一株金黄色葡萄球菌信号分子AI-2的检测

检测一株金黄色葡萄球菌合成群体感应信号分子AI-2情况。在菌株培养上清液中加入哈维氏弧菌BB170培养4h,检测发光强度,反映AI-2合成情况。进一步改变温度、pH、碳源等培养条件,分析环境因素对AI-2合成的影响。结果表明,金黄色葡萄球菌在培养16h时,上清液中AI-2的诱导发光值达到最大,为8987,是阴性对照的4.84倍。温度37℃下,上清液中AI-2的诱导发光值最大,为6299,是阴性对照的3.39倍;pH 7时,上清液中AI-2的诱导发光值最大,为9408,是阴性对照的5.07倍;以乳糖为碳源,上清液中AI-2诱导发光值最大,为10343,是阴性对照的5.57倍。金黄色葡萄球菌具有AI-2合成能力,且环境因素会影响AI-2的合成。

过表达橡胶草糖转运蛋白TkSWEET1促进橡胶草的橡胶合成

橡胶草是产胶替代植物,其橡胶产量与库器官中的糖代谢过程密切相关,SWEET糖转运蛋白参与调控糖在库器官的分配。前期研究发现,TkSWEET1具有糖转运活性,并在橡胶草胶乳(乳管的细胞质)中表达量较高。本研究首先通过qPCR检测了TkSWEET1在橡胶草全生育期的时空表达特征,结果表明其在橡胶草中后期的根和胶乳中高表达。本研究还通过乳管特异表达基因(TkREF)的启动子过表达TkSWEET1。三个独立稳定转化株系中,TkSWEET1的表达量均显著高于野生型,但TkSWEET1-GFP融合蛋白并非乳管细胞特异。过表达TkSWEET1显著促进了根的伸长,并有增加根中胶含量和单株胶产量的趋势,而根部可溶性糖的含量、植株生物量并无显著影响。本研究为进一步探究橡胶草糖代谢对天然橡胶生物合成的影响提供参考。

橡胶草糖转运蛋白TkSWEET3基因的克隆和功能初步分析

为了对橡胶草中SWEET蛋白功能进行初步分析,本研究根据橡胶草基因组和转录组数据克隆了橡胶草SWEET基因(TkSWEET3),随后利用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测了TkSWEET3的组织表达特异性,通过烟草叶片瞬时表达法对TkSWEET3蛋白进行亚细胞定位,利用酵母异源表达系统检测TkSWEET3的糖转运活性。结果表明:TkSWEET3具有明显的SWEET蛋白结构域,包含两个MtN3/saliva结构域和保守基序,具有6个跨膜螺旋结构,与AtSWEET3、OsSWEET3a和OsSWEET3b具有较近的亲缘关系;TkSWEET3基因在叶、花梗、花和根中均有表达,在胶乳中不表达,其中在花中表达量最高;TkSWEET3蛋白定位在细胞膜,能够转运葡萄糖和半乳糖。本研究结果为探究TkSWEET3基因在橡胶草生长发育过程中的糖分配作用机理提供了依据。