IL-33和IFN-γ在聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏小鼠肝损伤中的表达

目的观察三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝脏中白细胞介素-33(IL-33)和干扰素-γ(IFN-γ)的蛋白表达水平,探讨IL-33和IFN-γ在聚肌胞苷酸[Poly:(I:C)]加重三氯乙烯致敏小鼠肝脏损伤中的作用。方法6~8周雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组(5只)、溶剂对照组(5只)、TCE处理组(20只)和TCE+Poly:(I:C)联合处理组(20只),建立TCE致敏模型,Poly:(I:C)联合处理组小鼠于末次TCE激发前3 h腹腔注射100μl质量浓度为0.5 g/L的Poly:(I:C)。根据皮肤致敏结果分为TCE致敏阳性组、TCE致敏阴性组、Poly:(I:C)联合处理阳性组和Poly:(I:C)联合处理阴性组,于末次激发后48 h采用比色法检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,HE染色观察肝脏组织病理学改变情况,免疫组化和Western blot检测肝脏组织中IL-33和IFN-γ表达水平。结果TCE组与Poly:(I:C)联合处理组小鼠致敏率分别为40.0%(8/20)和35.0%(7/20),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。病理学检测发现TCE致敏阳性组小鼠可见明显肝细胞水肿,Poly:(I:C)联合处理阳性组小鼠肝组织出现大面积细胞空泡样变性,且细胞质出现疏松化状态。TCE致敏阳性组小鼠血清AST活力分别高于空白对照组、溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),Poly:(I:C)联合处理阳性组小鼠血清AST活力高于TCE致敏阳性组(P<0.05)。TCE致敏阳性组小鼠肝组织中IL-33和IFN-γ的表达水平均高于空白对照组、溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),Poly:(I:C)联合处理阳性组小鼠肝组织中IL-33和IFN-γ的表达水平高于TCE致敏阳性组(P<0.05)。TCE致敏阳性组小鼠肝组织中IL-33和IFN-γ的蛋白相对表达水平均高于空白对照组、溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),Poly:(I:C)联合处理阳性组小鼠肝组织中IL-33和IFN-γ的蛋白表达水平高于TCE致敏阳性组(P<0.05)。结论IL-33和IFN-γ参与TCE致敏所致肝损伤,并可能在Poly:(I:C)加重三氯乙烯致敏小鼠肝脏损伤中发挥重要作用。

TNFR2与三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝损伤的关系研究

目的观察三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝脏内TNFR2表达情况,探讨TNFR2与免疫性肝脏损伤之间的关系。方法选取21只SPF级雌性BALB/c小鼠,6~8周龄,随机将其分为空白对照组(5只),溶剂对照组(5只),TCE处理组(11只),建立TCE致敏小鼠模型,进行小鼠背部皮肤致敏反应评分,评分大于1分为TCE致敏组,反之为未致敏组。模型完成后处死小鼠,摘取眼球取血,测定血清肝功能活性指标ALT和AST;取出小鼠肝脏制成石蜡切片,HE染色观察小鼠肝脏病理表现,免疫组织化学(IHC)法和Western blot法观察小鼠肝脏肿瘤坏死因子(TNF)-α与TNFR2的表达情况。实时荧光定量PCR法检测TNFR2的mRNA水平。结果TCE组致敏率为45.45%(5/11);致敏组小鼠的肝功能指标较高,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示TCE致敏组可见细胞发生空泡样变性,细胞呈蜂窝状且胞质疏松,其余组小鼠的肝细胞形态正常,染色均匀。免疫组化实验显示,TCE致敏组TNF-α表达较高,且与其他组相比TCE致敏组可以观察到大量TNFR2阳性表达,评分结果差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光PCR结果显示TCE致敏组TNFR2的mRNA表达也比其他组表达升高(P<0.05)。Western blot实验表明TCE致敏组比其他组TNFR2蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNFR2在TCE致敏组小鼠肝脏中表达升高,其表达的改变可能参与了TCE致敏小鼠免疫性肝脏损伤过程。

补体C5a对三氯乙烯致敏小鼠免疫性肾脏损伤中NGAL和MCP-1表达的影响

目的分析补体片段5a(C5a)信号阻断对三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肾脏损伤过程中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨C5a在TCE致敏小鼠免疫性肾脏损伤过程中的可能作用.方法无特定病原体(SPF)级雌性BALB/c小鼠共50只,随机分为空白对照组(n=5)、溶剂对照组(n=5)、TCE处理组(n=20)、TCE+C5aRA联合处理组(n=20).依次用体积分数为50%和30%TCE溶液处理小鼠,建立TCE经皮致敏BALB/c小鼠模型为TCE处理组;溶剂对照组使用除TCE以外的其他试剂处理;空白对照组不做任何处理;TCE+C5aRA联合处理组小鼠在激发前2h腹腔注射0.5 mg/kg C5aRA溶液,其他处理同TCE处理组.于末次激发后24 h根据小鼠皮肤红斑和水肿反应评分结果将小鼠分为致敏阳性组和致敏阴性组.于末次激发后72 h无菌处死动物,分离小鼠肾脏,通过组织病理学染色观察小鼠肾脏结构损伤,分别采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组化(IHC)的方法检测NGAL和MCP-1 mRNA及蛋白水平的改变.结果TCE处理组和TCE+C5aRA联合处理组小鼠致敏率分别为45.0%(9/20)和40.0%(8/20),空白对照组和溶剂对照组小鼠未见明显皮肤损害.组织病理学染色结果显示,TCE致敏阳性组小鼠可见明显的肾小管扩张,肾小管上皮细胞空泡变性,部分有间质炎细胞浸润;联合处理致敏阳性组小鼠上述病理损伤较轻,未见炎细胞浸润.qRT-PCR结果显示,TCE致敏阳性组小鼠肾脏中NGAL和MCP-1mRNA表达水平均明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05);联合处理致敏阳性组小鼠肾脏中NGAL和MCP-1mRNA表达水平均明显低于TCE致敏阳性组(P<0.05).IHC结果显示,TCE致敏阳性组小鼠肾脏中NGAL和MCP-1蛋白表达水平均明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),联合处理致敏阳性组小鼠肾脏中NGAL和MCP-1蛋白表达水平均明显低于TCE致敏阳性组(P<0.05).结论C5a可能通过影响NGAL和MCP-1的表达参与TCE致敏小鼠肾脏损伤,抑制C5a可能是保护TCE所致的免疫性肾脏损伤的有效手段.

M1型库普弗细胞极化在三氯乙烯致敏小鼠肝脏损伤中的作用

[背景]三氯乙烯(TCE)可致职业性药疹样皮炎并伴有严重的肝脏损伤,是致死的主要原因之一,但其发生机制尚不清楚。[目的]观察TCE致敏小鼠肝脏中库普弗细胞(KCs)极化的情况,探讨KCs的M1型极化在TCE免疫性肝损伤中的作用。[方法]36只雌性BALB/c小鼠,6~8周龄,随机分为4组:空白对照组(n=5),溶剂对照组(n=5),TCE处理组(TCE组)(n=11),抑制剂处理组(TCE+GdCl3组)(n=15),适应性喂养一周。按照本课题组的建模方法建立TCE致敏模型。在末次激发24 h后对TCE组和TCE+GdCl3组进行皮肤评分,将TCE组和TCE+GdCl3组小鼠分为致敏阳性组和致敏阴性组;末次激发72 h后处死小鼠,取肝脏。全自动生化分析仪检测肝脏损伤指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,HE染色法检测小鼠肝脏病理变化,免疫组化法检测KCs的表面标志物F4/80的表达情况,免疫荧光法检测小鼠肝脏M1型巨噬细胞表面标志物CD11c的表达水平,免疫组化法检测小鼠肝脏肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达情况。[结果]TCE组致敏率为45.45%(5/11),TCE+GdCl3组致敏率为33.33%(5/15),差异无统计学意义(P>0.05)。血清ALT和AST水平在空白对照组、溶剂对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);与溶剂对照组和TCE阴性组相比,TCE阳性组血清ALT和AST升高有统计学意义(P<0.05),TCE阳性组ALT及AST水平分别为(115.05±13.74)U/L和(224.68±30.98)U/L;TCE+GdCl3阳性组ALT及AST水平分别为(97.59±9.16)U/L和(124.69±11.26)U/L,低于TCE阳性组(P<0.05)。HE染色结果显示:对照组及阴性组小鼠肝脏细胞形态正常,染色均匀;TCE阳性组小鼠肝脏细胞形态异常,细胞空泡样变性;TCE+GdCl3阳性组小鼠肝脏部分细胞出现水肿。肝脏F4/80的免疫组化结果显示:空白对照组、溶剂对照组表达较低,TCE阳性组F4/80大量沉积,TCE+GdCl3阳性组表达较TCE阳性组减少(P<0.05)。肝脏CD11c免疫荧光结果显示:空白对照组、溶剂对照组CD11c表达较少,TCE阳性组CD11c表达水平较高,而TCE+GdCl3阳性组该指标表达水平下降。免疫组化结果显示:空白对照组和溶剂对照组TNF-α表达水平极低,TCE阳性组肝脏TNF-α大量沉积,TCE+GdCl3阳性组肝脏中TNF-α表达水平较TCE阳性组下降(P<0.05)。[结论]KCs在TCE致敏小鼠免疫性肝损伤中发挥重要作用,其M1型极化会加重小鼠肝脏损伤。