小鼠原发性肝癌模型的建立与优化

目的 使用三种造模方法以建立小鼠的原发性肝癌模型,并比较各自的优缺点。方法 将80只14~16日龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为4组(低剂量DEN组、高剂量DEN组、DEN+CCl4组、对照组):低剂量DEN组小鼠腹腔注射浓度为25 mg/kg的二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)染毒;高剂量DEN组小鼠腹腔注射浓度为40 mg/kg的DEN染毒;DEN+CCl4组小鼠腹腔注射2 mg/kg的DEN染毒,两周后按20%浓度的四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)按5 m L/kg剂量腹腔注射小鼠,每周给药2次共16周;对照组不予任何处理。统计各组小鼠的生存情况,各组小鼠在造模的第24周集中麻醉断颈处死后剖取肝,比较各组间肝的外观、肿瘤的数目及肿瘤的发生率,并检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、高尔基体跨膜糖蛋白73(Golgi protein 73,GP73)以及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的水平。结果 与对照组相比,三个实验组的ALT(P<0. 001)、AST(P<0. 001)、GP73(P<0. 001)、AFP (P<0. 01)、肿瘤发生率(P<0. 001)和肿瘤数目显著增加(P<0. 001)。截止造模后的24周,低剂量DEN组小鼠死亡率为15%,肝癌发生率为35%;高剂量DEN组小鼠死亡率为30%,肝癌发生率为86%;DEN+CCl4组小鼠死亡率为20%,肝癌发生率为56%;对照组小鼠全部存活且肝未发现异常。结论 各实验组的造模方法均可以成功进行小鼠肝癌造模,但高剂量DEN组表现出了明显的优势,它可以在短时间内成功的建立起高发生率且稳定的小鼠原发性肝癌模型,为小鼠肝癌造模提供了新的途径。

靶向NRF2逆转肝癌对索拉非尼耐药的实验研究

目的:探讨NRF2通路与肝癌对索拉非尼耐药的机制。方法:采用浓度梯度递增法建立肝癌细胞系Hep G2和Huh7的耐药细胞株Hep G2-SR和Huh7-SR,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,验证细胞耐药特性。采用Western blot和实时定量PCR检测NRF2蛋白和mRNA的表达水平,验证索拉非尼对NRF2影响及调节水平。采用s i RNA阻断NRF2,验证对索拉非尼耐药的逆转作用。结果 :索拉非尼在Huh7及HepG2细胞促进细胞凋亡的作用明显强于Huh7-SR、HepG2-SR细胞(P<0.05)。耐药细胞株中NRF2蛋白的表达水平明显高于亲本细胞株(P<0.05),亲本细胞株中索拉非尼可上调NRF2蛋白的表达水平(P<0.05),但NRF2 mRNA表达差异无统计学意义(P<0.05)。采用si RNA阻断NRF2,可逆转肝癌对索拉非尼耐药,两者协同可促进细胞凋亡。结论:索拉非尼经转录后水平调解激活NRF2,诱导肝癌对索拉非尼耐药;而抑制NRF2可逆转肝癌对索拉非尼耐药。