水飞蓟素抑制鼻咽癌模型大鼠鼻黏膜组织炎症及损伤

目的:通过建立鼻咽癌(NPC)大鼠模型,观察水飞蓟素(SIL)对NPC大鼠鼻黏膜损伤的保护作用及机制。方法:通过腋部皮下注射诱癌剂二亚硝基哌嗪(DNP)15 mg/kg和促癌剂佛波醇酯100 mg/kg构建NPC大鼠模型。建模成功后将大鼠随机分为模型组、SIL-L(50 mg/kg)、SIL-M(100 mg/kg)、SIL-H(200 mg/kg)剂量组、SIL(200 mg/kg)+AG-490(2 mg/kg)组,每组10只。另选10只大鼠作为空白对照组。各组分别给予相应药物腹腔注射,空白对照组给予生理盐水。连续治疗90 d后,ELISA法检测鼻腔灌洗液IL-6、IL-10、IL-1β水平;HE染色观察鼻腔黏膜组织病理变化,TUNEL法观察细胞凋亡;免疫组化检测UBAP1表达;Western blot检测大鼠鼻黏膜组织中IL-6、STAT3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠鼻黏膜组织病理变化明显,癌变细胞明显增加;细胞凋亡率、鼻黏膜组织中IL-6、STAT3蛋白表达及鼻腔灌洗液中IL-6、IL-1β水平明显升高,IL-10水平显著降低,鼻黏膜组织中UBAP1表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,SIL各剂量组大鼠鼻黏膜组织病理变化明显减轻,癌变细胞减少;细胞凋亡率、鼻黏膜组织中IL-6、STAT3蛋白表达及鼻腔灌洗液中IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-10水平显著升高,鼻黏膜组织中UBAP1表达显著回升,且呈剂量效应关系(P<0.05);SIL+AG-490组大鼠上述各观察指标均明显优于SIL各剂量组(P<0.05)。结论:SIL可减轻NPC大鼠模型鼻黏膜组织炎症及损伤,其机制可能与IL-6/STAT3信号通路抑制有关。

下调LncRNA KCNQ1OT1对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1(KCNQ1OT1)对喉癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响和作用机制。方法细胞按转染质粒不同分组为:siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组;mimics NC组、miR-138 mimics组;KCNQ1OT1 wt+mimics NC组、KCNQ1OT1 wt+miR-138 mimics组、KCNQ1OT1 mut+mimics NC组、KCNQ1OT1 mut+miR-138 mimics组;pcDNA-3.1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、miR-138 mimics+pcDNA-3.1(+)组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-138 mimics组;FAK wt+mimics NC组、FAK wt+miR-138 mimics组、FAK mut+mimics NC组、FAK mut+miR-138 mimics组;Control组、Y15组、inhibitor NC组、miR-138 inhibitor组、miR-138 inhibitor+Y15组。分别采用CCK-8实验、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞增殖、侵袭和EMT能力。RT-qPCR检测KCNQ1OT1在Hep-2和HLEC细胞中的表达;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析KCNQ1OT1和miR-138之间的关系;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-138和FAK的关系;采用Western blot检测过表达及下调miR-138后Hep-2细胞中FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平;检测下调miR-138激活FAK/Src/MAPK信号通路对Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT的影响。结果Hep-2细胞中KCNQ1OT1表达量明显上升(P<0.01),miR-138表达量下降(P<0.05);敲低KCNQ1OT1抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。KCNQ1OT13′UTR靶向miR-138。敲低miR-138促进了Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-138则起到抑制作用。与过表达miR-138相比,同时过表达KCNQ1OT1和miR-138能部分逆转miR-138上调对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miR-138靶向FAK,敲低miR-138使FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平升高,过表达miR-138则降低FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平。沉默miR-138能够激活FAK/Src/MAPK通路促进细胞增殖、侵袭和EMT。结论下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-138/FAk/Src/MAPK轴抑制喉癌的增殖、侵袭和EMT。

黄连解毒汤对急性鼻窦炎模型大鼠鼻窦黏膜MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨黄连解毒汤对急性鼻窦炎模型大鼠鼻窦黏膜丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:69只SD大鼠随机取10只作为空白对照组,其余59只SD大鼠采用肺炎链球菌混合膨胀海绵鼻腔填塞方法建立急性鼻窦炎模型,造模成功后,将50只SD大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤低剂量组、黄连解毒汤中剂量组、黄连解毒汤高剂量组和阳性对照组,每组10只。各给药组大鼠采用鼻腔灌洗的方式给予相应药物,模型组和空白对照组大鼠给予等体积生理盐水鼻腔灌洗,连续给药7 d。给药结束后,观察大鼠体征并进行鼻窦炎症状评分;鼻腔灌洗液培养观察肺炎链球菌生长情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠鼻窦黏膜病理损伤;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中炎症因子(TNF-α、IL-6)含量;qRT-PCR检测鼻窦黏膜TNF-αmRNA、IL-6 mRNA水平;Western bloting检测鼻窦黏膜TNF-α、IL-6及C-Jun N末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38、NF-κB p65水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠鼻分泌物的细菌CFU值明显升高,鼻窦黏膜有明显的炎症反应,血清IL-6和TNF-α水平明显升高,鼻窦黏膜中JNK、ERK1/2、p38、NF-κB p65磷酸化水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤高、中、低剂量组和阳性对照组大鼠鼻分泌物的细菌CFU值明显降低,鼻窦黏膜的炎症反应明显改善,血清IL-6和TNF-α水平明显降低,鼻窦黏膜中JNK、ERK1/2、p38、NF-κB p65磷酸化水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连解毒汤对大鼠鼻窦黏膜具有剂量依赖的保护作用,其可能与抑制MAPK/NF-κB信号通路的激活,以剂量依赖的方式下调炎症因子的基因转录,从而减少炎症因子的产生有关。

草氨酸钠抑制细胞自噬对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的探讨草氨酸钠对鼻咽癌CNE2细胞放射后自噬的影响,以及对放射的增敏作用。方法用RMPI-1640培养液培养鼻咽癌CNE2细胞,MTT法检测CNE2细胞的生长情况,Western blotting法检测自噬蛋白LC3Ⅱ的表达。结果采用0 mmol·L^-1、10 mmol·L^-1、20 mmol·L^-1、40 mmol·L^-1的草氨酸钠处理CNE2细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为(0.37±0.04)%、(7.28±2.24)%、(16.54±4.16)%、(27.09±5.35)%,差异有统计学意义(P<0.01)。6 Gy X射线分别联合0 mmol·L^-1、10 mmol·L^-1、20 mmol·L^-1、40 mmol·L^-1草氨酸钠处理CNE2细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为(31.62±7.24)%、(38.32±10.43)%、(50.28±11.35)%、(62.12±13.16)%,差异有统计学意义(P<0.05);细胞克隆抑制率分别为(52.16±11.34)%、(60.27±11.83)%、(77.25±13.16)%、(86.42±13.74)%,差异有统计学意义(P<0.05)。LC3Ⅱ蛋白灰度扫描分析显示对照组、照射组、照射+10 mmol·L^-1草氨酸钠组、照射+20 mmol·L^-1草氨酸钠组、照射+40 mmol·L^-1草氨酸钠组细胞LC3Ⅱ表达的相对灰度值分别为(0.104±0.013)、(0.714±0.183)、(0.562±0.126)、(0.414±0.095)和(0.253±0.052),差异有统计学意义(P<0.05)。结论草氨酸钠可抑制放射引起的CNE2细胞自噬,增强CNE2细胞对放射的敏感性。

草氨酸钠抑制细胞自噬对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的草氨酸钠对鼻咽癌CNE2细胞放射后自噬的影响,以及对放射的增敏作用。方法鼻咽癌CNE2细胞培养于RMPI-1640培养液,MTT法检测CNE2细胞生长抑制。Western blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达。结果0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为(0.37±0.04)%、(7.28±2.24)%、(6.54±4.161)%、(27.09±5.35)%,各组间具有显著性差异(P均<0.01)。60 Gy X线照射联合0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为(31.62±7.24)%、(38.32±10.43)%、(50.28±11.35)%、(62.12±13.16)%,各组间具有显著性差异(P均<0.05),细胞克隆抑制率分别为(52.16±11.34)%、(60.27±11.83)%、(77.25±13.16)%、(86.42±13.74)%,各组间具有显著性差异(P均<0.05)。LC3Ⅱ蛋白灰度扫描分析显示对照细胞、射线处理细胞、射线+10 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+20 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+40 mmol/L草氨酸钠处理细胞LC3Ⅱ表达的相对灰度值分别0.104±0.013、0.714±0.183、0.562±0.126、0.414±0.095和0.253±0.052,各组间具有显著性差异(P均<0.05)。结论草氨酸钠抑制了放射引起的CNE2细胞自噬,增强了CNE2细胞对放射的敏感性。