细胞外基质刚度调控压电型机械敏感离子通道组件1对神经干细胞分化的影响

目的 本研究旨在探讨细胞外基质刚度变化对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响及其作用机制。方法 本研究基于成功构建脊髓损伤大鼠模型,并制备不同刚度(0.7 k Pa、40 k Pa)的聚丙烯酰胺凝胶基底,将大鼠原代NSCs于不同刚度基底上培养。压电型机械敏感离子通道组件1 (piezo type mechanosensitive ion channel component 1,Piezo1) sh RNA质粒转染NSCs细胞。免疫荧光染色检测神经元标志物双皮质醇(doublecortion,DCX)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞百分比。免疫组织化学及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测损伤组织及NSCs细胞中Piezo1蛋白的表达水平。结果 与0.7 k Pa基质刚度组相比,40 k Pa基质刚度组中DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少,Piezo1蛋白表达量上升。脊髓损伤大鼠损伤组织Piezo1蛋白表达显著高于空白对照(sham)组。40 k Pa基质刚度条件下沉默Piezo1后,DCX阳性细胞数减少,而GFAP阳性细胞数增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。机制研究发现,沉默Piezo1导致IV型胶原及纤连蛋白表达下降。重组纤连蛋白逆转了Piezo1 sh RNA对NSCs分化的影响,即DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少。结论 综上可见,硬基底刚度通过促进Piezo1蛋白表达,上调IV型胶原及纤连蛋白表达,从而调控NSCs细胞分化。本研究为基于生物材料治疗脊髓损伤提供了新的视角。

TRB3沉默对氧糖剥夺/再灌注诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤的影响

目的探讨Tribbles同源蛋白3(TRB3)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法分离培养新生SD大鼠的脊髓星形胶质细胞,设置对照组(不做任何处理)、OGD/R组(进行OGD/R处理),采用Real-time PCR和Western blotting分别检测TRB3 mRNA和蛋白的表达;设置对照组(不做任何处理)、Scramble组(感染阴性对照慢病毒)与shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒),采用Real-time PCR和Western blotting分别检测TRB3 mRNA和蛋白的表达,确定TRB3 shRNA慢病毒干扰效率;设置对照组(正常培养)、OGD/R组(进行OGD/R处理)、shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒)、Scramble组(感染阴性对照慢病毒)、OGD/R+shTRB3组(感染TRB3 shRNA慢病毒后,进行OGD/R处理)与OGD/R+Scramble组(感染阴性对照慢病毒后,进行OGD/R处理),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒测定LDH漏出率,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,Western blotting检测核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达水平。使用NF-κB p65激动剂白桦脂酸(BA)20μmol/L处理OGD/R组和OGD/R+shTRB3组细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果Real-time PCR和Western blotting检测结果显示,OGD/R处理后,脊髓星形胶质细胞中TRB3 mRNA(2.15±0.12 vs.1.00±0.05)和蛋白(2.10±0.16 vs.1.00±0.08)表达水平明显升高(P<0.05);与对照组比较,shTRB3组星形胶质细胞中TRB3 mRNA(0.30±0.07 vs.1.00±0.10)和蛋白(0.30±0.04 vs.1.00±0.06)表达水平明显降低(P<0.05),表明TRB3 shRNA慢病毒感染成功。与对照组比较,OGD/R组、OGD/R+Scramble组星形胶质细胞活性、SOD活性及细胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显降低,LDH漏出率、MDA含量、TNF-α水平、IL-1β水平及细胞凋亡率明显增高(P<0.05);与OGD/R组和OGD/R+Scramble组比较,OGD/R+shTRB3组星形胶质细胞活性、SOD活性及细胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显增高,LDH漏出率、MDA含量、TNF-α水平、IL-1β水平及细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与OGD/R组比较,BA处理能明显提高细胞凋亡率(36.15%±0.87%vs.24.70%±1.05%,P<0.05);与OGD/R+shTRB3组比较,BA处理能逆转TRB3 shRNA慢病毒感染对OGD/R诱导的细胞凋亡的抑制作用(22.00%±1.04%vs.13.91%±1.20%,P<0.05)。结论TRB3沉默可能通过阻断NF-κB通路而减轻OGD/R诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞损伤。

KIF1A过表达对氧糖剥夺-再灌注损伤PC12细胞的作用机制研究

目的:研究Kinesin-3家族成员蛋白(Kinesin-3 family member1A,KIF1A)对氧糖剥夺-再灌注诱导的PC12细胞活力、自噬和凋亡的影响,为进一步研究KIF1A在脊髓缺血再灌注损伤治疗方面提供理论依据。方法:PC12细胞(美国ATCC公司)分为四组:A组,对照组,无处理;B组,氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组,PC12细胞用无糖DMEM培养基,于含混合气体(95%N2和5%CO2)的37℃恒温箱内密闭缺氧培养4h;C组,pcDNA3.1空质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1空质粒48h,进行OGD/R处理;D组,pcDNA3.1-KIF1A质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1-KIF1A质粒48h,进行OGD/R处理。B、C、D组经OGD/R处理后,更换常规培养基,正常孵育24h,收集细胞总RNA及蛋白质,进行实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)和Western blot检测KIF1A mRNA和蛋白的表达情况;CCK8检测细胞存活率变化;凋亡ELISA及Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡及Caspase-3活性;Western blot检测各组自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的蛋白表达变化。结果:与A组(1.00±0.00)相比,B组细胞KIF1A mRNA(0.41±0.05)和蛋白表达水平(0.52±0.07,P<0.05)显著下调;细胞活力[(51.60±7.35)%,P<0.05]显著降低。与B组(1.00±0.00)相比,C组空质粒对KIF1A mRNA(0.91±0.13)及蛋白质(1.08±0.08)表达,细胞活力[(51.60±7.35)%vs(47.30±4.16)%],细胞凋亡(1.95±0.18 vs 2.08±0.16,P>0.05)等无显著影响。而D组KIF1A过表达后能显著上调KIF1A mRNA(2.63±0.16)以及蛋白表达(2.51±0.18,P<0.05),显著缓解OGD/R引起的细胞存活率下降[(51.60±7.35)%vs(86.40±9.03)%]及凋亡[1.95±0.18 vs 1.36±0.12,P<0.05];与B组相比,D组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(1.68±0.14 vs 1.19±0.09,P<0.05)及pmTOR的表达(1.00±0.00 vs 1.26±0.02,P<0.05)显著受抑制,P62表达显著升高(0.53±0.05 vs 0.89±0.09,P<0.05)。结论:KIF1A过表达可促进缺血再灌注损伤诱导的PC12细胞存活、抑制细胞自噬与凋亡,其机制可能与抑制mTOR通路相关。

骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后BDNF与GAP 43基因表达的干预探索

目的了解骨髓基质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后脑源性神经营养因子(BDNF)与神经生长相关蛋白质(GAP43)基因表达的干预。方法大鼠脊髓损伤后第7 d经肋间后动脉介入植入MSCs,基于无菌条件下,实验分成三组,即MSCs移植组(36例)、DMEM填充组(36例)以及正常对照组(28例),采用RT-PCR法分析MSCs移植后GAP-43与BDNF基因表达变化状况。结果针对BDNFmRNA与GAP-43 mRNA表达水平而言,MSCs移植组上升程度明显高于单纯损伤组。结论基于MSCs移植作用下,脊髓损伤区的环境得到了明显的改善,增加BDNFmRNA与GAP-43 mRNA的表达水平,其脊髓损伤修复作用显著。

脑瘫多种手术治疗研究

[目的]通过分析痉挛性脑瘫病人采用肌腱延长、畸形骨矫形和神经选择性部分切断等不同手术的治疗效果,探讨单一或多种手术组合治疗痉挛性脑瘫病人的适应证和注意事项,提高脑瘫的手术治疗效果。[方法]应用传统的软组织松解延长手术、截骨手术、选择性脊神经后根切断术、脊神经后根选择性切断逆向吻合术,以及选择性周围神经切断等手术,对642例年龄在10个月~37岁的脑瘫病人采用不同的手术组合治疗,随访6个月~4年,平均18个月。[结果]传统的软组织松解延长手术仍然是痉挛性脑瘫病人肢体矫形的主要手术,传统的软组织手术虽然不能降低高肌张力,但可矫正固定性挛缩和畸形。能降低肌张力的决定性手术是在神经部位手术,选择性脊神经后根切断术和选择性周围神经切断术早期有部分的肌张力下降,由于降低了肌张力,使关节活动度和肢体控制能力增强,功能明显好转。[结论]手术前仔细分类,严格掌握各种术式的适应证,充分了解不同手术的潜在并发症,采用各种术式互补可提高手术治疗的综合效果,减少痉挛和畸形复发以及防止并发症的发生,术后加强功能训练也是治疗的基本方法。

闭合复位PFNA内固定治疗老年股骨粗隆间骨折

目的评价股骨近端防旋髓内钉(proximal femoral nail antirotation,PFNA)治疗老年股骨粗隆间骨折的疗效。方法 2008年6月至2010年6月对32例老年股骨粗隆间骨折经闭合复位、小切口置入PFNA固定治疗。结果平均随访12个月,X线片均显示骨折端复位良好,一期愈合,无髋内外翻畸形、股骨干骨折、螺旋刀片切割股骨头及断钉等并发症。根据Harris髋关节功能标准评定,优26例,良5例,中1例,优良率达96.9%。结论 PFNA治疗老年股骨粗隆间骨折操作简单,微创,固定可靠,有利于患者早期负重行走,减少并发症。

酮咯酸氨丁三醇与氟比洛芬酯用于老年股骨粗隆间骨折术后镇痛的对比研究

目的比较酮咯酸氨丁三醇和氟比洛芬酯用于老年股骨粗隆间骨折患者术后疼痛的疗效差异。方法58例行股骨粗隆间骨折内固定，年龄在62～78岁的患者随机分为两组，各29例。酮咯酸氨丁三醇治疗组（T组）：酮咯酸氨丁三醇注射液60mg＋生理盐水100ml；氟比洛芬酯治疗组（F组）：氟比洛芬酯注射液100mg＋生理盐水100ml，均待镇痛效果不佳时静滴给药。采用疼痛视觉模拟评分法（VAS）评估患者给药后30min、1h、4h,8h、12h、24h等时间点疼痛缓解情况，Ramsay镇静评分评估以上时间点两组药物的镇静效果，并记录两组患者用药后不良反应和患者对术后镇痛效果的总体满意度。结果F组术后8、12h的VAS评分明显高于T组，而T组术后4、8、12h的Ramsay得分低于F组，差异均有统计学意义（p〈0．05），T组术后不良反应发生率低于F组，患者的整体镇痛满意度也更高。结论两种药物均可用于老年粗隆间骨折术后镇痛，而酮咯酸氨丁三醇因其良好的镇痛效果、较低的不良反应发生率、患者满意度较高而更适合此类人群。

闭合复位股骨近端防旋髓内钉治疗老年股骨转子间骨折的疗效

目的：探讨采用闭合复位股骨近端防旋髓内钉（PFNA）治疗老年股骨转子间骨折的临床疗效。方法对79例老年股骨转子间骨折患者采用闭合复位PFNA内固定，对患者的手术时间、术中出血量、输血量、术后引流量、骨折愈合时间、手术相关并发症等进行分析。按Harris评分标准对髋关节评分。结果手术时间39～88（51±14）min；术中出血量50～240（88±25）ml，其中31例术后输注浓缩红细胞1～4 U；术后引流量40～460（180±55）ml。1例术后27 d死亡，78例获得随访，时间12～25个月。患者骨折全部愈合，愈合时间13～22.4（16.5±3.2）周。出现褥疮1例，深静脉血栓1例，髋内翻畸形2例，发生头钉刺入髋臼1例，术后1年髋关节功能Harris评分：优69例，良6例，可3例，优良率为96.15％。结论闭合复位PFNA内固定治疗老年股骨转子间骨折创伤较小，操作简便，固定牢靠，安全有效。

经单侧椎弓根入路椎体成形治疗胸腰椎压缩骨折

目的探讨经单侧椎弓根入路椎体成形术治疗胸腰椎压缩骨折的临床效果。方法2005年6月至2007年3月对62例胸腰椎压缩性骨折共90个椎体行经单侧椎弓根入路椎体成形术．经C臂X线机透视定位引导下进行穿刺，将调制成糊状的骨水泥用螺旋加压注射装置匀速缓慢注入病变椎体。结果共治疗62例，90个椎体，其中单节段40例。双节段16例。三节段6例。随访3～18个月（平均12个月）。止痛效果依据目测疼痛评分法进行评价．术后止痛效果达98．4％（61／62）．术后立即止痛35例．占56．5％，1d后止痛15例，占24．2％，3d后止痛11例，占17．7％，未能止痛1例．占1．6％。本组无一例发生需治疗干预的并发症。结论经皮椎体成形术具有显著的止痛效果．是治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折安全有效的微创治疗方法。

创伤骨科修复中采用伤害控制骨科学原则治疗临床分析

目的探讨伤害控制骨科学(DCO)治疗原则在创伤骨科修复中的临床应用效果。方法选择未应用伤害控制原则期间进行治疗的50例患者作为对照组,选择应用伤害控制原则期间进行治疗的55例患者作为观察组。比较两组患者的住院时间、治疗效果、并发症及死亡的发生情况。结果观察组患者的住院时间(18.7±1.6)d明显短于对照组的(25.2±1.5)d,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组发生并发症4例,死亡2例,均少于对照组的11例、8例,差异均具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的治疗总有效率为96.36%,远远高于对照组的84.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论伤害控制骨科学治疗原则应用于创伤骨科修复中,可以明显缩短患者的住院时间,降低手术中的治疗风险,提高治疗效果,减少并发症的发生,值得在临床进行广泛应用。

VSD持续负压吸引技术治疗四肢软组织严重损伤患者的护理

目的:探讨VSD持续负压吸引技术治疗四肢软组织严重损伤患者的护理要点。方法:2009年6月～2011年12月对20例应用VSD持续负压吸引技术治疗四肢软组织严重损伤患者进行护理观察。结果:20例应用VSD持续负压吸引技术治疗四肢软组织严重损伤的患者均全部治愈出院,无护理并发症发生。结论:患肢手术后维持适当的体位,维持有效的持续负压吸引,密切的护理观察和正确的引流管护理是护理的关键环节。

骨质疏松性椎体骨折患者应用椎体后凸成形术与椎体成形术治疗效果比较

目的比较经皮椎体后凸成形术和椎体成形术治疗骨质疏松性椎体骨折患者的临床疗效。方法回顾性分析我院2013年1月~2015年6月82例骨质疏松性椎体骨折患者临床治疗情况,其中41以经皮椎体后凸成形术治疗者为观察组,另41例患者采用经皮椎体成形术治疗,为对照组。采用视觉模拟评分法（VAS）评价患者治疗前后疼痛情况,应用侧位X线片检测患者Cobb角变化。统计两组患者临床疗效、手术时间、总住院时间及骨水泥注射量;记录两组患者骨水泥渗漏人数。结果治疗后,两组患者VAS评分较治疗前显著下降,且观察组明显优于对照组,P〈0.05;两组患者Cobb角均明显下降,但观察组明显优于对照组,P〈0.05。观察组患者治疗有效率为92.7%,与对照组95.1%比较,P〉0.05;观察组手术时间和总住院时间及骨水泥注射量均明显少（短）于对照组,P〈0.05;观察组骨水泥渗漏发生率为12.2%,明显低于对照组46.3%,P〈0.05。结论相比经皮椎体成形术来说,应用经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体骨折患者具有更好的疗效,因此更值得推广应用。

半椎体切除治疗先天性脊柱侧后凸畸形的临床疗效

目的探讨半椎体切除治疗先天性脊柱侧后凸畸形的临床效果及应用价值。方法选取该院2011年1月至2013年1月收治的30例先天性脊柱侧后凸合并半椎体畸形患者为研究对象。其中,单纯半椎体、无结构性弯曲患者12例,行后路半椎体切除、短节段椎弓根螺钉固定术;合并前凸、半椎体凸向腹侧患者3例,行前路半椎体切除合并植骨融合固定术;合并结构性代偿弯患者15例,行后路经椎弓根半椎体切除、长节段矫形代偿弯固定融合术。对所有患者手术治疗临床效果进行对比分析。结果后凸术后平均Cobb角、末次随访平均Cobb角分别为(8.6±3.14)°、(11.2±7.23)°,脊柱后凸最终矫形率为58.6%;侧凸术后平均侧凸Cobb角(12.8±5.47)°,末次随访平均(16.2±6.24)°,脊柱侧凸最终矫形率为66.5%。脊柱后凸、侧凸手术治疗后平均Cobb角明显小于术前,差异有统计学意义(P<0.05),脊柱后凸、侧凸均明显好转,术后未出现明显并发症,患者较满意。结论半椎体切除治疗先天性脊柱侧后凸畸形效果显著,脊柱侧后凸矫形率高,值得临床上进一步研究。

自发性椎管内硬膜外血肿2例诊治分析

目的探讨总结自发性椎管内硬膜外血肿的诊疗方法,提高对于自发性椎管内硬膜外血肿的临床诊治水平。方法对自2007年6月以来收治的2例自发性椎管内硬膜外血肿患者的临床诊治资料,包括病因、发病过程、临床表现以及手术后患者康复情况进行回顾性分析。结果2例患者起病情况、出血部位以及脊髓受压时间等不同,导致患者术后康复存在明显差异。结论对于自发性椎管内硬膜外血肿患者,尽快完善MRI检查,明确诊断,尽早手术是获得最大程度功能康复的关键。

兔骨髓基质细胞和骨血肿块移植促进骨折愈合的研究

目的:研究骨折后骨血肿块和骨髓基质细胞的骨再生潜能,以及骨血肿块和骨髓基质细胞联合移植对骨折愈合的影响,探讨促进骨折愈合的新途径。方法:在新西兰兔胫骨上制造骨缺损模型,3d后取出骨血肿,并从股骨抽骨髓血分离出骨髓基质细胞,将骨髓基质细胞联合骨血肿块回植到实验组骨缺损区;对照组骨缺损区则单纯行骨血肿块回植。定期拍X线片和取出骨痂行组织学观察。结果:骨缺损处骨痂生成数量在实验组和对照组两组间有显著性差异,骨髓基质细胞联合骨血肿块移植组的骨痂形成数量和骨膜反应明显多于以单纯骨血肿块移植组;组织学观察:实验组成骨样细胞形成数量也明显多于对照组。结论:骨髓基质细胞有较强的骨再生潜能,骨髓基质细胞和骨血肿块联合移植比单纯骨血肿移植成骨效果更好。

菲立磁细胞内标记兔骨髓基质细胞的初步观察

目的:探讨利用菲立磁(Feridex)和转染试剂体外标记兔骨髓基质细胞的可行性,为临床上应用磁共振成像(MRI)追踪标记细胞奠定基础。方法:9只2月龄新西兰大白兔无菌条件下行股骨穿刺取骨髓,梯度密度离心法分离获取兔骨髓基质细胞,用菲立磁-多聚赖氨酸复合物(FE-PLL)标记骨髓基质细胞,采用普鲁士蓝染色和台盼蓝拒染实验等方法鉴定FE-PLL标记兔骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并在增殖条件下用改良SABC法进行抗单克隆神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色(DAB-H2O2棕色法呈色)和普鲁士蓝(Prussian blue)染色,对FE-PLL标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估。结果:菲立磁可以高效率地标记兔骨髓基质细胞,标记效率在99%左右。普鲁士蓝染色显示FE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒。标记的骨髓基质细胞与正常未标记细胞相比较,细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的差异。结论:菲立磁可以用来体外标记骨髓基质细胞,标记后对骨髓基质细胞活力、增殖和分化能力无明显影响。

胸腰段脊柱脊髓损伤临床疗效观察

对我院2011年1月~2012年12月骨科收治的58例胸腰段脊柱脊髓损伤患者实施后路减压、短节段椎弓根内固定及植骨术治疗,所有患者获得6～30个月随访,观察患者治疗前后Frankel分级变化情况、椎体高度恢复、Cobb角恢复等临床指标。结果本组58例患者创口均Ⅰ期愈合,无1例伤口感染,无医源性神经根及脊髓损伤,经治疗Frankel分级均好转至少1级,术后椎体高度恢复均为90%以上,Cobb角均低于10°,未发生椎弓根螺钉断裂及滑脱现象。后路手术应用椎弓根钉内固定治疗胸腰段脊柱脊髓损伤安全性高,临床疗效显著,应用价值较高。