黄芪总皂甙对病毒性心肌炎小鼠心肌损伤及肌浆网钙泵的影响

目的:观察黄芪总皂甙(AS)及黄芪注射液(AI)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌损伤的保护作用及其对心肌肌浆网钙泵的影响。方法:腹腔接种柯萨奇B3亲心肌病毒株建立小鼠VMC模型,分成模型组、AS组、AI组及正常对照组,分别观察各组小鼠死亡率、心肌病理变化、血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量及心肌肌浆网钙泵(SERCA)活力等指标。结果:模型组死亡率高于对照组(P=00042)、AS组及AI组(P<005);cTnI含量显著高于对照组(P<0001),也高于AS组(P<0025)及AI组(P<005)。AS及AI组的心肌坏死和炎症等病理改变则轻于模型组(P<001)。模型组心肌SERCA活力显著低于对照组(P<0001),AS组(P<001)及AI组(P<005)。结论:AS和AI对VMC小鼠心肌损害具有不同程度的保护作用,AS是黄芪治疗VMC的有效成分;改善VMC小鼠心肌SERCA的活力,可能是黄芪及AS保护感染病毒小鼠心肌免受损害的作用机制之一。

人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定

目的 提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法 心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果 从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分子量约为 2 4 0 0 0 ,纯度约为 84 %。结论 纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别 ,本实验从人心肌中成功制备cTnI。

血清cTnI对病毒性心肌炎诊断价值的研究

目的 分别观察多种病毒感染后血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)变化 ,结合心电图 (ECG)及临床特征 ,阐述其对病毒性心肌炎 (VMC)心肌损伤的诊断价值。方法与结果 VMC患者 180例ELISA双抗夹心法定量测定血清cTnI ,升高 97例 (5 4% ) ,其中重症 19例、有病毒感染史与ECG改变 2 7例血清cTnI均增高。 19例丙型病毒性肝炎患者 ,8例血清cTnI增高。 5 0例带状疱疹病毒感染者 2 0例血清cTnI增高 ,且与临床严重度有关 ,其中 17例ECG呈多样性表现。 6 5例VMC且cTnI持续增高者在病程 1、3、6、9、12个月时转阴率分别为 47 7%、5 2 3%、90 8%、92 3 %、98 5 %。

中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I基因突变类型的研究

目的研究中国肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因突变类型。方法肥厚型心肌病患者58例,男36例,女22例,年龄10～77岁,平均(46±18)岁。正常对照100例,男60例,女40例,年龄10～68岁,平均(33±12)岁。聚合酶链反应(PCR)扩增肥厚型心肌病患者及正常对照组cTnI基因5、7及8号外显子,结合单链构型多态性及直接测序法分析结果。结果未见国外已报道的cTnI基因突变类型(Pro82Ser,Arg145Gly,Arg145Gln,Arg162Trp,ΔAAG183,Asp196Asn,Gly203Ser,Ser199Asn,Lys206Gln,8号外显子缺失33bp),但在7号外显子发现一新的Arg145Trp突变。此外,在7号外显子尚见179位密码子GAG→GAA多态性。结论所研究的肥厚型心肌患者群未发现国外报道的cTnI基因突变类型。与国外比较,中国肥厚型心肌病cTnI基因突变类型可能具有不同的特点。

钙调神经磷酸酶在肾血管性高血压大鼠心肌肥厚发展中的作用

本文观察了钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在肾血管性高血压大鼠肥厚心肌中的表达和活性以及CaN抑制剂——环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)对逆转心肌肥厚的影响。利用两肾一夹肾血管性高血压大鼠心肌肥厚模型,观察大鼠心肌肥厚程度、CaN mRNA和蛋白质表达及CaN活性的改变。结果显示:大鼠左室重与胫骨长度的比值和光镜下心肌细胞横截面积在两肾一夹2月和3月组都较相应假手术组增高(P<0.05),CsA组大鼠左室重与胫骨长度比值、心肌细胞横截面积较两肾一夹2月和3月组均显著下降(P<0.05),与假手术组无显著性差异。大鼠心肌CaN mRNA和蛋白质表达及CaN活性在两肾一夹2月和3月组均高于相应假手术组(P<0.05),在CsA组低于两肾一夹2月和3月组(P<0.05)。这些结果提示,CaN参与肾血管性高血压大鼠心肌肥厚发展,抑制CaN活性可逆转心肌肥厚。

血清肌钙蛋白I测定对暴发型流脑并发心肌损伤的研究

目的 探讨暴发型流行性脑脊髓膜炎 (流脑 ,FMM )患者并发的心肌损伤。方法 1 6例生前有心功能不全病史的暴发型流脑患者 ,分别在入院时及出现临床心力衰竭或中枢神经系统症状时抽血测定血清肌钙蛋白I(cTnI)浓度 ,部分病例死亡后立即穿刺心室肌 ,制成超薄切片后电镜观察超微结构改变。结果 1 6例患者临床症状明显时血清cTnI浓度均明显增高 (P <0 0 0 1 ) ,电镜示有心肌细胞变性坏死及肌丝破坏。结论 暴发型流脑常并发心肌损伤 。

经皮冠状动脉腔内成形术后血清肌钙蛋白Ⅰ变化对预后意义

目的 通过动态测定行经皮冠状动脉腔内成形术 (PTCA)患者的血清肌钙蛋白Ⅰ (cTnI)及肌酸激酶同功酶CK MB的变化 ,并随访观察心脏事件的发生率 ,以评价cTnI对预后的判断价值。方法 对 73例行PTCA术的冠心病患者 ,分别测定其术前 ,术后 6 ,12 ,2 4,48,72h的血清cTnI及CK MB水平 ,进行分组比较 ,其中 6 2例患者进行随访观察。结果 2 0例患者术前cTnI正常 ,术后 6h升高 ,平均 (18± 6 )h达峰值 ,48～ 72h渐降至正常 ;33例术前和术后cTnI均正常 ;16例术前术后cTnI均高于正常值。仅 5例CK MB增高。cTnI升高与PTCA总时间及扩张次数有关。随访 (196± 10 0 )d ,发现心脏事件在cTnI增高组与未升高组之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 PTCA术可能会造成心肌微小损伤 ,cTnI为监测心肌损伤的可靠而灵敏指标。PTCA术后cTnI短暂升高似乎并不增加心脏事件的发生率。

中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白基因突变研究

目的:初步探讨中国人群肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白T基因突变情况,为该病的早期防治和康复介入奠定理论基础。方法:提取58例肥厚型心肌病(hypertrophiccardiomyopathy,HCM)患者外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增心肌肌钙蛋白T(cTnT)基因8、9、11号外显子,产物做单链构象多态性(SSCP)分析,出现异常条带者直接测序验证。结果:58例临床确诊的HCM患者cTnT基因8,9,11号外显子,除160位密码子存在ATC和ATT多态性外,未发现基因位点的异常。结论:与国外报道的肥厚型心肌病约20%是由肌钙蛋白T基因突变引起相比较,中国人群肥厚型心肌病患者基因突变可能存在不同的特点。

培多普利对高血压大鼠左心室肥厚的影响

目的:探讨培多普利对原发性高血压大鼠左心室肥厚重构及进程中血管紧张素II(Ang-II)和肌浆网钙ATP酶的影响。方法:原发性高血压大鼠分成模型组、培多普利治疗组[SHR-t1mg/(kg)·d],WKY大鼠为正常对照组(WKY)。电镜观察左心室肥厚的超微结构,并分别测定心肌指数(左室重/体质量,LV/WT),血、心肌Ang-II水平和肌浆网钙ATP酶的活性变化。结果:SHR-t组的血AngII水平无明显改变,SHR组的血压、LV/WT(3.98±0.32)mg/g、Ang-II(16.72±5.24)pg/mg水平显著升高(P<0.01),电镜下可见心肌相对缺氧及代偿性细胞功能活跃表现。SHR-t组血压、LV/WT(3.38±0.31)mg/g、Ang-II(12.94±1.63)pg/mg明显下降(P<0.05),且未见上述心肌超微结构改变;但SHR-t组的LV/BW与WKY组(2.29±0.49)mg/g相比仍有显著差异(P<0.01);SHR组肌浆网钙ATP酶活性明显下调[0.52±0.11μmol/(g·min),P<0.05],治疗后恢复[0.82±0.11μmol/(g·min),P<0.05],但仍未达正常。结论:ACE-I主要通过抑制局部肾素-血管紧张素系统通路,对高血压大鼠左心室肥厚重构起了很好的逆转作用,但不可能完全阻断左心室肥厚的进程。

鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因克隆和序列分析

目的:克隆鼠抗人cTnImAb Fab段基因并进行序列分析.方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI mAb的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析.结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bp DNA片段.经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征.在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链).结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnImAb Fab段基因,为鼠抗人cTnI的人源化改造奠定了基础.

血清肌钙蛋白I对儿童病毒性心肌炎的诊断价值

目的 了解心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)对病毒性心肌炎的诊断价值。方法 用双抗ELISA法动态测定 46例病毒性心肌炎患者的血清cTnI,同时检测肌酸激酶同功酶 (CK MB)。结果 46例患者cTnI的阳性率为 80 4% ,CK MB的阳性率为 45 7% (P <0 0 5 )。病程 15天cTnI的检出率为 80 4% ,而CK MB的检出率为 2 1 3 % (P <0 0 1)。病程 6 0天cTnI的检出率为 2 4 4% ,而CK MB正常。结论 cTnI诊断病毒性心肌炎较CK MB具有更高的敏感性和持异性 ,诊断窗口时间较CK MB长。测定cTnI有助于病毒性心肌炎的早期诊断和了解疾病进展。

血清肌钙蛋白Ⅰ水平与不稳定性心绞痛患者预后的关系

目的 探讨肌钙蛋白Ⅰ对不稳定性心绞痛 (UA)微小心肌损伤的判断价值以及对其预后的价值。方法 对 10 6例UA和 44例稳定性心绞痛 (SA)患者、6 8例冠状动脉造影正常者及 72例健康者进行血清心肌肌钙蛋白Ⅰ (cTnⅠ )及肌酸激酶同工酶 (CK MB)测定 ,部分患者测定血清心肌肌钙蛋白T(cTnT) ,观察住院及出院后 90～ 45 0d心脏事件发生率 ,用Logistic单因素和多因素回归分析 2 3个可能危险因素。结果 6 1例UA患者血清cTnⅠ增高 (5 7 5 % ) ,而SA患者只 8例增高 (18 18% ) ,血清cTnⅠ增高者发生心脏事件者明显高于cTnⅠ正常者 (P <0 0 0 1) ,血清cTnⅠ水平越高 ,心脏事件发生率越高 ;血清cTnⅠ水平与心绞痛严重程度密切相关 (r =0 5 3,P <0 0 0 1) ;cTnT检出心肌微小损伤及预测预后与cTnⅠ有相似的作用。结论 cTnⅠ是判断心肌细胞微小损伤的敏感和特异性指标 。

牛心肌肌钙蛋白Ⅰ的纯化及鉴定

目的:提取和纯化牛心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)。方法:心室肌经匀浆、离心、盐析提取、CMSephadexC鄄50柱层析、DEAESephadexA鄄50柱层析,获得牛cTnⅠ。结果:从100g湿重牛心肌中获得15mg牛cTnⅠ,SDS鄄PAGE示牛cTnⅠ相对分子质量约为27ku,纯度约为90%,Western印迹证实纯化的牛cTnⅠ可被抗人cTnⅠ单克隆抗体识别。结论:实验从牛心肌中成功制备cTnⅠ。

妊娠相关血浆蛋白-A的纯化与鉴定

目的:建立人妊娠血浆相关蛋白A(PAPP-A)的纯化与鉴定方法。方法:利用DEAE-Sephadex CL-6B离子交换和Heparin-sepharose CL-6B亲和层析进行分离纯化,变性SDS-PAGE测定其相对分子质量为200kD,Western blotting鉴定其特异性。结果:获得相对分子质量为200kD的蛋白条带,此条带可与妊娠血浆相关蛋白A单克隆抗体发生特异性反应。结论:成功地从孕妇血清中分离得到妊娠血浆相关蛋白A。

氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(Ox-LDL mcAb)。方法以Ox-LDL为抗原,免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞,用protein A柱亲和层析法纯化腹水中mcAb,用ELISA,western- blot等鉴定其生物学活性。结果获得2株能稳定分泌Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞(6E9D,7G3C),均为IgG1亚型;染色体数目为100-106条;腹水效价为105;western-blot分析和ELISA检测证实2株mcAb均与Ox-LDL有较高的特异性。结论本实验成功制备了2株抗Ox-LDL特异性的mcAb,可用于Ox-LDL免疫检测方法的建立。

寻找一种诊治心肌损伤的新方法:鼠抗人cTnI单抗Fab段基因克隆和序列分析(英文)

背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一样本研究。单位:一所医科大学附属医院的心血管病研究所。材料:本实验于2003-01/2004-05在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。分泌鼠抗人cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株(JS200202)由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析。主要观察指标:重链Fd段和κ轻链基因序列及其所属亚型。结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bpDNA片段。经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征。在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链)。结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因,为鼠抗人cTnI单克隆抗体的人源化改造奠定了基础。

烧伤病人检测血清肌钙蛋白Ⅰ的临床意义

目的 了解烧伤病人检测血清肌钙蛋白Ⅰ (cTnI)的临床意义。方法 5 5例烧伤病人于伤后 1天、2天、3天、5天、7天、1 4天、2 1天采血 ,用抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单抗 ,建立酶联法检测血清cTnI,同时检测肌酸激酶、肌酸激酶同功酶、乳酸脱氢酶和α 羟丁酸脱氢酶。结果 烧伤早期 ,有面部烧伤的病人 ,其cTnI值升高率达 6 0 %。创面感染和全身性炎症反应综合征时cTnI明显升高。结论 用抗人cTnI单抗检测血清cTnI可作为烧伤病人缺血性心肌损伤的灵敏的、特异性指标之一。

内皮素受体拮抗剂Bosentan对培养乳鼠心肌细胞心钠素分泌的影响及其意义

目的 观察内皮素 - 1(ET- 1)促进心钠素 (ANP)分泌作用及内皮素受体拮抗剂 Bosentan对心钠素分泌的影响。方法 通过 SD乳鼠心肌细胞培养 ,分别在无或有 ET- 1(10 - 1 0 mol/L)作用的情况下 ,在细胞培养液中加入 Bosentan(10 - 8m ol/L)干预 ,72 h后收集细胞培养液测定 ANP。结果 ET- 1刺激使心肌细胞分泌 ANP由 (6 .46± 0 .38) ng/ml增加至 (13.6 0± 1.12 )ng/ml,但应用 Bosentan可以明显降低 ANP的分泌 ,由 (13.6 0± 1.12 ) ng/ml降至 (9.42± 0 .5 8) ng/ml,P<0 .0 5。在无 ET- 1刺激时 Bosentan也可使 ANP由 (6 .46± 0 .38) ng/m l下降至 (5 .0 7± 0 .2 6 ) ng/ml,P<0 .0 5。结论 ET- 1可使 ANP分泌增加 ,但不论有无 ET- 1刺激 ,Bosentan均可使 ANP分泌减少。提示 Bosentan能抑制心肌细胞肥大 。

抗人脑钠肽单克隆抗体的制备及其鉴定

目的:制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:实验于2004-12/2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原,反复免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb/c小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)在PEG下融合,HAT选择性培养,间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选,选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆,建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后,腹腔注射小鼠,制备腹水。对腹水亲和层析纯化,所得的单克隆抗体行初步鉴定。结果:免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性,经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型,蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽,具备较高的特异性及敏感性。结论:成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体,可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。