DNA氧化损伤生物标志物8-OH-dG的检测及其在医学中的应用

8 羟基 2’脱氧鸟嘌呤核苷 (8 OH dG)是活性氧自由基氧化损伤细胞核DNA或线粒体DNA后形成的产物。作为内源性及外源性因素对DNA氧化损伤作用的生物标志物 ,8 OH dG是一个极有前途的指标。 8 OH dG的分离检测方法主要有高效液相色谱 电化学 (HPLC EC)、3 2 P后标记 薄层色谱 (3 2 PPostlabel TLC)、免疫化学分析、荧光后标记、[3 H]标记 HPLC、高效毛细管电泳 (HPCE)及气相色谱 质谱 (GC MS)。这些方法在抗衰老医学、肿瘤病因学、分子流行病学等领域有着广泛的应用前景。

细胞DNA中8-OH-dG的毛细管区带电泳检测方法的研究

目的以人肝肿瘤细胞HepG2为工具细胞,通过优化选择毛细管区带电泳的运行电压、温度、缓冲溶液pH值等条件,建立细胞DNA氧化损伤后8OH dG的毛细管区带电泳分离检测方法,并以此方法分别检测未经H2O2处理组与经15mmol LH2O2处理组HepG2细胞DNA中8OH dG含量的变化。方法提取DNA采用饱和盐析法,避免经酚氯仿抽提导致8OH dG的产生。DNA溶液中加入DNaseI、蛇毒磷酸二酯酶及碱性磷酸酶得到游离核苷,并经去蛋白,二乙醚抽提后用于HPCE分析。优化后的分析条件为紫外检测器波长为254nm;pH值为9.5,浓度为20mmol L硼酸钠水溶液;毛细管长度为47cm;运行电压为25kV;温度为25℃;进样方式为重力进样,进样时间为20秒。结果在上述实验条件下,细胞DNA处理得到的游离核苷电泳结果与5种核苷标准品的电泳结果符合。经或未经H2O2处理组HepG2细胞DNA中均检测出8OH dG峰,H2O2处理组细胞DNA中8OH dG含量增加。结论此方法操作简便易行,进样量小,需时间及费用少,灵敏度较高,对人体无损害,并为8OH dG在人群生物监测方面的应用奠定了实验基础。

苯并(a)芘对体外培养人胚肺成纤维细胞活力的影响

目的研究苯并(a)芘[B(a)P]对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)活力的影响。方法不同浓度B(a)P、不同染毒时间处理HELF细胞。低浓度染毒组分为10个剂量组,浓度梯度为10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039、0.018μmol/L,染毒时间分别为2、4、6、24h;高浓度染毒组分为4个剂量组,浓度梯度为125.0、62.5、31.3、15.6μmol/L,染毒时间分别为2、4、6、24、48、72h;以浓度为0.25%DMSO的无血清DMEM高糖培养基溶液为阴性对照组,应用四甲基偶氮噻唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)研究B(a)P对HELF细胞活力的影响。结果与阴性对照组比较,0.018～10.000μmol/L低剂量B(a)P染毒组在所有时间点上对HELF的细胞活力无影响(P>0.05)。15.6～125.0μmol/LB(a)P染毒HELF细胞,2、4h后对HELF细胞活力无影响。125.0μmol/LB(a)P染毒6h,125.0、62.5、31.3μmol/LB(a)P染毒24、48h,以及15.6～125.0μmol/L染毒72h对HELF细胞活力存在显著抑制作用(P<0.05)。结论B(a)P对HELF细胞活力的影响存在显著的时间与剂量依赖性。

两种化妆品原料的短期毒理学安全性评价

目的初步评价两种化妆品原料短期毒理学安全性,探讨测试与评价方法中需要注意的问题。方法以家兔14 d皮肤连续涂抹试验、家兔眼刺激试验评价原料的急性眼刺激性与多次皮肤刺激性;以豚鼠光毒性试验测试豚鼠皮肤一次接触原料,继而暴露于紫外线照射下所引发的皮肤红斑、焦痂和水肿等毒性反应;以体外CHO细胞染色体畸变试验评价原料的致突变性。结果 1号原料多次皮肤刺激性试验结果为中刺激性;家兔眼刺激试验(不冲洗及30 s冲洗)结果为不可逆眼损伤。将其用维生素E油稀释至20%(v/v)、0.5%(v/v)后,其家兔眼刺激试验(不冲洗)结果为轻刺激性。2号原料的多次皮肤刺激试验结果为轻刺激性;豚鼠皮肤光毒试验、体外哺乳动物染色体畸变试验结果均为阴性。结论短期试验测试表明1号化妆品原料有潜在的急性刺激性危害,未发现2号化妆品原料具有强皮肤刺激性、皮肤光毒性和致突变性。

苯并(a)芘对细胞周期、细胞增殖的影响及相关信号传导途径的作用

以苯并(a)芘及其代谢物为模式化学物,围绕着DNA损伤修复、细胞信号传导途径、细胞周期检测点调控等方面,从化学致癌物对细胞周期的影响角度来阐明化学致癌物的致癌机制已成为当前环境毒理学的热点问题与研究前沿。本文就苯并(a)芘对细胞周期分布与细胞周期调节因子的影响、以及相关信号传导途径在苯并(a)芘对细胞周期与细胞增殖影响中的作用等方面,对苯并(a)芘对细胞周期的影响进行了综述。

Auchincloss乳腺癌根治术中保留胸肌神经的体会

目的探讨Auchincloss手术中保留胸肌神经的方法。方法对36例Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者行Auchincloss手术的临床资料进行分析和总结。结果全部病例均在术中解剖出三条胸肌神经并加以保护,随访1~5年,无复发和转移,仍能从事和术前同样的劳动。结论Auchincloss手术虽然保留了胸大肌、胸小肌,也应注意保留肌肉神经,以免引起术后胸肌萎缩,影响生活和工作质量。

DNA修复抑制状态下苯并(a)芘对人胚肺成纤维细胞的DNA损伤作用

目的研究DNA修复抑制状态下苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的DNA损伤情况,探讨DNA修复机制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中的作用。方法代谢活化条件下,以阿糖胞苷(ara-C,0、100μmol/L)与B(a)P(0、10、20、50μmol/L)按2×4联合染毒2h,通过彗星试验观察不同染毒条件下HELF细胞的DNA损伤情况。同时设阴性对照组(0.1%DMSO)和阳性对照组(10μmol/LK2CrO7)。结果与阴性对照组比较,B(a)P各剂量组的HELF的拖尾率、Olive尾矩随剂量增加而显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。100μmol/Lara-C单独染毒组与阴性对照组比较,拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。B(a)P+ara-C组与相应剂量的B(a)P组比较,其拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.01)。析因分析表明,ara-C与B(a)P诱导HELF的DNA损伤存在交互作用(F=3.219,P=0.024)。ara-C可增强B(a)P对HELF的DNA损伤作用。结论DNA修复抑制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中存在重要作用。

大肠癌肝转移63例早期诊断与治疗

目的总结和分析大肠癌肝转移的早期诊断与治疗结果。方法结合文献和随访资料对63例大肠癌肝转移病人通过癌胚抗原、B超、门静脉造影下CT扫描检查,提出早期诊断措施。对肝转移根治切除17例与肝转移灶未切除33例行放疗、插管化疗、无水酒精瘤体内注射等进行3、5年生存率的比较研究。结果早期诊断肝转移灶并得到根治性切除的17例病人3、5年的生存率分别为58.2%和29.41%,较未行切除的33例3、5年的生存率9.45%和0明显提高。结论大肠癌肝转移应以早期诊断和根治性手术切除肝转移灶治疗效果较好。

阑尾周围脓肿的非手术治疗

目的总结阑尾周围脓肿的非手术治疗经验。方法1995—2008年共收治阑尾周围脓肿32例。采用B超引导下穿刺置管冲洗引流,局部芒硝湿敷和静滴抗生素,并对临床资料进行详细记录。结果全部病例均治愈,未发生肠瘘。住院2周左右26例获随访,随访5～10年,除3例分别在出院后3、5、6个月后因急性阑尾炎行阑尾切除术外,其余病例均未复发。结论阑尾周围脓肿手术有一定难度且可能出现肠瘘、出血、感染等并发症。非手术疗法住院时间短,花费少,病人痛苦轻,只要感染局限在阑尾周围,应该作为首选的疗法。

胃十二指肠溃疡急性穿孔86诊疗体会

目的总结胃十二指肠溃疡急性穿孔的诊治体会和治疗效果。方法根据患者的全身情况和局部体征对86例胃十二指肠溃疡急性穿孔病人分别采用非手术治疗、单纯溃疡穿孔缝合修补术、胃大部切除术措施,并对临床资料进行回顾性分析。结果由于适应证选择得当及规范的后期治疗,本组患者均顺利康复,未出现近期严重并发症及死亡病例。对其中68例患者进行1～8 a随访,经内镜检查,未发现溃疡复发病例。结论胃十二指肠溃疡急性穿孔时,应根据每个患者的具体情况选择相应的治疗措施。对病情严密观察和规范的后期药物是保证疗效、预防溃疡复发的关键,应引起外科医师的重视。

腹部外科手术后肺部并发症232例分析

目的 腹部外科手术后肺部并发症的原因分析，以探求有效预防措施。方法 对2000～2004年我科收治的232例腹部手术病人进行回顾性研究。分析腹部手术后肺部并发症的原因及发生率。结果 232例病人中有29例术后出现手术后肺部并发症（PPC），发生率为12．50％，上腹部手术为16．51％，下腹部手术为8．94％。术前年龄〉60岁有吸烟史，原有肺部基础疾病的病人术后PPC发生率明显增高，分别为20．25％、21．36％、21．87％。手术时间长者发生率明显升高，〉4h者（87例）为37．05％，〈2h者（117例）为8．55％。结论 对高龄、吸烟、原有肺部基础疾病的高危病人术前进行肺功能评估及术中精细操作，降低手术时间对预防腹部手术后肺部并发症有十分重要的意义。

一株受二噁英类化学物质诱导表达的萤光素酶肝癌细胞系

构建了一对二英类化学物质敏感的人肝癌细胞株 ,用于二英类化学物质生物筛选和快速半定量检测 .首先构建一在二英增强子调控下的萤光素酶报告基因质粒 ,该质粒转染入人肝癌细胞株HepG2 ,筛选稳定转染细胞株 .2 ,3,7,8 四氯代二苯并二英 (TCDD)诱导稳定转染细胞株萤光素酶表达 ,发光检测萤光素酶活性 .该细胞株用于TCDD检测 ,检测下限为 1 1pmol L ,线性范围为 1～ 10 0pmol L .

胆总管探查术一期缝合的疗效观察

目的总结胆总管一期缝合的治疗体会。方法回顾性分析402例胆总管探查患者一期缝合与T管引流的术后情况。结果有选择性一期缝合胆总管优于T管引流。结论有选择性一期缝合探查胆总管值得推广。

胃大部切除术后胃功能性排空障碍12例临床分析

目的探讨胃大部切除术后功能性排空障碍的发生原因，寻求诊断及治疗方法。方法对2000．2005年施行的256例胃大部切除术的临床资料进行回顾性分析。结果本组共发生功能性排空障碍12例，发生率4．7％，均发生于手术后3—12d。所有病人均经保守治疗治愈出院，8．33％于1周后治愈，66．67％2周内治愈，91．67％3周内治愈，所有病人均于32d之内治愈。结论术后残胃和远端空肠正常的运动功能破坏是发生功能性排空障碍的主要原因。消化道造影及胃镜检查是诊断本病及与机械性梗阻鉴别的重要方法。采取非手术治疗一般均可治愈。针对胃排空动力学机制的改变采用促胃肠动力药物可能收到较好的疗效。

小鼠ScFv基因片段的构建

目的 利用分子重组技术构建小鼠单链抗体片段 (ScFv)。方法 采用PCR反应从小鼠脾细胞扩增鼠免疫球蛋白的重链和轻链可变区 ,利用连结引物将重链和轻链DNA组装成单链抗体 (ScFv)片段。结果 克隆出VH,VL 基因 ,用Linker将VH,VL 连接起来后的ScFv构建成功 ,其分子量为 75 0bp。结论 ScFv分子小 ,异源性低 ,可以结合与噬菌体载体中形成融合蛋白表达 ,该技术是抗体制备的一种简便、可靠的方法。

石英玻璃的化学脱水

一、前言 化学气相沉积法(CVD)生产的石英玻璃纯度高,使紫外透过性能改善,但它的水含量(OH^-)很高,对玻璃的透红外性能、光学均匀性、粘度、析晶性能等一系列性质影响很大。解决石英玻璃脱水可以采用干燥气流加热脱水、真空除水,但费时很长,效果不好。在生产过程中用无氢火焰或在氯气氛沉积、熔融,由于需要辅助加热等原因亦未普遍采用。近年来用含F、Cl等卤素的气、液态化合物对石英玻璃、石英粉末。

二异氰酸甲苯酯的健康影响

二异氰酸甲苯酯可引起哮喘、过敏等不良影响。本文对二异氰酸甲苯酯的理化特性、对人体的健康影响及其分子机制进行了综述。

垂体后叶素对离体蟾蜍心脏收缩力的影响

目的 :探讨垂体后叶素对蟾蜍离体心脏的作用。方法 :斯氏法游离蟾蜍心脏 ,用 1mlRinger液维持蟾蜍心脏的正常活动 ,分别加入含有垂体后叶素 0 .12 5u/ml、0 .2 5u/ml、0 .5u/ml的Ringer液 ,记录心肌收缩力和心率的变化 ;用 0 .2 5u的垂体后叶素诱导心衰后 ,将 0 .0 4mg毛花甙丙加入灌流液中 ,观察其变化。结果 :与给药前比较 ,垂体后叶素可使蟾蜍心脏心肌收缩力降低 (P <0 .0 1) ;毛花甙丙不能对抗其作用。结论 :垂体后叶素可诱发蟾蜍心脏发生心力衰竭 。

多重免疫层析检测技术在食品安全快速检测中的研究进展

随着农业及食品行业突飞猛进地发展,随之产生的多种有毒有害物质共存于食品样品中的问题日趋严重,对人类健康及经济发展造成巨大威胁,开发同时检测多重危害物的高效快速检测平台对于保障食品安全具有重要的现实意义。基于抗原抗体特异性反应的多重免疫层析快速检测技术因具有成本低廉、便携快速等特点,且可进一步提高检测效率,同时能够提供更为丰富准确的样品信息,为食品中多种危害物的同时检测提供了技术保障。文章首先综述了不同标记材料在多重免疫层析检测技术中的应用,并就多重免疫层析检测技术于食品中有毒有害物质如真菌毒素、食源性致病菌、农兽药残留等的检测应用进行总结与分析,最后对其在食品安全快速分析检测中面临的挑战和发展前景做出讨论,以期为食品安全多重快速检测方法的建立提供参考。