新生儿内科患儿入院时咽拭子肠道病毒核酸检测的横断面研究

背景肠道病毒(EV)是导致新生儿感染的常见病原体之一,了解住院新生儿EV核酸检测的阳性率及疾病分布情况有助于制定合理的治疗方案。目的探讨新生儿内科住院患儿入院时肠道病毒(EV)咽拭子核酸检测的阳性率及疾病分布状况。设计横断面研究。方法对2020年10月至2021年9月在首都医科大学附属北京儿童医院新生儿内科住院的患儿,于入院当天采集咽拭子,采用CA16、EV71、EV通用型核酸三重实时荧光PCR检测试剂盒进行EV核酸检测。计算EV核酸检测阳性率,统计疾病分布情况,并比较EV阳性组与阴性组新生儿的临床表现和实验室指标差异。主要结局指标住院新生儿EV核酸检测的阳性率及疾病分布情况。结果①共纳入1095例新生儿(占同期住院新生儿的91.2%),其中男婴605例(55.3%),足月儿976例(89.1%),入院中位日龄为11(4,19)d,第一入院诊断的前3顺位为新生儿病理性黄疸、新生儿肺炎、新生儿感染,住院中位时间为8(6,12)d。②EV核酸检测阳性检出率为9.1‰(10/1095),感染性疾病患儿中EV核酸阳性检出率为18.6‰(9/483)。以呼吸道症状(5例)、黄疸(3例)和消化道症状(2例)为首发症状。10例均治愈或好转出院。③EV阳性组和阴性组在性别、出生体重、出生胎龄、是否早产、分娩方式、喂养方式、母亲存在围生期感染高危因素、母妊娠期糖尿病、发病日龄、住院时间、住院费用等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。EV阳性组(60.0%)在发病前感染接触史的发生率高于EV阴性组(7.0%);EV阳性组中枢神经系统感染(20.0%)高于EV阴性组(3.1%);差异均有统计学意义。EV阳性组感染性疾病患儿比例(90.0%)高于阴性(43.7%)但差异无统计学意义;发热、病理性黄疸、呼吸道症状、消化道症状、神经系统症状的发生率在两组差异均无统计学意义(P>0.05)。④EV阳性组和阴性组血WBC总数、Hb、PLT减少发生率、心肌酶和ALT升高发生率、血清总胆红素值、白蛋白、血肌酐及血尿素氮的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿内科患儿入院时的EV咽拭子核酸检测阳性率为9.1‰,临床表现和实验室常规检测结果无特异性改变;家庭成员传播可能是新生儿咽拭子EV核酸检测阳性的主要原因;EV核酸检测阳性患儿发生中枢神经系统感染的风险较高。

鸡NRG4基因组及转录本结构分析

神经调节蛋白4(neuregulin 4,NRG4)是一个重要的脂肪细胞因子,在维持哺乳动物能量平衡、调节糖脂代谢和预防非酒精性脂肪性肝病中起着非常重要的作用。目前,人NRG4基因的基因组结构、转录异构体和蛋白异构体等已有深入的研究。本实验室前期研究显示,鸡脂肪组织也表达NRG4,但是目前有关鸡NRG4(chicken NRG4,cNRG4)基因的基因组结构、转录异构体和蛋白异构体尚不清楚。为此,本研究采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)和RT-PCR(reverse transcription-PCR)等技术,系统开展了cNRG4基因的基因组和转录本的结构分析。结果发现,cNRG4基因编码区很小,但该基因却非常复杂,存在选择性转录起始位点、选择性拼接、内含子滞留、隐匿外显子和选择性多聚腺苷酸化,这导致cNRG4基因产生4种不同的5ʹUTR异构体(cNRG4 A、cNRG4 B、cNRG4 C和cNRG4 D)和6种不同的3ʹUTR异构体(cNRG4 a、cNRG4 b、cNRG4 c、cNRG4 d、cNRG4 e和cNRG4 f)。基因组结构分析发现,cNRG4基因跨越基因组21,969 bp(Chr.10:3,490,314~3,512,282),由11个外显子和10个内含子构成。与NCBI数据库中的cNRG4基因mRNA序列(NM_001030544.4)相比,本研究发现了cNRG4基因的2个新外显子和1个隐匿外显子。生物信息学分析、RT-PCR、克隆和测序分析发现,cNRG4基因能编码3种蛋白异构体(cNRG4-1、cNRG4-2和cNRG4-3)。本研究为进一步开展cNRG4基因的功能和调控研究奠定了基础。

鸡PPARγ基因转录本5的两个上游开放阅读框功能分析

前期研究发现,鸡PPARγ基因转录本5(c PPARγ5)的5’非翻译区(5’untranslated region,5’UTR)存在两个上游开放阅读框(uORF1和uORF2)。为揭示这两个uORFs在鸡PPARγ基因表达转录后调控作用,试验使用报告基因、定点突变、q RT-PCR和Western blot等技术,分析两个uORFs对报告基因活性及PPARγmRNA和蛋白表达的影响。结果表明,与野生型相比,uORF1和uORF2分别突变和同时突变均显著促进报告基因活性及PPARγm RNA和蛋白表达(P<0.05)。mRNA稳定性分析发现,两个uORFs突变对报告基因mRNA稳定性无显著影响。启动子活性分析发现,c PPARγ的5’UTR区具有启动子活性。研究结果表明,cPPARγ5的两个u ORFs抑制其翻译。

新型冠状病毒感染期间足月的晚期新生儿咽拭子肠道病毒核酸检测横断面研究

目的探讨新型冠状病毒感染疫情期间住院的足月的晚期新生儿咽拭子肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测阳性率及其临床特征。方法该研究为单中心横断面研究,研究对象为2020年10月—2021年9月在新生儿内科病房住院的611例足月的晚期新生儿。于入院时采集咽拭子进行柯萨奇病毒A16型/EV71/EV通用型核酸检测。根据EV核酸检测结果分为EV核酸阳性组(8例)和EV核酸阴性组(603例),分析比较两组患儿的临床特征差异。结果611例患儿中,8例EV核酸检测阳性,阳性率为13.1‰,其中7例在5—10月份入院。EV核酸阳性组与EV核酸阴性组患儿起病前与有呼吸道感染症状的家庭成员接触比例分别为75.0%和10.9%(P<0.001)。两组患儿在人口学信息、临床症状、实验室检验方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论新型冠状病毒感染疫情期间住院的足月的晚期新生儿仍有一定比例的咽拭子EV核酸检测呈阳性但比例较低,其临床表现和实验室常规检测结果无特异性;家庭成员之间的传播可能是新生儿感染EV的重要途径。

鸡快慢羽性状遗传学基础分析综合实验探索与实践

随着全国"卓越农林人才教育培养计划"的开展,我校动物科学专业设置了"卓越班",以突出培养学生的系统思维和创新创业能力为目标开展了系列教育教学管理和课程改革。为此,我们以"鸡快、慢羽性状"为实验对象,设计了"鸡快慢羽性状遗传学基础分析"综合实验,突出培养学生用理论知识解决生产实践问题的思维和能力。本文重点介绍了该实验作为动物遗传学实验教学案例的实施过程及效果,首先从鸡的表型观察逐步深入到遗传学基础分析,利用遗传学理论指导鸡快、慢羽品系培育的育种实践。实验内容涉及伴性遗传规律和性别决定机制等遗传学理论知识,同时还涉及基因组DNA提取、基因扩增、酶切及电泳分析等一系列分子遗传学的技术方法。不仅有利于学生综合分析能力和专业技能的掌握,还有助于培养学生对动物科学专业的科研兴趣和创新意识。此综合性实验还展现了用遗传学理论指导动物品种培育实践过程,符合动物科学专业复合应用型人才培养目标的要求,其中的教学理念和方法可推广应用于其他生物学实验教学。

选择性多聚腺苷酸化的生物学效应及其调控机制研究进展

真核生物基因的前体mRNA(pre-mRNA)及一些lncRNA在成熟过程中其3'端会发生剪切和多聚腺苷酸化反应(cleavage and polyadenylation, C/P),C/P的发生需要多聚腺苷酸化信号(polyadenylation signal, PAS)的存在。选择性多聚腺苷酸化(alternative cleavage and polyadenylation, APA)是指具有多个PAS的基因,在其mRNA3'端成熟过程中,由于选择不同的PAS,导致产生出多个3'UTR长度和序列组成不同的转录异构体。3'UTR长度和序列的不同会影响mRNA的稳定性、翻译效率、运输和细胞定位等,因此APA是真核生物的一个重要转录后调控方式。近年来,对大量动物、植物及酵母的基因组测序分析发现,APA在真核生物广泛存在,针对APA的生物学效应和调控机制开展了一系列研究。目前已鉴定出许多APA调控的顺式调控元件和反式作用因子。本文重点介绍了APA生物学效应和调控机制的最新研究进展,并探讨了未来APA调控的研究方向。

转录因子KLF7对IL-6基因的转录调控分析

选取小鼠IL-6基因转录起始位点上游2000 bp序列作为启动子序列,采用在线生物信息学软件分析转录因子结合位点;利用PCR扩增小鼠IL-6基因启动子及其5'端截短突变体片段,构建相应的荧光素酶报告基因重组质粒,转染3T3-L1细胞后检测报告基因活性;采用共转染分析转录因子KLF7对IL-6基因启动子活性的影响;利用siRNA技术探究敲低KLF7对细胞内源性IL-6基因表达的影响。生物信息学分析显示,小鼠IL-6基因启动子区存在5个Sp1/KLFs结合位点;报告基因分析和定点突变分析发现,KLF7通过IL-6基因启动子区-98至-89 bp处(CCCCACCCAC)发挥调控IL-6基因启动子活性的作用;Real-time RT-PCR和Western blot分析显示,敲低KLF7抑制细胞内源性IL-6基因表达。文章首次发现KLF7直接调控IL-6基因表达,研究结果对揭示KLF7在脂肪生成中的作用机制具有重要意义。

环状RNA的特征及其在畜禽中的研究进展

环状RNA(circRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA,为共价键形成的闭合环形结构RNA分子。circRNA在真核生物体内广泛存在,主要来源于外显子或内含子,具有种类丰富、保守性强、细胞组织表达特异性、稳定性高等特点。目前研究表明,circRNA的形成方式包括剪接体套索驱动环化和内含子配对驱动环化,期间会有多种顺式原件和反式原件调控circRNA的形成。circRNA可通过多种方式发挥其生物学功能,circRNA与RNA结合蛋白结合调控基因表达及蛋白质翻译,circRNA与miRNA结合发挥miRNA海绵功能,circRNA可编码功能性蛋白,circRNA还可参与细胞通讯和信号转导。畜禽的经济性状及疾病防控是畜牧学关注的重点,目前研究发现,circRNA广泛地参与了家畜的疾病发生及防控、繁殖繁育、肌肉发育、脂肪沉积、神经发育等生理过程,在家畜的疾病发生防控和肉奶产量品质等经济性状中具有重要的研究价值。对circRNA的特征、形成机制、主要生物学功能及其在畜禽中的研究进展进行综述,旨在为circRNA在畜禽的研究提供一定的依据及参考,为开发新的分子遗传标记提供新的思路,为丰富畜禽品系选育提供新的技术和方法。

鸡生长激素受体胞外区原核表达分析

生长激素与其靶细胞膜表面的生长激素受体(GHR)结合,可以促进动物生长发育和调节新陈代谢。为获得鸡GHR蛋白,试验通过PCR扩增获得GHR胞外区序列。经双酶切后连接入原核p ET-32a(+)表达载体,构建了鸡GHR胞外结构域的原核表达载体。将该重组质粒转入E. coli BL21(ED3)表达菌株。通过IPTG诱导其表达GHR重组蛋白,并探讨不同IPTG浓度、诱导时间和诱导温度等条件对鸡GHR重组蛋白表达的影响。结果表明:诱导GHR重组蛋白表达的最适条件为IPTG终浓度2.00 mmol/L、诱导时间为4 h、培养温度为37℃,在此条件下,GHR重组蛋白表达量最高。研究结果为后续GHR抗体制备奠定了基础。

关于植物内生菌的研究

本文从植物内生菌的起源、定义以及分布特点进行分析。依据现阶段内生菌的多样性和分布、运动性、功能、植物修复的研究成果,分析其代谢产物和本身的活性物质在医药领域、农业领域和基因工程领域具有广泛的发展前景。

鸡胰岛素降解酶基因环状转录本克隆及其表达规律

本课题组前期通过高通量测序发现,鸡胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme, IDE)基因可能存在一个环状转录本。为确定IDE基因环状转录本(circIDE)的真实存在,探究其表达规律,本研究以吉林芦花鸡为研究对象,通过PCR扩增和测序验证了circIDE的真实存在,通过RNase R处理和反转录证实了circIDE的环形结构,通过qRT-PCR分析circIDE和IDE mRNA的时空表达规律,并对比分析了circIDE和线性IDE mRNA在正常体型芦花鸡和GHR突变的矮小体型芦花鸡中的表达差异。结果表明:鸡circIDE全长为1332 nt,由IDE基因外显子2~11环化形成。RNase R耐受性分析表明,鸡circIDE具备环形分子的一般特征,不易被RNase R降解。与oligo-d(T)18引物相比,随机引物对circIDE具有较高的反转录效率,进一步说明circIDE是一个不含poly(A)的环状结构分子。组织表达谱结果表明,circIDE在1周龄和12周龄正常体型芦花鸡肝脏和心脏高表达,在胸肌和腿肌中低表达;circIDE在肝脏组织的时序表达谱结果表明,circIDE在鸡6周龄之前为低表达,在8周龄以后表现为高表达;正常与矮小体型芦花鸡品系间circIDE表达量对比分析表明,正常体型芦花鸡circIDE表达水平高于矮小体型芦花鸡,其中在肝脏组织中差异显著(P<0.05)。本研究证实了鸡IDE基因存在一个环状转录本circIDE,并初步揭示了circIDE的表达规律,circIDE在正常体型和矮小体型芦花鸡肝脏组织中表达量存在差异,本研究结果为深入开展鸡circIDE的生物学功能及其在鸡生长发育过程中的作用机制奠定了基础。

解偶联蛋白2启动子-866G/A多态性与中国北方儿童肥胖病相关性研究

目的：研究解偶联蛋白2（UCP2）基因启动子-866G/A单核苷酸多态性与中国北方儿童肥胖病遗传发病机制的相关性。方法病例组选取2010年1～9月于北京儿童医院内分泌科就诊且无血缘关系的儿童肥胖病患者220例。对照组选自无血缘关系的成年健康献血员220例。用血液基因组DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA，UCP2基因启动子-866G/A单核苷酸多态性分析采用PCR-RFLP法，并选取部分标本进行测序分析。结果（1）UCP2基因启动子-866A等位基因在中国肥胖病儿童中的频率与正常对照组相近，无统计学差异（44．8％ vs．46．4％，χ2＝0.224，P＝0.685）。（2）GG、GA和AA基因型在患者频率分布为34．5％、41．4％及24．1％；在对照组中的分布为27．3％、52．7％及20.0％，三者在患者与对照中的频率分布无显著性差异（ P＞0.05）。包含等位基因A的基因型AA和GA基因型频率之和在对照组中的频率增加，但无统计学差异（65．5％vs．72.7％，P＝0.122）。按性别进行分层分析，肥胖病男童与对照组的基因型频率分布尚无显著性差异（ P＝0.05），在女童中亦无显著性差异（ P＝0.512）。结论 UCP2基因启动子-866 G/A单核苷酸多态性与中国儿童肥胖病遗传发病机制未见显著相关性。 UCP2基因启动子-866 G/A多态性与肥胖病的遗传发病机制的相关性存在一定的人种差异。

现代生命科学的发展的新特点和总趋势

在数学和物理发展的推动下,以DNA分子杂交技术和体细胞离体融合技术为标志的现代生物技术诞生了,实现了在基因和分子水平上定向的改造生物的遗传特性创造新物种。基于此,详细地阐述了生命科学的基本概念和现代生命科学发展的新特点和总趋势。

脂肪含量和肥胖相关基因与中国儿童肥胖病遗传发病机制的相关性

目的研究脂肪含量和肥胖相关基因（FTO基因）与中国儿童肥胖病遗传发病机制的相关性。方法选取2010年1月至9月于首都医科大学附属北京儿童医院就诊的无血缘关系的儿童肥胖病患者201例（肥胖组），均为汉族人。健康对照组选自无血缘关系的成年健康献血员183例。选取FTO基因9个具有单核甘酸多态性的位点，运用飞行质谱技术对FTO基因与中国儿童肥胖病的遗传易感相关性进行研究。结果在本课题所研究的FTO基因9个单核苷酸多态性（SNPs）位点多态性中，rs9939609A、rs8050136A、rs3751812T、rsl421085C、rs7193144C等位基因的频率在肥胖组中显著增加，其余位点等位基因在肥胖组与健康对照组中的频率分布差异无统计学意义。单体型分析显示FTO基因的9个SNPs位点之间存在连锁不平衡关系，其中的3个单体型（CTGGTCTGG、TCTGCAAAA、CTGGCCTGG）与儿童肥胖病遗传易感性存在统计学相关性（P〈0．05）。结论FTO基因中rs9939609、rs8050136、rs3751812、rsl421085、rs7193144位点与中国儿童肥胖病发生相关。FTO基因的CTGGTCTGG、TCTGCAAAA、CTGGCCTGG单体型与儿童肥胖病发生相关。

新发现的肥胖症相关基因单核苷酸多态性与中国儿童肥胖症的相关性

目的研究新发现的肥胖症相关基因单核苷酸多态性（SNP）与中国儿童肥胖症的相关性。方法以2010年1月至9月在北京儿童医院就诊且无血缘关系的儿童肥胖症患者201例作为病例组，以同期无血缘关系的成年健康献血者183例为对照组。选取近期新发现的10个肥胖症相关基因的12个单核苷酸多态性（SNP）位点，运用飞行质谱技术对其与中国儿童肥胖症的相关性进行研究。两组等位基因和基因型频率的比较使用2×2、2×3、列联表x^2检验及Fisher精确概率法。结果在本课题所研究的10个新发现的肥胖症相关基因的12个SNP位点中，有3个等位基因频率在肥胖症患者中增加：FAIM2基因rs7138803位点的等位基因为A和G，其中A等位基因频率在肥胖症组明显高于对照组（35．5％比26．5％），2组比较差异有统计学意义（x^2=．94，P=0．0084）；MTCH2基因rs10838738位点的等位基因为G和A，其中G等位基因频率在肥胖症组高于对照组（35．3％比27．7％，x^2=5．04，P=0．0248）；ETV5基因的rs7647305位点的等位基因为C和T，其中C等位基因频率在肥胖症组高于对照组（94．3％1比0．5％，x^2=3．93，P=00475）。FAIM2基因的rs7138803AA的基因型频率在患者中显著增加，但是，MTCH2基因的rs1838738GG和ETV5基因的rs7647305CC在患者与对照中的基因型频率分布差异无统计学意义。结论与肥胖症相关的10个基因中，FAIM2基因的rs7138803A、MTCH2基因的r810838738G以及ETV5基因的r87647305C等位基因与中国儿童肥胖症发生存在显著的相关性。

数学和物理在生命科学研究中的应用

生命科学是研究生命现象以及生命活动本质等内容的专业学科,在目前人类的认知水平之下,生命科学的理论内容可以用以解释世界范围内各种生物间以及生物与环境之间的千丝万缕的复杂关系,辅助人类更客观地认识和了解世界的本质。从以往有关生命科学的研究内容中可知,生命科学与多种学科间的联系是真实存在的,尤其是数学学科、物理学科知识理论的交叉融合,令生命科学体系的研究大放异彩。基于此,就数学和物理学科理论内容在生命科学研究中的应用做以阐述,以期相关内容能为生命科学研究带来启示。

汽运分公司实施运输车辆GPS监控

本文简要介绍了GPS的原理及其在运输车辆现代化管理中的应用。提出了汽运分公司建立运输车辆GPS监控中心的必要性和重要性，并就GPS监控中心实施方案进行了详细的论述。