ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原

对应于同一F1抗原分子且不相互阻断的2株F1 McAb,分别制备酶标抗体并包被反应板,用于ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原。以PcAb-RIHA和四步检查为对照,检测不含F1抗原的细菌8株,非鼠疫疫区8种动物的新鲜和腐败标本723份,检测结果全部阴性,和四步检查结果相同,PcAb-RIHA出现非特异反应45份。检测鼠疫强毒菌18株和感染鼠疫标本27份,GMT比PcAb-RIHA高2~4和2~3。本法特异性、敏感性、试剂稳定性均高于PcAb-RIHA。应用于鼠疫疫源地调查、疫情监测、人间疫情判定、细菌学研究效果良好。

碘控释器用于食用盐水加碘的实验报告

有关食用盐水加碘防治ＩＤＤ的效果，初步展现了良好的应用前景。本文报告碘控释器用于盐水加碘的实验研究。碘控释器由漂浮器、碘源室和滤板组成，在盐水中处于悬浮状态，以防止被泥沙埋没而影响其释碘速度。连续检测了１７个月，日均释碘量２．４８２ｍｇ（ｓ＝０．６２７，Ｆ＝１．４１４，ｐ＞０．０５），符合长效、稳定的要求，改变滤板型号即可满足不同的补碘量。通过透明的碘源室观察碘源的消耗状况，便于群众自检并及时更换。碘控释器用于食用盐水加碘防治ＩＤＤ，是一项适于新疆特殊情况下的有效加碘技术措施。

碘缺乏病重病区推广土盐水加碘防治效果观察

目的观测在碘缺乏病（IDD）严重流行且推广加碘盐困难的特殊病区，推广碘控释器土盐水加碘防治IDD效果。方法随机抽样检查和田地区各县市农牧区居民使用碘控释器情况及其防治效果。结果推广后第3个月和第15个月，和田地区农牧民碘控释器使用率分别为74．4％和70．3％；碘控释器加碘土盐水含碘量为6．6mg／L；8～10岁儿童平均尿碘加碘前仅59μg／L，加碘四个月上升到205μg／L，连续加碘到第21个月为238μg／L；加碘前甲状腺肿大率为51．2％，Ⅱ°肿大率为11．9％；加碘15个月甲状腺肿大率为32．3％，Ⅱ°肿大率为6．2％；甲状腺肿大率均显著降低（P＜0．01）。结论碘控释器土盐水加碘防治IDD，顺应农牧民用盐习惯，多数居民开始使用；尿碘短期内可达适宜水平，且长期稳定，防治效果良好，可在适用地区组织推广。

土盐水加碘防治碘缺乏病现场实验观察

为观测土盐水加碘防治碘缺乏病 (IDD)的效果 ,1997年 6月开始在吐鲁番市阿其克村进行土盐水加碘防治 IDD现场实验研究 ,结果表明 ,居民补碘率由 4 . 0 %提高到 80 . 1% ,盐水含碘量由 4 μg/ L 提高到 4 . 6 3mg/ L,食用加碘盐水的儿童尿碘由 41 . 1 μg/ L上升到 2 0 5μg/ L,甲状腺吸碘率由 6 3. 3%降低到 36 . 8% ;持续两年后 ,甲状腺容积由原来肿大的 10 . 6 3cm3缩小到 6 . 87cm3,甲状腺肿大率由 4 9. 8%降低到 6 . 6 % ,土盐水加碘前后各项检测指标差异均显著 (P<0 . 0 1) ;碘缺乏性甲状腺肿大治愈率 86 . 8%。土盐水加碘费用低廉 ,容易被当地政府和居民接受 ,补碘量适宜 ,防治 IDD效果良好。

土盐水加碘法补碘对儿童生长发育的促进作用

为探讨土盐水加碘法补碘对儿童生长发育的促进作用 ,用标准方法测定儿童的体质、体能和智力。连续食用加碘土盐水 2年 ,碘营养水平正常 ,甲状腺肿大逐渐消退 ,9～ 11岁儿童平均身高增高 4.16 cm,体重增加 1.5 4kg,5 0 m跑速度增快 1.0 4秒 ,立定跳远增加 6 .47cm,连数速度增快 11.0 2 % ,和补碘前比较差异均显著 (P<0 .0 5 ) ,符号翻译增快 5 .94% (P>0 .0 5 ) ,智商 (IQ)没有变化。纠正碘缺乏可促进儿童体质、体能恢复到正常水平 。

鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒的应用研究

目的对鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒进行现场应用评价。方法结合鼠疫常规监测工作,对现场采集的标本同时进行常规鼠疫检验和ELISA检测,然后进行统计分析。结果鼠疫菌分离培养和ELISA检测人和动物脏器标本1798份,ELISA与鼠疫菌分离培养比较检出率较高(7.01%),符合率可达98.23%,鼠疫抗原ELISA检测试剂盒敏感性好、时间短。ELISA抗体检测试剂盒与间接血凝试验检测人和动物血清1份,结果无明显差异,但符合率低,ELISA加胶体金标记层析检测鼠疫F1抗体阳性可提高符合率(91.56%)。结论鼠疫F1抗原(抗体)ELISA检测试剂盒可以用于鼠疫的早期快速诊断。

灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地监测中应用ELISA检测F1抗体的可行性分析

目的观测灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地监测中应用酶联免疫吸附试验夹心法(ELISA)检测鼠疫F1抗体的效果,分析应用前景。方法 ELISA和间接血凝试验(IHA)同步检测动物血清鼠疫F1抗体,比较两种方法的阳性率、反应滴度。结果 ELISA和IHA检测血清的鼠疫F1抗体,长尾黄鼠阳性率分别为11.71%(118/1 008)和1.73%(21/1 216),平均滴度分别为27.805和21.254;牧犬阳性率分别为38.89%(28/72)和10.71%(7/75),平均滴度分别为27.731和21.50。ELISA检测长尾黄鼠、牧犬血清鼠疫F1抗体的阳性率和平均滴度均高于IHA,差异非常显著(P<0.001)。结论两种方法同步用于鼠疫监测,可及时发现并纠正单一方法因试剂变质或失效出现的错误结果,为制定防控措施提供准确的监测资料。

犬接种鼠疫菌后的血清鼠疫F1抗体及IgM动态

目的通过覌测犬接种鼠疫菌后鼠疫F1抗体及其IgM动态,推算发生动物鼠疫流行的时间和地点。方法应用ELISA夹心法检测犬鼠疫F1抗体,捕获法检测IgM,两种方法同步检测接种鼠疫菌EVparis株活菌的犬血清。结果犬接种鼠疫菌后第5d,抗鼠疫F1抗体和IgM都出现了阳性反应,IgM显色和滴度第7～9d达到高峰,第15～22d开始快速下降,第46d以后降到阳性标准以下;F1抗体在接种鼠疫菌后第38d显色和滴度达到高峰,第78d仍保持在OD450nm2.700以上和滴度1∶210左右。结论根据ELISA检测犬鼠疫F1抗体和IgM的结果,可推算动物间鼠疫流行的时间和范围,为及时实施防控措施提供参考资料。

耶尔森氏菌外膜蛋白1体外表达条件的观察

使用常规培基孵育耶尔森氏菌一般均能获得满意的增菌效果。有文献报导,不同培基对耶尔森氏菌外膜蛋白(Yops)的表达无显著的影响。然而,我们的实验结果提示,Yop1的体外表达具有严格的培基依赖性,该蛋白仅在只含氨基酸成份的最小培基中才能充分表达,其表达量远高于其他几种常规培基。此外,我们还观测了细菌菌龄对这种蛋白体外表达的影响,结果表明,菌龄也影响着该蛋白的体外表达,但其作用强度不如培基那样显著。转换温度后12小时,膜制剂中Yop1的含量达到高峰,增加孵育时间不能增大含量,反而使其呈明显的下降趋势,温度转换后24小时,表达量仅略高于2.5小时的水平。本文还报导了两种孵育温度(22℃、37℃)以及钙离子对Yop1蛋白表达的作用,所得结论与国外同类研究的结果一致,即与其他Yops不同,yopA基因的表达只受生长温度的控制而与钙离子的存在与否无关。本实验的结果将有助于Yop1蛋白的分析研究,特别是此种蛋白的提取制备。

鼠疫F1McAb酶免疫染色法快速检验鼠疫菌

为缩短检验鼠疫菌的时间 ,建立了酶免疫染色法检验鼠疫菌的方法 ,被检涂片标本用含过氧化物酶底物的固定液 ,固定标本同时 ,内源性过氧化物酶被消耗 ,辣根过氧化物酶标记鼠疫 F1单克隆抗体和鼠疫菌菌体表面的特异性 F1抗原结合 ,底物被酶催化生成有色沉淀物使鼠疫菌着色 ,用普通光学显微镜观察结果 ,常温 1h出结果 ,Kaplow法鼠疫菌被蓝色晶体覆盖 ,DAB法鼠疫菌呈棕黄色 ,不含 F1抗原的 8株细菌均为阴性 ,酶免疫染色法具有特异、快速、简便的特点 。

酶标鼠疫F1 McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用

目的观察酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用效果。方法实验感染鼠疫强毒菌的病死小鼠和处死健康小鼠尸体 ,2 0℃以上室温放置 ,用鼠疫F1McAb酶免疫染色法检测 ,同时用细菌学检验方法分离鼠疫菌和反向血凝试验 (RIHA)检测鼠疫F1抗原。结果直接培养仅从 5d内的鼠尸分离检出鼠疫菌 ,阳性率为 5 3 .3 % ;动物实验检出鼠疫菌的最长时间为 8d ,阳性率为 71.6%。存放 13d内 ,酶免疫染色阳性率为 99.1% ,RIHA阳性率98. 2 % ,用酶免疫染色法和RIHA检测健康动物腐败脏器全部阴性。以上方法检查鼠疫疫区自毙动物标本 12份 ,酶免疫染色法阳性 7份 ,RIHA阳性 6份 ,动物实验阳性 5份 ,直接培养未获得阳性结果。结论酶免疫染色法检查动物腐败脏器中的鼠疫菌具有较高的敏感性和特异性。

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。

鼠疫F1McAb纯化抗原固相放射免疫试验检测鼠疫抗体的应用

本文介绍了用鼠疫F1McAb亲和层析法纯化鼠疫F1抗原及用Lodogen法制备^(125)I-F1标记物的方法。并以此标记物为试剂,用于固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体。试验表明,固相放射免疫试验较间接血凝试验特异性强,敏感性高,而且可用于检测各种鼠疫动物血清。操作程序亦较放射免疫沉淀试验简单,主要省去了离心沉淀及抽吸游离^(125)I-F1的过程。

反向血凝抑制试验(RIHI)检测鼠疫F1抗体在疫情监测和疫源地调查中的应用

在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部阴性,IHA 出现假阳性反应89份。鼠疫疫区3种动物血清713份,RIHI 检出 Fl 抗体阳性反应72份,未出现假阳性反应,IHA 检出 F1 抗体阳性反应44份,出现假阳性反应21份,几何平均滴度 RlHl 比 IHA 高2^(1.45)。RIHI 的特异性和敏感性均高于 IHA ,且简便、稳定、快速,是取代 IHA 检测鼠疫 Fl 抗体的理想方法。

鼠疫菌弱毒株粗制鼠毒素含量及其SDS-PAGE电泳图形比较

鼠疫菌Evparis株的湿菌体和等量湿菌体制备的菌粉，用2．5％NaCl浸洗可溶性蛋白质，硫酸铵分段沉淀法制备粗制鼠毒素，收获量及其SDS－PAGE电泳图形基本相同。用LB固体培养基增殖鼠疫苗弱毒株，每株培养面积300cm2，收获湿菌体EVparis株0．6g，MⅡ40株、Otten株、A1122株1．2g，175株1．4g。不同菌株每克湿菌体收获粗制鼠毒素的量分别为：MⅡ40株9．34mg，175株14．96mg，EVparis株1575mg，A1122株21．72mg，Otten株26．06mg。粗制鼠毒素SDSPAGE电泳图形显示表征分子量17～94KDa11条蛋白带，不同菌株制备的粗制鼠毒素的蛋白带数量和显色深度均有差异。