MYH9在消化道肿瘤中的研究进展

消化道肿瘤是我国常见的恶性肿瘤,发病率逐年上升。长期以来,消化道肿瘤的发病率和病死率未表现出明显下降的态势,寻找并确定有效的诊断和治疗靶点刻不容缓。MYH9又称肌球蛋白ⅡA或非肌肉肌球蛋白重链9,是Ⅱ类常规肌球蛋白的一个226 kDa的亚基,以六聚酶的形式存在,由两条重链和两对轻链组成,MYH9与细胞质中的肌动蛋白相互作用,参与不同的细胞过程,如细胞运动、细胞迁移和细胞粘附。近来有研究发现,MYH9在食管鳞状细胞癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤中高度表达并促进其侵袭进展。然而,MYH9在消化道肿瘤中的具体发生机制尚不明确,本文对近年相关研究进行综述,旨在探讨MYH9在消化道肿瘤中未来的研究及临床价值。

长链非编码RNA配对盒基因8反义RNA1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的RNA转录本。配对盒基因8反义RNA1(PAX8-AS1)是lncRNA的一种,在甲状腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、急性白血病、肾上腺皮质癌等多种恶性肿瘤中异常表达,通过作为竞争性内源RNA和其单核苷酸多态性等机制调节癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和耐药性,对癌症的诊断、治疗及预后具有非常重要的价值。本文就lncRNA PAX8-AS1在恶性肿瘤中的作用机制及潜在应用进行综述。

三氧化二砷诱导人乳腺癌MDA—MB-435s细胞雌激素受体α重新表达及联合内分泌治疗裸鼠移植瘤的效果

目的研究三氧化二砷（As2O3）对雌激素受体α（ERα）阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-435s的去甲基化作用及可能机制，观察As2O3联合他莫昔芬（TAM）对MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤的疗效。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法，检测不同浓度As2O3单用或与TAM联用对MDA—MB-435s细胞的增殖抑制作用。以不同浓度As2O3处理MDA—MB-435s细胞，同时建立MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤模型，以不同剂量的As2O3单用或与TAM联用治疗裸鼠移植瘤。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP），检测不同处理组MDA—MB-435s细胞和裸鼠移植瘤组织中ERa基因的甲基化状态。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和ERαmRNA的表达变化。采用Westernblot法，检测DNMTl和ERa蛋白的表达变化。治疗过程中，每周测量裸鼠移植瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线。结果不同浓度As203单用或与TAM联合处理组MDA—MB-435s细胞的增殖均受到明显抑制，其中4μmol／LAs2O3＋TAM组处理72h时的抑制率最高，达62．6％。1、2和4μmol／LAs2O3对MDA—MB-435s细胞有去甲基化作用，并可使DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，ERamRNA和蛋白恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联合处理后，裸鼠移植瘤组织中ERa基因出现不同程度的去甲基化条带，DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，而ERamRNA和蛋白则逐渐恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联用均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长，以4mg／kgAs2O3＋5mg／kgTAM组的抑制作用最强，肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为79．5％和76．4％。结论As2O3可以通过抑制DNMTl的活性使ERa阴性人乳腺癌MDA—MB-435s细胞的ERa基因去甲基化，并恢复其表达；恢复的ERμ可以使MDA—MB-435s细胞对内分泌治疗敏感。As2O3与TAM联用可能成为治疗ERa阴性乳腺癌患者的新途径。

ABCA8通过激活ERK信号通路促进人胰腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:探究ATP结合盒转运蛋白家族A亚家族成员8(ATP-binding cassette transporter subfamily A member 8,ABCA8)对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,以及可能的作用机制。方法:用携带有ABGA8基因的慢病毒GV358或空载体慢病毒(对照组)感染人胰腺癌CFPAC-1细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ABCA8 mRNA和蛋白的表达水平;细胞划痕愈合实验、Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测ABCA8过表达对CFPAC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测ABCA8过表达对细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及其磷酸化蛋白表达水平的影响。应用ERK抑制剂SCH772984阻断ERK信号通路,再行Transwell小室迁移和侵袭实验以检测ABCA8介导的促CFPAC-1细胞迁移和侵袭能力的变化;采用实时荧光定量PCR法检测ABCA8过表达对CFPAC-1细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)、MMP7、MMP9和金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase1,TIMP1)mRNA表达水平的影响,以及SCH772984阻断ERK信号通路后对MMP7和TIMP1 mRNA表达水平的影响。结果:成功构建获得ABCA8稳定过表达的CFPAC-1细胞。ABCA8过表达能够明显促进CFPAC-1细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)。在ABCA8过表达CFPAC-1细胞中,ERK磷酸化蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);ERK抑制剂SCH772984可以消除ABCA8对CFPAC-1细胞迁移和侵袭能力的影响(P值均>0.05)。同时,ABCA8过表达可以显著上调CFPAC-1细胞中MMP7 mRNA的表达水平(P<0.001),并下调TIMP1 mRNA的表达水平(P<0.01);ERK抑制剂可消除ABCA8介导的MMP7和TIMP1 mRNA的表达差异(P值均>0.05)。结论:ABCA8能够通过ERK信号通路增强人胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力,ABCA8介导的迁移和侵袭能力增强可能与上调MMP7和下调TIMP1的表达有关。

肌球蛋白重链9在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖能力的影响

目的观察胃癌组织肌球蛋白重链9(myosin heavy chain 9,MYH9)表达变化,探讨其对胃癌细胞增殖能力的影响。方法自TCGA和GTEx数据库收集正常组织以及食管癌、胃癌、胆管癌、胶质瘤、急性髓系白血病、胰腺癌、胸腺瘤组织转录组测序数据,自TCGA数据库收集胃癌患者临床病理资料,比较不同癌组织与正常组织MYH9mRNA相对表达量,分析MYH9表达与胃癌患者临床病理特征的关系。自Kaplan-Meier Plotter数据库收集胃癌患者生存资料,绘制Kaplan-Meier曲线,比较MYH9高、低表达胃癌患者总生存率、首次进展生存率、进展后生存率。采用实时荧光定量PCR法检测人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1和胃癌AGS、SNU16、HGC27细胞MYH9mRNA相对表达量,筛选出表达最高的胃癌AGS细胞。取对数生长期AGS细胞,分为NC组(转染siRNA-NC)、siMYH9-1组(转染siMYH9-1)、siMYH9-2组(转染siMYH9-2)。转染48h,采用实时荧光定量PCR法检测MYH9mRNA相对表达量,采用Western blot法检测MYH9蛋白相对表达量,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,采用EdU实验检测EdU阳性细胞率;转染后培养0、24、48、72、96h,采用CCK-8实验检测细胞增殖率。结果数据库分析结果显示,胃癌组织MYH9 mRNA相对表达量高于正常组织(P<0.05);T分期T_(3)~T_(4)期、组织学分级G_(3)级的胃癌患者MYH9高表达比率分别高于T分期T_(1)~T_(2)期、组织学分级G_(1)~G_(2)级者(P<0.05),不同性别、年龄以及有无幽门螺旋杆菌感染、胃癌家族史、淋巴结转移、远处转移的胃癌患者MYH9高表达比率比较差异均无统计学意义(P>0.05);MYH9高表达的胃癌患者总生存率、首次进展生存率、进展后生存率均低于MYH9低表达MYH9者(P<0.05)。AGS(2486.02±332.36)、SNU16(729.16±166.39)、HGC27(652.05±92.48)细胞MYH9mRNA相对表达量均高于CCC-HSF-1细胞(1.00±0.11)(P<0.05),SNU16、HGC27细胞MYH9 mRNA相对表达量均低于AGS细胞(P<0.05)。siMYH9-1组、siMYH9-2组细胞MYH9mRNA(0.14±0.02、0.23±0.01)及蛋白(0.19±0.13、0.22±0.14)相对表达量、细胞克隆形成数目[(95.00±16.52)、(100.67±8.50)个]、EdU阳性细胞率[(23.03±1.98)%、(27.07±1.89)%]均低于NC组(1.00±0.12、0.83±0.11、(325.67±26.69)个、(51.52±2.58)%)(P<0.05),siMYH9-1组细胞MYH9mRNA相对表达量低于siMYH9-2组(P<0.05),MYH9蛋白相对表达量、细胞克隆形成数目、EdU阳性细胞率与siMYH9-2组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。siMYH9-1组、siMYH9-2组转染后培养48h[(49.20±0.85)%、(73.33±1.16)%]、72h[(45.94±0.43)%、(59.50±1.22)%]、96h[(36.41±1.68)%、(47.24±0.29)%]时细胞增殖率均低于NC组[(100.00±0)%、(100.00±0)%、(100.00±0)%](P<0.05),0、24h时细胞增殖率与NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05);siMYH9-2组转染后培养48、72、96h时细胞增殖率均高于siMYH9-1组(P<0.05),0、24h时与siMYH9-1组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MYH9在胃癌组织中呈高表达,提示胃癌患者预后不良,敲低MYH9表达可抑制胃癌AGS细胞增殖。