目的优化利用单细胞聚团拟胚体(Spin-EB)培养诱导人多能干细胞造血分化的方式。方法采用Aggre Well TM800及V-96孔板两种培养板形成Spin-EB,在骨形成蛋白-4(BMP-4)、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(b FGF)组合培养基中诱...目的优化利用单细胞聚团拟胚体(Spin-EB)培养诱导人多能干细胞造血分化的方式。方法采用Aggre Well TM800及V-96孔板两种培养板形成Spin-EB,在骨形成蛋白-4(BMP-4)、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(b FGF)组合培养基中诱导造血分化,通过流式细胞术检测不同分化条件下CD34+细胞的比例;选取CD34+细胞比例高的拟胚体(EB)形成方式,并通过造血集落形成实验及红细胞分化培养实验,验证EB来源的CD34+细胞的造血集落形成和红系分化能力。结果流式分析结果显示,在Aggre Well TM800培养板中培养所得的EB,其CD34+造血干祖细胞比例为22.6%,V-96孔板按照形成EB的细胞数目,CD34+造血干祖细胞比例分别为:3000个细胞/孔为10.8%、6000个细胞/孔为1.28%、9000个细胞/孔为1.23%。胚胎干细胞(ESC)来源的CD34+细胞形成的集落与脐带血CD34+造血干祖细胞形成的集落形态相似,并且在红系分化培养体系中分化为CD71+CD235a+的红细胞。结论 V-96孔板组EB形成和CD34+分化效率与用于EB形成的细胞数有相关性,3000个细胞/孔条件相对最优。采用Aggre WellTM800培养板形成EB及EB的造血分化效率均高于各组V-96孔板分化效率。展开更多
文摘目的优化利用单细胞聚团拟胚体(Spin-EB)培养诱导人多能干细胞造血分化的方式。方法采用Aggre Well TM800及V-96孔板两种培养板形成Spin-EB,在骨形成蛋白-4(BMP-4)、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(b FGF)组合培养基中诱导造血分化,通过流式细胞术检测不同分化条件下CD34+细胞的比例;选取CD34+细胞比例高的拟胚体(EB)形成方式,并通过造血集落形成实验及红细胞分化培养实验,验证EB来源的CD34+细胞的造血集落形成和红系分化能力。结果流式分析结果显示,在Aggre Well TM800培养板中培养所得的EB,其CD34+造血干祖细胞比例为22.6%,V-96孔板按照形成EB的细胞数目,CD34+造血干祖细胞比例分别为:3000个细胞/孔为10.8%、6000个细胞/孔为1.28%、9000个细胞/孔为1.23%。胚胎干细胞(ESC)来源的CD34+细胞形成的集落与脐带血CD34+造血干祖细胞形成的集落形态相似,并且在红系分化培养体系中分化为CD71+CD235a+的红细胞。结论 V-96孔板组EB形成和CD34+分化效率与用于EB形成的细胞数有相关性,3000个细胞/孔条件相对最优。采用Aggre WellTM800培养板形成EB及EB的造血分化效率均高于各组V-96孔板分化效率。
