2～2^5，阳性率达100％（5／5）；以山羊痘病毒P32基因的1对特异性引物，从9份痘疹样本（共10份）及2株分离株PCR扩增出963bp的特异性DNA条带；取感染细胞培养物接种成年健康山羊，山羊出现了典型的临床症状和病理变化，接种10日龄鸡胚绒毛尿囊膜也能表现出明显的痘斑病变，痘斑出现率可达40％；病羊上皮细胞呈不同程度的水泡变性，胞浆内含多量嗜酸性包涵体；细胞内存在圆形或卵圆形、有囊膜、大小约为310nm×204nm的病毒粒子。结果表明，近年来发生在贵州省部分地区的山羊疫情是山羊痘所致。

山羊痘病毒的分离与鉴定

对贵州省2002年以来发生的疑似山羊痘病例样品进行了病毒的分离与鉴定。取山羊痘病羊的皮肤痘疹和水疱作待检病料,接种BHK-21传代细胞盲传3代后,出现了明显的、规律的细胞病变(CPE),病毒细胞培养物在F4代以后,能与山羊痘标准阳性血清在琼脂扩散试验中出现白色沉淀线,而与正常细胞的培养物及PBS不出现沉淀线;参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列,设计了1对特异性引物,对现场分离毒株进行PCR扩增,可扩增出963bp特异性的DNA条带。用待检病料感染的BHK-21细胞培养物接种9日龄鸡胚绒毛尿囊膜,随着传代次数的增加,痘斑病变的出现率从13.3%～20%上升至33.3%～40%;用山羊痘病变皮肤、鸡胚绒毛尿囊膜和感染细胞进行超薄切片,在电子显微镜下可以观察到典型的山羊痘病毒粒子。

免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用

免疫胶体金技术是20世纪80年代发展起来的一种新型免疫标记技术,应用该技术制成的胶体金试纸条具有简便、快速、灵敏、特异性高等优点。文章介绍了胶体金技术的基本原理、制备方法、胶体金技术的特点以及利用该技术制成的胶体金试纸条在兽医临床上的应用。

一起羊快疫病例的实验室诊断

羊快疫是由腐败梭菌引起的,以真胃呈出血性炎症为特征的急性传染病。常突然发病,病程极短,几乎看不到症状即死亡。2007年10月中上旬,毕节地区某养殖场羊群相继出现突然发病死亡,后经流行病学调查、临床检查、剖检观察及实验室检验,确诊为腐败梭菌引起的羊快疫。

猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查与RT-PCR鉴定

对贵州省11个猪场出现的疑似猪繁殖与呼吸综合征病例进行流行病学调查和病原RT-PCR鉴定,结果表明,发病仔猪主要表现高热,死亡率为40.35%(642/1 591);3个种猪场的待产母猪群发生繁殖障碍,流产率为8.11%(38/469);成年猪群发病率为24.47%(162/662),死亡率为4.35%(30/662);感染猪群PRRS血清抗体平均阳性率为28.12%(45/160)。对病死猪病料进行PRRS病原核酸鉴定,其平均检出率为84.44%(38/45),变异毒株试剂盒检测显示,11个临床发病猪场病例是由变异毒株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征。

猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查与病原核酸检测

为了解贵州省猪群中猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的流行情况，并对l临床发生的疑似PRRS疫情作出确定性诊断，本试验采用PRRS酶联免疫诊断试剂盒对非免疫猪群和免疫猪群的1254头份血清样本进行抗体检测，采用RT—PCR方法对疑似病例样本进行鉴定。结果显示，非免疫健康猪群PRRS抗体阳性率为5．90％；发病猪群阳性率为29．16％；免疫猪群抗体阳性率为59．45％；利用针对PRRSVGP5基因的引物对疑似病例样本进行了PCR扩增，将所得序列与GenBank收录的7株PRRSVGP5基因的核苷酸及氨基酸序列比较分析，结果与欧洲株（Lv）的同源性分别为50．0％和46．7％，与美洲株（VR2332）的同源性分别为88．7％和89．9％，而与国内其它毒株的同源性为93．9％～99．1％和91．5％～99．5％；系统进化分析显示贵州分离株均为美洲型。PRRSVNsp2变异毒株特异性PCR诊断试剂盒鉴定结果显示，疑似病例样本均扩增出特异性条带，表明流行在贵州省猪群中的PRRSV毒株均为变异毒株。

山羊痘直接荧光抗体检测方法的建立与应用

用兔抗山羊痘病毒IgG制备荧光抗体,检测了临床发病山羊皮肤痘疹切片和山羊痘病毒B、Y、LD和QL株感染的BHK-21细胞中的病毒抗原。结果,皮肤痘疹切片、感染细胞抹片及飞片均呈阳性,而正常山羊皮肤和细胞对照为阴性;荧光抗体的最适工作浓度为1∶32,且这种荧光可被山羊痘标准阳性血清特异性抑制。表明,建立的山羊痘直接荧光抗体检测方法能对临床发病山羊皮肤痘疹和感染细胞中的山羊痘病毒抗原进行定位检测,为临床诊断山羊痘提供了一种简单快速的方法。

一株猪细小病毒的分离与鉴定

取疑似猪细小病毒(PPV)流产胎儿组织病料,处理后接种PK-15传代细胞,2～4 d后出现了明显的细胞病变;荧光抗体试验结果显示,PPV呈现阳性;以猪细小病毒VP2基因的1对特异性引物,从PPV疫苗、流产胎儿病料及感染细胞培养物中PCR扩增出158 bp的DNA条带;扩增产物经EcoR I酶切分析,得到了预期的条带(123 bp和35 bp),从而证实PCR方法的特异性;敏感性试验结果显示,PCR的最小检出量为300 pg.研究结果表明,2006年9月发生在贵州省某种猪场的疫情确由猪细小病毒感染所致.

贵阳地区新发生猪传染病的血清学检测

采用血清学方法对贵阳地区部分种猪场、规模饲养场及农村散养户猪群分别进行PPV、PRV、PRRS、PCV及APP抗体水平监测。以乳胶凝集试验检测PPV抗体阳性率为0%(0/160);以间接ELISA检测PCV和PRRS的抗体阳性率分别为14%(28/200)和0.62%(1/160);以竞争ELISA检测PRV的gpI抗体阳性率为19.14%(36/188);以间接血凝试验检测APP的抗体阳性率为19.14%(36/188)。结果表明,PPV和PRRS似乎不是引起贵阳地区猪繁殖障碍的主要原因,而PRV和APP在非免疫猪群中的抗体阳性率较高,应引起该地区养猪业的高度重视。

山羊痘病毒SYBR Green I荧光PCR检测方法的建立

为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green I荧光PCR方法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物。以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立并优化SYBR Green I模式荧光PCR检测GPV的ITR基因的方法,并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green I荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速。