坏死性小肠结肠炎动物模型建立方法的改进与评价

目的目前新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)动物模型的构建方式仍不统一,本研究旨在明确更贴切临床NEC患儿实际情况的动物建模方式。方法随机将54只C57BL/6新生小鼠分为五组,依次为:对照组(Ctrl组,10只)、缺氧+人工喂养组(HF组,10只)、缺氧+人工喂养+冷刺激组(Cold组,12只)、缺氧+人工喂养+脂多糖(lipopdysaccharide,LPS)组(LPS组,11只)、缺氧+人工喂养+NEC肠内细菌组(Bac组,11只);分别建立NEC动物模型后,评估肠道组织病理、NEC相关肠上皮屏障蛋白(β-catenin、Occludin)和肠上皮细胞死亡标记性分子(CC3、RIPK1、PARP1)以及促炎细胞因子(IL-6、TNF-α、MCP1)的表达变化。结果按照肠道组织学Nadler评分≥2分视为NEC样肠道损伤。本研究除Ctrl组和HF组外,其余三组NEC造模的肠道组织病理均满足NEC样肠道损伤标准。与HF组(30%)、Cold组(83.3%)和LPS组(81.8%)相比,Bac组的建模成功率最高(100%),且造模期间Bac组小鼠的精神状况、腹胀腹泻、活动度等与NEC临床情况更为贴切,同时Bac组小鼠的肠道屏障蛋白β-catenin和Occludin表达下降,与Ctrl组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组和Bac组肠上皮细胞死亡标记性分子RIPK1和PARP1表达上调,炎症因子IL-6、TNF-α和MCP1表达水平增加,与Ctrl组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功比较了4种NEC动物模型的建立方法,明确了一种更贴近临床NEC患儿实际情况的动物建模方法,即"缺氧+人工喂养+NEC肠内细菌"。该造模方法成功率高,肠道组织病理损伤、肠道屏障蛋白表达和全身炎症反应与临床上NEC患儿特征相似度更高。

无创性神经刺激技术治疗脑卒中后吞咽障碍的临床研究进展

吞咽障碍是脑卒中的常见并发症之一,其发生率高达37%~78%。脑卒中后吞咽障碍患者常并发吸入性肺炎、营养不良和脱水等,导致患者的病死率显著增高^（[1-2]）。有研究表明,吞咽障碍是脑卒中患者死亡的独立危险因素之一^（[3]）。越来越多的研究报道,药物在促进受损的吞咽皮质功能恢复方面的作用甚小^（[4-5]）。因此,探索对脑卒中后吞咽障碍患者的非药物治疗尤为重要。

JMJD3在新生儿坏死性小肠结肠炎肠道组织中的表达变化

目的探讨组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域的蛋白3(Jumonji domain-containing protein D3,JMJD3)在新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)肠道组织中的表达情况。方法收集对照(先天性小肠闭锁)患儿及NEC患儿手术中切除的回肠组织进行RNA测序,筛选出差异基因。对差异基因进行组蛋白甲基化修饰酶相关基因聚类分析,筛选出目的基因赖氨酸特异性去甲基化酶6B[lysine(K)-specific demethylase 6B,KDM6B],并采用实时荧光定量聚合酶链反应扩大样本量进行验证。蛋白免疫印迹和免疫组织化学检测JMJD3以及其底物组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(trimethylation of histone H3 at lysine 27,H3K27me3)在肠道组织中的蛋白表达情况。组间比较根据数据分布特点采用t检验或Mann-Whitney U检验。结果RNA测序筛查出1481条差异基因,其中643条基因上调,838条基因下调。筛查NEC肠道组织中30种组蛋白甲基化修饰酶的表达情况,其中KDM6B在NEC样本中差异表达最显著[Log2(fold change)=0.769104,P=0.009009]。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示,与对照组相比,KDM6B在NEC肠道组织中高表达(P<0.05);蛋白免疫印迹和免疫组织化学结果显示JMJD3蛋白水平在NEC肠道组织中明显增高,H3K27me3蛋白水平在NEC肠道组织中降低。结论在NEC肠道组织中组蛋白去甲基化酶JMJD3高表达,H3K27me3低表达。JMJD3可能通过降低H3K27me3的表达水平调控NEC的发生发展。