结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

目的建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45 min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10~3菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。

米面制品中微生物的活但不可培养状态检测研究进展

米面制品是我国主要的食品,含有丰富的营养物质与充足的水分,适合微生物生长繁殖。腐败微生物会引起食品货架期缩短或在保质期内腐败变质,而致病微生物的存在则可引起食物中毒事件。近年来对食品微生物的快速检测技术主要包括传统法与核酸扩增法,其中聚合酶螺旋反应(PSR)技术具有较高的灵敏度、特异性与重现性,具有较大应用前景。此外,活但不可培养状态(VBNC)因具有不可培养特性,会造成微生物检测"金标准"培养法获得"假阴性"结果,是食品微生物安全中的重要威胁。通过研究分析污染米面制品的主要微生物和相应快速检测方法,以及活但不可培养状态的生物学特性和检测方法,为进一步实现对米面制品中微生物安全控制提供重要依据。