第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因在前列腺癌组织中的表达及荷载该基因的溶瘤腺病毒的构建

目的构建荷载第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶(PTEN)基因的溶瘤腺病毒验证其在前列腺癌中表达水平及靶向抗肿瘤效果。方法挖掘公开数据库和利用Galaxy在线工具处理本中心去势抵抗性前列腺癌(CRPC)标本基因测序数据, 分析PTEN基因在前列腺癌组织中的表达差异。收集2019年3月至2022年8月徐州医科大学附属医院79例前列腺癌患者的病理样本和临床信息, 免疫组织化学法检测前列腺癌组织及癌旁组织中PTEN蛋白的表达。同源重组法构建溶瘤腺病毒ZD55-PTEN, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Hoechst-33258和划痕实验检测其靶向抗肿瘤效果。分别采用卡方检验和t检验对定性资料和定量资料进行统计分析, 不满足正态分布的数据采用Mann-WhitneyU检验;Spearman分析PTEN表达水平与临床病理特征的关系。结果前列腺癌组织中PTEN表达水平明显低于癌旁组织, 差异有统计学意义(501例比52例, Z=-19.25, P<0.05);PTEN的mRNA表达水平与淋巴结转移(n=425, r_(s)=-0.98, P<0.05)和Gleason评分(n=497, r_(s)=-1.25, P<0.05)呈负相关。CRPC阶段PTEN缺失明显高于激素敏感性前列腺癌(HSPC)阶段(79例比125例, Z=-0.89, P<0.05)。前列腺癌组织的PTEN蛋白缺失率高于癌旁组织(45.6%比16.5%, t=10.98, P<0.01), 术前血清PSA水平(n=79, r_(s)=-0.47, P<0.01)和术后Gleason评分(n=79, r_(s)=-0.31, P<0.05)与PTEN的表达呈负相关。PTEN缺失的前列腺癌患者, 确诊时PSA水平(36例比43例, χ^(2)=12.22, P<0.05)和根治术后Gleason评分(36例比43例, χ^(2)=6.92, P<0.05)显著高于PTEN蛋白完整患者。成功构建溶瘤腺病毒ZD55-PTEN, ZD55-PTEN组细胞存活率低于对照组[ZD55-EGFP组(49.67±4.19)%、ZD55-PTEN组(29.33±3.84)%, t=8.68, P<0.05];细胞凋亡率高于对照组[PBS组(12.86±5.23)%、ZD55-EGFP组(48.18±4.22)%、ZD55-PTEN组(68.93±5.88)%, t=5.90, P<0.05];划痕愈合率低于对照组[PBS组(79.13±3.98)%、ZD55-EGFP组(61.02±4.73)%、ZD55-PTEN组(47.92±5.97)%, t=6.34, P<0.05]。结论 PTEN基因低表达于前列腺癌组织中, 且具有抑制DU145细胞的增殖、迁移并诱导凋亡的功能。

Musashi-1在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨RNA结合蛋白Musashi-1(MSI1)在前列腺癌(PCa)中的表达及其调控功能。方法基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析。通过在DU145细胞中敲低目的基因, 探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响, 组间比较采用独立样本t检验。结果 MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织, 差异有统计学意义(7.75±1.01比4.56±0.54, t= 4.82, P<0.01)。且生存分析结果显示, 低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比(HR):1.71(1.15~2.53), P<0.01]。T1+T2期MSI1表达水平和T3+T4期表达水平无统计学意义(t=0.38, P>0.05)。MSI表达水平[HR:1.47(1.02~2.10), P<0.05]、T分期[HR:1.93(1.02~3.60), P<0.05]及Gleason评分[HR:3.17(1.59~6.30), P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。细胞计数试剂盒(CCK-8)结果, 第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度(A)值为0.929±0.085, 而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018, 与对照组比较差异有统计学意义(t=42.21、44.19, P<0.01)。DU145中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-MSI1#1和si-MSI1#2组, 组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现, ctrl组及si-MSI1#1和si-MSI1#2组PC3迁移细胞分别为790.9±80.7、403.3±49.9和504.6±117.3, 组间比较差异有统计学意义(t=21.80、13.55, P<0.01)。结论 MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关。抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力。

基于生信分析评价前列腺癌TP53表达和第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因相关性

目的基于生信分析评价前列腺癌(PCa)中TP53及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的表达水平及相关性。方法利用生物信息学方法, 挖掘公开数据库, 分析TP53基因在前列腺癌中的表达并分析其可能的调控机制。收集徐州医科大学附属医院泌尿科2022年3月至2022年8月间诊治的PCa 79例, 复阅病理切片并整理相关临床资料, 采用免疫组织化学SP染色法检测79例PCa中PTEN及TP53的蛋白表达水平。分类资料的组间比较采用卡方检验和Mann-WhitneyU检验, 应用Pearson相关分析前列腺癌患者中PTEN和TP53的相关性。结果通过TCGA数据库分析, TP53在前列腺癌组织中的表达水平明显高于正常组织(501个比52个, Z=8 874.5, P<0.05);TP53表达水平(低表达250例比高表达251例)与前列腺癌患者临床病理参数关系表明, TP53与患者年龄(χ^(2)=6.079, P>0.05)、T分期(χ^(2)=0.338, P>0.05)、N分期(χ^(2)=0.176, P>0.05)、PSA水平(χ^(2)=0.016, P>0.05)和Gleason评分(χ^(2)=3.999, P>0.05)在内的临床特征之间均无统计学意义;建立前列腺癌总体生存期(OS)预测列线图, 分析得出TP53不能作为OS的独立预后因素, PSA值与Gleason评分在前列腺有预后作用;免疫组织化学染色PTEN蛋白阳性(完整)者占73%, 阴性(缺失)者占27%;TP53蛋白染色呈野生型突变模式者占81%, 突变型表达模式者占19%。Pearson统计学分析, PTEN缺失与TP53突变型显著相关性(r=0.653, P<0.05)。结论 TP53联合PTEN对前列腺癌的进展有一定预测作用, 且为临床前列腺癌治疗提供参考。

地西他滨抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移侵袭

目的:探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制剂地西他滨(DAC)对前列腺癌PC3细胞的增殖和迁移侵袭的影响。方法:取对数生长前列腺癌细胞株PC3,分为3组,分别为对照组和实验组(DAC处理组,250 nmol/L和500 nmol/L)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和单克隆检测细胞体外增殖能力;Transwell检测PC3细胞体外迁移和侵袭能力的改变。定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测DAC对DNMT1的影响效率,并检测DAC处理后p21水平改变。组间比较采用t检验。结果:DAC使用后显著抑制PC3细胞增殖能力,并呈剂量依赖性。CCK-8实验显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC组的吸光度值分别为1.831±0.105、1.530±0.119和1.329±0.056,与对照组比较实验组差异均有统计学意义(t=3.247,P<0.05;t=7.299,P<0.05)。单克隆实验结果显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC克隆形成数目为(827.67±4.04)、(577.33±2.52)和(283.67±6.03)个,与对照组比较实验组差异均有统计学意义(t=91.072、129.835,P<0.05)。Transwell结果显示,DAC处理组细胞迁移和侵袭能力低于对照组(P<0.05)。Western blot和qPCR结果显示,DNMT1表达随DAC剂量增高表达而逐渐下降,呈剂量依赖性。DAC处理后,PC3细胞的p21表达水平呈剂量依赖性增高。结论:DAC能够有效抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过调节DNMT1-p21信号通路可能是作用机制之一。

地西他滨有效抑制前列腺癌PC3细胞移植瘤

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制剂地西他滨(Decitabine)对前列腺癌裸鼠移植瘤的治疗作用,并探讨其机制。方法:通过PC3细胞系构建裸鼠去势抵抗性前列腺癌皮下移植瘤模型,当肿瘤体积为100 mm 3随机分成两组,分别为空白对照组[磷酸盐缓冲液(PBS)组]和药物处理组(Decitabine组)。每3 d测量肿瘤体积,并绘制肿瘤时间-体积生长曲线。免疫组织化学检测肿瘤组织中细胞核增殖抗原(Ki-67)、DNMT1和p21蛋白表达。组织芯片进行免疫组织化学染色并评分,检测DNMT1和p21表达及相关性。数据符合正态分布时采用t检验分析两样本之间差异,采用ANOVA分析多组间差异。数据不符合正态分布时,组间比较采用Manu-Whitney U检验。采用χ^(2)检验分析定性资料差异。结果:成功构建裸鼠前列腺癌PC3细胞系移植瘤模型。药物处理组和PBS组移植瘤终体积分别为(611.34±117.35)mm 3和(139.66±71.11)mm 3,差异有统计学意义(t=7.686,P<0.01)。免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、DNMT1和p21蛋白表达的结果显示,药物处理组DNMT1和Ki-67表达显著低于PBS组,差异有统计学意义(t=7.686、12.820,P<0.01、P<0.01),而p21蛋白表达显著高于PBS组,两者差异有统计学意义(t=-2.890,P<0.05)。组织芯片结果显示在前列腺癌中DNMT1高表达,而p21低表达,两者之间存在线性关系(R2=0.638,P<0.01)。结论:DNMT1抑制剂Decitabine能够有效抑制趋势抵抗前列腺癌PC3细胞皮下移植瘤的生长,其机制可能通过抑制DNMT1、Ki-67和促进p21表达抑制肿瘤生长。