利用 1株鹅源腺病毒 Y81G4 株 ,经鹅胚增殖后收获尿囊液 ,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组 DNA.病毒 DNA经 H ind 酶切后共产生 1 0个片段 ,分别回收各酶切片段 ,与经 H ind 单酶切的p UC1 8连接 ,获得 8个不同的重组质粒 .对...利用 1株鹅源腺病毒 Y81G4 株 ,经鹅胚增殖后收获尿囊液 ,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组 DNA.病毒 DNA经 H ind 酶切后共产生 1 0个片段 ,分别回收各酶切片段 ,与经 H ind 单酶切的p UC1 8连接 ,获得 8个不同的重组质粒 .对于未克隆到的两末端片段 ,经碱处理去除末端蛋白后 ,以平端和 H ind 粘端与经 Sma 和 H ind 双酶切的 p UC1 8连接 ,获得了重组质粒 p GAHC和 p GAHI.克隆的各酶切片段 ,通过酶切电泳和 Southern blotting结果鉴定 ,证明已分别克隆到该病毒基因组 DNA H ind 酶切片段 ,且各酶切片段大小之和约为 3 2 .展开更多
根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计一对引物扩增基因组上nt358-nt1042之间684 bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSB1细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段,且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1 fg,而以其他病原核酸为模...根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计一对引物扩增基因组上nt358-nt1042之间684 bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSB1细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段,且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1 fg,而以其他病原核酸为模板扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对实验感染鸡肝脏、脾脏、胸腺、肾脏、法氏囊、骨髓、白细胞、泄殖腔棉拭子等不同样品进行检测,均可扩增出相应DNA片段。证明我们建立的PCR方法敏感性特异性强,可用于临床感染不同组织CIAV的检测。展开更多
文摘利用 1株鹅源腺病毒 Y81G4 株 ,经鹅胚增殖后收获尿囊液 ,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组 DNA.病毒 DNA经 H ind 酶切后共产生 1 0个片段 ,分别回收各酶切片段 ,与经 H ind 单酶切的p UC1 8连接 ,获得 8个不同的重组质粒 .对于未克隆到的两末端片段 ,经碱处理去除末端蛋白后 ,以平端和 H ind 粘端与经 Sma 和 H ind 双酶切的 p UC1 8连接 ,获得了重组质粒 p GAHC和 p GAHI.克隆的各酶切片段 ,通过酶切电泳和 Southern blotting结果鉴定 ,证明已分别克隆到该病毒基因组 DNA H ind 酶切片段 ,且各酶切片段大小之和约为 3 2 .
文摘根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计一对引物扩增基因组上nt358-nt1042之间684 bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSB1细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段,且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1 fg,而以其他病原核酸为模板扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对实验感染鸡肝脏、脾脏、胸腺、肾脏、法氏囊、骨髓、白细胞、泄殖腔棉拭子等不同样品进行检测,均可扩增出相应DNA片段。证明我们建立的PCR方法敏感性特异性强,可用于临床感染不同组织CIAV的检测。