冬凌草甲素诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的:观察冬凌草甲素(oridonin)对人结肠癌细胞HCT-116和HT-29的凋亡抑制作用,同时探讨其诱导结肠癌细胞凋亡作用的机制。方法:应用Cell-counting kit-8检测冬凌草甲素对HCT-116和HT-29细胞的生长抑制作用及对细胞活力的影响;采用烟酸己可碱(hoechst)33342和碘化丙啶(propidium lodine,PI)荧光染色法,观察冬凌草甲素诱导结肠癌HCT-116和HT-29细胞凋亡的形态学变化;采用总NO检测试剂盒与活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测冬凌草甲素处理HCT-116和HT-29细胞时,细胞内NO与ROS水平的变化;同时应用ROS阻断剂N-乙酰基半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)预处理HCT-116、HT-29细胞后再加入冬凌草甲素,观察细胞凋亡情况。结果:冬凌草甲素可明显抑制HCT-116和HT-29细胞的增殖、降低细胞活力;Hoechst 33342和PI双荧光染色发现冬凌草甲素可诱导HCT-116和HT-29细胞的凋亡。虽然冬凌草甲素不能改变HCT-116、HT-29细胞内的NO水平,但是可提高HCT-11和HT-29细胞内ROS水平;ROS阻断剂NAC可阻断冬凌草甲素诱导HCT-116和HT-29细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过提高ROS水平诱导HCT-116和HT-29细胞的凋亡。

冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的探讨冬凌草甲素(Ori)在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制。方法应用不同浓度Ori(0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L)处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力。Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加。结论体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物。

胃癌组织中VEGF和Ang-2表达及微血管密度研究

目的探讨胃癌组织中血管生成素-2(Ang-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达以及CD34标记的微血管密度(MVD)及其临床意义。方法选择胃癌和癌旁组织标本各41例,免疫组化法检测组织中VEGF、Ang-2和CD34表达;CD34染色热点处计算MVD。分析VEGF和Ang-2表达、MVD、肿瘤临床病理因素之间的相关性;并就41例胃癌患者的预后及其相关因素进行多重回归分析。结果胃癌和癌旁组织中MVD分别为51.91±15.38和30.76±10.67,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);VEGF阳性表达标本(71%)MVD为51.93±16.36,阴性表达标本MVD为31.52±5.18(P=0.0014);Ang-2阳性表达标本(63%)MVD为51.83±5.23,阴性表达标本MVD为32.20±4.77(P<0.01)。相关分析显示,VEGF、Ang-2、MVD与癌肿大小、浸润深度、临床分期和淋巴转移显著相关。多重回归分析表明,浸润深度是胃癌重要预后因素(P<0.001)。结论胃癌组织中VEGF、Ang-2的表达与新生血管生成密切相关。通过VEGF和Ang-2高表达而诱导的高MVD对判断胃癌预后有重要意义。

槲皮素对LPS诱导的体外培养肝细胞损伤的影响及机制

目的:通过体外观察槲皮素对脂多糖(LPS)所致肝细胞损伤和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响,探讨槲皮素的作用及其机制。方法:胶原酶灌流分离培养大鼠肝细胞,40 mg/L LPS诱导损伤,同时用0.5-10μmol/L浓度槲皮素进行干预,作用24 h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、PI-AnnexinV染色检测肝细胞的增殖凋亡比例、测定上清液乳酸脱氢酶含量,ELISA、RT-PCR方法检测TNF-α表达。结果:40 mg/L LPS作用于原代培养大鼠肝细胞24 h后,与对照组相比,细胞生长抑制率达27%,细胞总凋亡率30.2%,培养上清液LDH含量增加20倍,TNF-αmRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05)。给予0.5-10μmol/L槲皮素后,各项指标有明显下降,且呈量效关系。结论:0.5-10μmol/L槲皮素拮抗LPS所致的肝细胞损伤,其保护作用的机制可能与抑制TNF-α的表达有关。

心脏起搏器携带者心理状况及影响因素的分析

目的 分析心脏起搏器携带者的心理状况和影响因素。方法 采用SCL 90症状自评量表、医学应对问卷 ,对 70例心脏起搏器携带者进行调查并统计分析。结果 起搏器携带者SCL 90阳性项目数显著高于国内常模 ( <0 0 0 1) ,男性携带者敌对因子分显著高于女性。SCL 90与年龄呈负相关 ,与“面对”和“屈服”应对方式呈正相关 ,与“回避”应对方式无关。结论 起搏器携带者存在较严重的心理问题 ,其中男性和相对年轻者尤甚 ,“面对”和“屈服”应对方式不利于起搏器携带者身心健康。护理人员在心理护理过程中 ,应提供充分的信息 ,注意男女起搏器携带者的心理变化特点 ,给予心理支持 ,帮助其采用有交往的应对措施 ,减少心理压力。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与冠心病临床类型的关系

目的探讨基质金属蛋白酶(MMPs)上游调控因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)与动脉粥样硬化形成及冠心病临床类型的关系。方法根据临床表现和冠状动脉造影结果,223例患者分成ST段抬高心肌梗死(STEMI)组(n=65)、非ST段抬高急性冠状动脉综合征(NSTE ACS)组(n=42)、稳定型心绞痛(SAP)组(n=75)、冠状动脉造影正常组(正常对照组,n=41)。使用流式细胞仪检测患者外周血单核细胞(PBMCs)表面EMMPRIN的平均荧光强度(MFI);ELISA法测定血清中MMP-9的质量浓度;免疫速率法检测血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)的质量浓度。结果SAP组、STEMI组及NSTE ACS组PBMCs表面EMMPRIN MFI均高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);而STEMI组和NSTEACS组又高于SAP组(P<0.05或P<0.01)。各组中PBMCs表面EMMPRIN的表达特点与hs-CRP和MMP-9的表达特征一致。相关性分析显示,PBMCs表面的EMMPRIN MFI与血清MMP-9、hs-CRP质量浓度呈正相关(r=0.168,P<0.05;r=0.305,P<0.01)。结论EMMPRIN作为MMPs上游调控因子可能对动脉粥样硬化形成和冠心病的不稳定有促进作用。

TNF-α受体-IgG1 Fc段融合蛋白对感染性休克大鼠的治疗作用

目的研究早期应用可溶性肿瘤坏死因子-α受体-IgG1 Fc段融合蛋白(sTNF-αR-Fc)对于感染性休克大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法30只Sprague-Daw ley大鼠随机平均分为对照组(注射生理盐水)、模型组(注射脂多糖)和sTNF-αR-Fc处理组(注射sTNF-αR-Fc和脂多糖)。多道生物信号分析系统监测各组大鼠平均动脉压变化并记录死亡情况;流式细胞仪检测脾细胞中TNF-α水平;RT-PCR检测肝脏及心脏组织TNF-α、IL-6 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,模型组TNF-αmRNA表达水平升高,平均动脉压和生存率下降(P<0.05);与模型组相比,sTNF-αR-Fc处理组TNF-α、IL-6水平下降,生存率提高(P<0.05)。结论sTNF-αR-Fc可以显著降低脂多糖所致感染性休克大鼠的死亡率,其可能是通过降低TNF-α水平而起治疗作用。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法:建立大鼠急性肺损伤模型,随机分为对照组、rhTNFR:Fc组、LPS组和rhTNFR:Fc+LPS组。给药后记录各组大鼠死亡情况,测定肺组织湿重/干重比,HE染色观察肺组织病理学改变,检测血清TNF-α含量及其生物活性。结果:LPS注射后大鼠死亡率及肺湿重/干重比显著高于对照组(P<0.05),HE染色可见大鼠肺间质充血、水肿,大量炎性细胞浸润,血清TNF-α含量及生物活性增高;rhTNFR:Fc+LPS组大鼠死亡率降低,肺组织病理损伤明显减轻,血清TNF-α生物活性显著低于LPS组(P<0.05)。结论:rhTNFR:Fc通过中和TNF-α,降低TNF-α生物活性,有效减轻LPS引起的大鼠急性肺损伤。

降钙素基因相关肽及IP3信号通路介导1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应保护作用

目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)及IP3信号通路在1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应(IPC)中的作用,探讨1型糖尿病大鼠心脏IPC保护作用减弱的机制。方法将80只造模成功的SD大鼠随机分为1型糖尿病4周(D-4w)组(n=40)和8周(D-8w)组(n=40),并进一步将两组各自随机分为模型对照(D-Cont)组、1型糖尿病缺血再灌注(IR)组、IPC组、CGRP(IPC+CGRP)组和IP3抑制剂wortmanin(IPC+WMN)组5个亚组;另取16只大鼠作为正常对照(N-Cont)组。采用Langendorff方法建立离体心脏体外灌流模型,灌流期间外源性给予CGRP或wortmanin(WMN)。采用多道生物信号分析系统监测各组大鼠离体心脏左室功能,记录冠脉流量,ELISA法检测大鼠血清CGRP含量;生化法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的活性;NBT染色法测量心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果与N-Cont组大鼠相比,1型糖尿病大鼠血清CGRP含量随着时间进行性降低,且心脏基础左心功能降低,冠脉流出液中LDH和CK活性增加,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数增加(P<0.05);IR组与D-Cont组相比,左心功能更为降低,心肌损伤明显;IPC可改善D-4w IR心肌损伤情况,而对D-8w IR损伤无保护作用;IPC+CGRP组与IPC组相比,其左心功能明显改善;IPC+WMN组可阻断IPC对D-4w组大鼠心肌保护作用。结论CGRP及IP3信号通路参与1型糖尿病大鼠离体心脏的IPC保护作用。

线粒体通透性转换孔道在脂多糖致H9c2心肌细胞凋亡中的作用

目的·观察脂多糖(LPS)刺激下心肌细胞线粒体通透性转换孔道(mPTP)开放状态、心肌细胞凋亡情况及环孢霉素A(CsA)和兰尼定(Rya)联合应用的抗凋亡作用。方法·将H9c2细胞分为对照组、LPS组、LPS+CsA组、LPS+Rya组、LPS+CsA+Rya组;分别检测mPTP的开放状态、细胞内及线粒体Ca^(2+)浓度、线粒体膜电位(ΔΦm),以及反映细胞凋亡的Hoechst染色,Bax、Bcl-2的mRNA表达,caspase 3活性,Bax及Bcl-2蛋白水平的变化。结果·LPS作用心肌细胞24 h后mPTP开放,可使细胞质Ca^(2+)荧光强度增高298%,线粒体Ca^(2+)荧光强度增高231%,约1/3细胞凋亡,caspase 3活性增加了约1倍,上调Bax mRNA表达(P=0.008);联合使用CsA与Rya可有效阻断由LPS引起的心肌细胞mPTP开放,降低LPS所致的细胞质和线粒体的Ca^(2+)浓度增高的幅度,维持正常的ΔΦm,减轻LPS所致的细胞凋亡,抑制caspase 3活性,可显著抑制LPS对心肌细胞Bax mRNA表达的上调作用。结论·mPTP在LPS所致心肌细胞凋亡中发挥重要作用,而CsA与Rya联合应用可有效缓解LPS所致的心肌细胞凋亡。

心脏起搏器自动阈值夺获功能对使用寿命的影响

目的对具有自动阈值夺获功能的VVI型心脏起搏器与不具有自动阈值夺获功能的VVI型心脏起搏器在耗电量上的粗略比较。方法对13例具备自动阈值夺获功能的VVI型起搏器和64例不具备自动阈值夺获功能的VVI型起搏器的起搏参数、工作参数等方面的比较分析,以耗电量粗略计算前者能相对延长其使用寿命。结果具备自动阈值夺获功能的VVI型起搏器比不具备自动阈值夺获功能的VVI型起搏器使用寿命延长约87.9%(P<0.01)。结论具备自动阈值夺获功能的VVI型起搏器既能保证起搏的安全,又能大大节省电能,从而明显延长起搏器的使用寿命。

创伤性休克大鼠肝脑组织TNF-α的表达

目的建立创伤性休克大鼠模型,比较肿瘤坏死因子α(TNF-α)在创伤性休克大鼠各脏器的表达,为临床治疗提供依据。方法采用股骨创伤法建立大鼠创伤性休克模型,用免疫组化和RT-PCR方法检测大鼠各脏器TNF-α和核转录因子(NF-κB)p65表达的情况。结果各脏器TNF-α表达水平在创伤后有显著差异。结论TNF-α在创伤性休克发生发展中起重要作用,但在不同脏器存在着显著差异,在临床上应具体分析。

生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化

目的建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法。方法将生物素标记的sRNAU6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测。从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNAU6与miRNA145的含量。结果将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10μmol/L时达到最强。采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5μgRNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞。结论成功建立并优化了sRNA检测新方法 ,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能。

脂联素和脂联素受体1在不同病程糖尿病大鼠心肌缺血预适应中的变化

目的:探讨脂联素(APN)和脂联素受体1(Ad-R1)在不同病程糖尿病大鼠离体心肌缺血再灌注(IR)损伤和缺血预适应(IPC)保护作用中的变化。方法:分别用链脲佐菌素和高脂饮食+链脲佐菌素制备1型糖尿病(TIDM)和2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,并分别分为4周和8周2个病程组,采用Langendorff法建立离体心脏灌流模型,每组进一步分为正常对照(Con)组、IR组和IPC组3个亚组,检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)活性,采用ELISA法检测血清和心肌组织APN水平,采用Western blot法检测心肌组织Ad-R1蛋白表达,测定心肌梗死面积,透射电镜观察心室乳头肌超微结构,并比较上述指标在各组中的差异。结果:与对应的IR组相比,4周时IPC组LDH和CK活性显著降低(P<0.01),心肌梗死区域面积明显减少,而8周时DM组的各项检测指标无明显改变。血清APN含量在糖尿病大鼠减低,尤以T2DM降低为甚(P<0.05),正常大鼠心肌组织APN含量和Ad-R1表达水平在Con、IR和IPC组之间无差异;T1DM模型大鼠心肌组织APN含量在各亚组间无变化,4周和8周心肌组织Ad-R1表达量IR组较Con组明显增加(P<0.01),IPC组较对应IR组Ad-R1表达量降低(P<0.01);T2DM模型大鼠心肌组织APN含量4周和8周的IR组较Con组明显减少(P<0.05),IPC组较对应IR组,4周组的APN显著升高,8周组无显著差异,心肌Ad-R1表达量4周和8周的IR组较Con组明显增加(P<0.05),4周的IPC组较对应IR组Ad-R1表达量降低(P<0.05),8周的IPC组较对应IR组Ad-R1表达量无改变。结论:T1DM和T2DM模型大鼠4周组存在IPC保护作用,8周组IPC保护作用基本消失;心肌组织APN和Ad-R1可能参与了T2DM大鼠的IPC保护作用。

创伤性休克大鼠多脏器TNF-α表达的变化及意义

目的研究TNF-α在创伤性休克大鼠多脏器中的表达变化，探讨TNF-α在创伤性休克发生发展过程中的意义。方法取健康成年SD大鼠56只，体质量200～300g，雌雄各半，随机分为对照组，复苏组和休克1、2、4、8、24h组，每组8只，观察各组的死亡率，分别采用RT-PCR法及免疫组化法测定各组肝、脑组织的TNF-αmRNA和肝、脑、肺、肾组织的TNF-α蛋白表达水平。结果对照组和复苏组大鼠均无死亡，休克1h组死亡率为1／8，2h和4h组死亡率为2／8，8h组死亡率为4／8，24h组死亡率为5／8；TNF-αmRNA表达在休克后2h明显升高，肝组织TNF-αmRNA表达水平高于脑组织（p〈0．05）；肺、肝、肾组织的TNF-α蛋白表达在休克1h后即开始升高（P〈0．05），脑组织TNF-α蛋白表达水平较低，趋势不明显，但复苏组的肝、脑组织的TNF-αmRNA和蛋白表达较对照组无明显升高（P〉0．05）。结论创伤性休克早期以低血容量表现为主，主要不是由TNF-α介导的；而后期则与TNF-α水平升高相关。

1型和2型糖尿病大鼠肺组织脂联素受体的表达

目的观察1型糖尿病(1-DM)和2型糖尿病(2-DM)大鼠肺组织脂联素受体(AdipoR1和AdipoR2)的表达情况。方法 SD大鼠随机分为1-DM组(一次性腹腔内注射高剂量链脲佐菌素建模,普通饮食,8周后处死)、72 h组(一次性腹腔内注射高剂量链脲佐菌素建模,普通饮食,72 h后处死)、2-DM组(高脂饮食配合一次性腹腔内注射低剂量链脲佐菌素建模,8周后处死)和对照组(一次性腹腔内注射等容量枸橼酸缓冲液,普通饮食)。分别检测血清胰岛素和脂联素水平以及肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及AdipoR1和AdipoR2的表达,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与对照组比较,1-DM组和2-DM组血清脂联素水平均显著降低(P<0.05);2-DM组血清脂联素水平显著低于1-DM组(P<0.05);1-DM组和2-DM组肺组织AdipoR1表达及SOD活性均显著低于对照组,而72 h组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);1-DM组和2-DM组肺组织有基膜增厚、血管堵塞等病理学改变。结论肺组织脂联素受体表达以AdipoR1为主,高血糖可引起肺损伤、肺AdipoR1表达及SOD活性降低。

低剂量阿糖胞苷对Jurkat T淋巴细胞CD147表达的影响

目的:探讨低剂量阿糖胞苷(Ara-C)对Jurkat T淋巴细胞CD147表达的影响。方法:实验细胞分6组,为对照组和1、5、10、20、30 ng/ml Ara-C组。采用RT-PCR、Western blot和流式细胞术分别检测Ara-C干预前后Jurkat细胞CD147基因和蛋白的表达。用倒置显微镜观察、比较Ara-C干预前后Jurkat细胞集落形成情况。结果:Ara-C各浓度组中细胞CD147 mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组(P<0.01),Ara-C干预组细胞集落形成明显增加。结论:低剂量Ara-C可上调Jurkat T淋巴细胞CD147的表达,增强细胞间黏附力。

缺血预适应对高血脂大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的研究缺血预适应对高血脂大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法SD大鼠,造模高血脂后随机分成缺血预适应组(IP),缺血-再灌注组(I/R)以及对照组,每组8只。取缺氧前及复灌后冠脉流出液测肌酸激酶(CK)活性,心肌组织测脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、氧自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽转移酶(GSH-Px),线粒体测ATP酶活性。结果IPC组较I/R组冠脉流出液中的CK生成减少,MDA明显降低,SOD、GSH-Px活性增强,Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性明显升高。结论心肌缺血预适应对高血脂大鼠心肌缺血-再灌注的损伤同样有保护作用。

芪加合剂治疗实验性系膜增殖性肾炎的研究

目的探讨芪加合剂对新西兰大白鼠系膜增殖性肾小球肾炎(MesPGN)模型24h尿蛋白、肾功能及血脂的影响及其治疗MesPGN的机制。方法采用吴氏法建立兔的MesPGN模型,再通过灌服芪加合剂,观察MesPGN模型24h尿蛋白,肾功能,血脂以及肾脏形态学的变化。结果兔MesPGN模型24h尿蛋白定量较正常组明显增高,脂质代谢异常,肾组织病理改变明显。芪加合剂能明显改善兔MesPGN模型的尿蛋白及脂代谢异常,减轻肾脏的病理损害。结论芪加合剂对系膜增殖性肾小球肾炎模型的治疗机制可能与纠正MesPGN模型脂代谢异常有关。

脂多糖对人正常肝细胞株L02损伤的实验研究

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人正常肝细胞株L02的损伤作用及其机制。方法采用流式细胞术分别检测LPS诱导L02细胞凋亡和线粒体膜电位变化的作用,测定L02细胞膜上CD14、Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体2(TLR2)的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;生化法测定细胞培养上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果10、20、40、80mg/L剂量的LPS作用于L02细胞后0、6、12、24和36h,细胞的凋亡率和线粒体膜电位无显著性差异(P>0.05),各组上清液中ALT、AST、LDH和TNF-α含量亦无明显变化(P>0.05),L02细胞膜上LPS受体CD14、TLR4、TLR2表达分别为(2.28±0.60)%,(1.04±0.80)%,(2.07±0.50)%。结论L02细胞膜上LPS受体CD14、TLR4、TLR2表达水平低,致使LPS不能直接引起L02细胞损伤。