携带bla_(NDM-1)基因的ST22型肺炎克雷伯菌引起新生儿医院感染

目的探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床株的分子流行病学特征,为医院感染的控制和预防提供指导。方法 3株对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌临床菌株分离自山东某医院新生儿病房患儿的抽吸痰液和血液标本;用Vitek 2 Compact系统进行细菌鉴定和药敏试验;改良Hodge试验检测菌株是否产碳青霉烯酶;PCR检测菌株携带的碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaBIC、blaOXA-48、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaAIM、blaGIM、blaSIM和blaDIM)、β-内酰胺酶基因(blaCTX-M、blaSHV、blaTEM和blaOXA-1)、Amp C酶基因(blaMOX、blaCIT、blaDHA、blaACC和blaEBC)、喹诺酮耐药相关基因(qnr A、qnr B、qnr S、oqx A和oqx B)和磷霉素耐药基因(fos A3),测序确认其基因型;用多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳分析细菌的同源性;质粒接合和Southern杂交试验分析质粒的特性,并进行质粒不相容群检测。结果 3株肺炎克雷伯菌Hodge试验呈阳性,且对大部分抗菌药物耐药,均携带blaNDM-1、blaTEM-1、fos A3、oqx A和oqx B基因。脉冲场凝胶电泳显示3株菌的带型完全一致,属于同一克隆,而且多位点序列分型也都是ST22,提示存在流行。质粒接合和Southern杂交试验表明供体菌携带blaNDM-1质粒(p TA-NDM)可通过接合方式转移到受体菌,且质粒大小约220 000 bp,不相容群分型属于Inc A/C型质粒。结论同时携带blaNDM-1、blaTEM-1、fos A3、oqx A和oqx B基因的ST22型肺炎克雷伯菌在新生儿病房中的流行属国内外首次报道,应引起重视。

首例同时携带bla_(NDM-1)、bla_(KPC-2)、bla_(DHA-1)、bla_(TEM-1)和bla_(OXA-1)基因的ST11肺炎克雷伯菌临床株

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药机制,为医院感染控制提供依据。方法法国VITEK-2Compact对细菌进行鉴定和药敏试验;改良Hodge试验初筛肺炎克雷伯菌是否产碳青霉烯酶;多重PCR对菌株进行β-内酰胺类耐药基因和16SrRNA甲基化酶基因的检测,测序确认基因型;多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳实验进行细菌的同源性分析。结果 5株肺炎克雷伯菌多位点序列分型是ST11型,其中4株都同时携带有blaKPC-2、blaTEM-1、blaCTXG9和16SrRNA甲基化酶rmtB基因,另外1株(HD03)肺炎克雷伯菌同时携带blaNDM-1、blaKPC-2、blaDHA-1、blaTEM-1和blaOXA-1基因。脉冲场凝胶电泳显示,除了HD04菌株多一条带外,其余带型5株菌完全一致。结论经检索,肺炎克雷伯菌同时携带blaNDM-1、blaKPC-2、blaDHA-1、blaTEM-1和blaOXA-1基因为国内外首次报道,且该感染者无国外流行病学史。因此,要进一步加强对碳青霉烯类耐药的肠杆菌的医院感染控制和预防。

1例3-甲基戊烯二酸尿症Ⅰ型患儿AUH基因突变检测及分析

目的观察并分析1例3-甲基戊烯二酸尿症Ⅰ型患儿的AUH基因突变情况。方法对新生儿疾病筛查发现的1例3-甲基戊烯二酸尿症Ⅰ型患儿AUH基因的10个外显子进行基因捕获及第二代高通量测序,确定相关突变位点,并对患儿父母采用Sanger测序进行验证。采用Mutation Taster和PolyPhen-2软件、CRYP-SKIP软件、人类剪接查找服务器预测突变位点致病性和突变可能导致的蛋白质结构和功能的变化。结果高通量测序检出患儿AUH基因c.894+5G>A剪接突变和第7外显子c.677G>A错义突变,Sanger测序显示c.894+5G>A剪接突变来自母亲,c.677G>A错义突变来自父亲。经生物信息学软件预测c.894+5G>A剪接突变可能导致外显子跳跃、剪接位点破坏而致病,c.677G>A错义突变可能致病,此两种突变可能导致蛋白质结构和功能变化。结论本例3-甲基戊烯二酸尿症Ⅰ型患儿AUH基因存在c.894+5G>A和c.677G>A复合杂合突变,其中c.894+5G>A为新发现的突变;此2种突变很有可能致病,为该患儿的遗传学病因。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因检测

目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因携带,以减少耐药菌的产生。方法对2009年1月-2012年2月耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分离株进行筛选,鉴定和药敏采用VITEK-2Compact系统进行,引物特异性PCR法分别检测分离株的碳青霉烯酶耐药基因、ESBLs基因和AmpC等相关耐药基因的存在。结果共分离出6株碳青霉烯耐药或中介的肺炎克雷伯菌,其对青霉素类、青霉素/青霉素酶抑制剂、氨曲南、头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类和碳青霉烯等抗菌药物表现为较高程度的耐药,但对替加环素有较高的敏感性;每一株菌均携带超广谱β-内酰胺酶基因,可检测到3-5个耐药基因;其中,1株菌经测序证实为携带blaIMP-4,并同时携带blaSHV、blaTEM和blaCTXG9基因;5株菌扩增到Ⅰ类整合子（intⅠ）;blaNDM及其他碳青霉烯类耐药基因筛查均为阴性。结论临床分离的碳青霉烯耐药或中介肺炎克雷伯菌的耐药表型和基因型基本相符,因而推测广泛耐药的肺炎克雷伯菌的主要类耐药机制与菌株同时携带产ESBLs、AmpC酶、碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子（intⅠ）有关。

产NDM-l肺炎克雷伯菌引起的新生儿感染及其同源性检测

目的调查对碳青霉烯酶类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌的分子机制及其同源性,为新生儿感染的预防和监测提供参考依据。方法 5株肺炎克雷伯菌分离自2015年1-2月新生儿病房患儿吸痰标本;用法国生物梅里埃公司VITEK-2Compact系统对细菌进行鉴定和药敏;菌株产碳青霉烯酶的筛选是采用改良Hodge和金属酶试验;PCR和产物测序法检测以及确认菌株携带的超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶和碳青霉烯酶耐药基因;脉冲场凝胶电泳分析细菌的同源性;质粒接合试验分析质粒的特性。结果除了氨曲南以外,5株肺炎克雷伯菌对二、三代头孢菌素和碳青霉烯类抗菌药物均耐药,且Hodge试验和金属酶试验均呈现阳性;每一株菌均携带blaNDM-1、blaCMY-6和blaDHA-1基因;脉冲场凝胶电泳显示5株菌的带型完全相同;质粒接合试验显示供体菌将携带blaNDM-1的质粒成功转移到受体菌。结论经检索,携带blaNDM-1、blaCMY-6和blaDHA-1基因的肺炎克雷伯菌在新生儿中的聚集流行为国际上首次报道,应加强医院感染的监测、预防和控制。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的β-内酰胺酶耐药基因的研究

目的了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌（CRE）中β-内酰胺酶耐药基因的携带情况。方法使用VITEK 2 Compact对细菌进行鉴定和药敏试验;改良Hodge试验对从住院患者中收集的10株碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌进行碳青霉烯酶初筛检测;多重PCR法进行β-内酰胺类耐药基因的检测,并对阳性基因进行测序确认。结果10株菌对临床常用的β-内酰胺类抗生素均耐药,对阿米卡星的耐药率为40%,对其他抗生素耐药率高达70%~90%;改良Hodge试验阳性率为90%;经PCR检测和测序确认,10株菌中有3株菌携带blaKPC-2基因,2株菌携带blaNDM-1基因,另外2株同时携带blaKPC-2基因和blaNDM-1基因。结论本地区对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌的耐药机制复杂,以携带blaKPC-2基因和blaNDM-1基因为主,应加强医院感染的控制和预防。

携带blaKPC-2基因的肺炎克雷伯菌ST789型引起医院感染暴发

目的探讨医院耐碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分子流行病学,为医院感染的预防和控制提供指导。方法收集医院2013年2-4月分离的对厄他培南耐药11株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌;细菌的鉴定和药敏试验使用法国生物梅里埃公司VITEK-2Compact系统;菌株是否产碳青霉烯酶按改良Hodge试验操作,其携带的β-内酰胺类耐药基则通过多重PCR进行检测,并经测序确认基因型;通过多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳试验技术对细菌的同源性进行分析。结果分离的11株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌多位点序列分型,分别是ST789型7株、ST437株型2和ST258型1株;经测序确认,10株携带有blaKPC-2基因;脉冲场凝胶电泳显示,3种带型A、B和C,7株ST789型肺炎克雷伯菌的带型一致;4株耐碳青霉烯类大肠埃希菌中有2株携带blaKPC-2基因,多位点序列分型均是ST131型;每一株菌可携带不同数目的超广谱β-内酰胺(blaSHV、blaTEM-1和blaCTX)基因。结论医院内存在携带blaKPC-2基因肺炎克雷伯菌引起的医院感染暴发流行,要加强消毒隔离,防止进一步播散。

新生儿筛查3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症可疑患儿临床及基因突变分析

目的了解新生儿疾病筛查中疑诊为3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症(MCCD)患儿的临床表现;分析3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶(MCC)基因突变类型。方法2015年8月至2020年3月将在青岛市新生儿疾病筛查中心接受新生儿筛查,并疑诊为MCCD的11例患儿(男9例,女2例)纳入本研究,对所有患儿的生长发育等随访资料进行回顾分析;对部分可疑患儿进行MCC基因突变及尿气相色谱-质谱(GS/MS)检测,通过分析结果,预测青岛地区MCC基因突变谱。结果(1)11例可疑患儿均无MCCD相关临床表现。11例可疑患儿中1例确诊为MCCD,有3例为母源性MCCD患儿,1例患儿排除MCCD。(2)本次共检出10种基因突变类型,其中MCCC1突变8种,分别为c.639+2T>A、c.1225C>T/p.R409X、c.945T>C/p.Y315Y、c.626G>T/p.G209V、c.863A>G/p.E288G、c.227228delTG/p.V76Gfs*4、c.1690delA和c.1075C>A。MCCC2突变2种,为c.281+1G>A和c.592C>T/p.Q198*。经预测,本次检出的三种新突变c.626G>T c.1075C>A和c.281+1G>A可能致病。结论11例可疑患儿均无MCCD相关临床表现,本研究MCCC1突变多见,c.639+2T>A突变可能为热点突变。