一种高效克隆PCR产物的方法

利用TaqDNA聚合酶3′末端非模板依赖性加碱基的特性,制备了3′末端带T载体,与18种PCR产物进行连接反应。结果,阳性克隆率达40％—70％,而对照组小于10％。证明该方法是一种高效节省适用范围广的好方法。

高效感受态菌制备方法比较探索

目前感受态菌的制备方法有许多种,但对于不同的菌株,各种方法效果相差很大。本实验室参照有关文献~[4],比较了FTB法和Ca^(++)

大鼠肝癌细胞中失活的肿瘤相关基因的克隆和筛选

本文描述了运用减式杂交技术筛选只在大鼠正常肝细胞中特异性表达,而在肝癌细胞中失活的肿瘤相关基因的实验。实验中用肝癌细胞mRNA杂交筛减正常肝细胞cDNA得到探针A,用正常肝细胞mRNA杂交筛减肝癌细胞cDNA得到探针B。文章描述了用这两种探针对2500个重组子点杂交筛选得到的与探针A杂交强的cDNA克隆中的6个:TR1-6,并主要分析了其中两个在正常肝细胞中特异性表达的情况。实验中还建立了cDNA库,以用于体外转录mRNA及今后的全长cDNA筛选。

外源血小板衍生生长因子(PDGF)B链基因在CHO细胞的表达

本文总结应用DNA-磷酸钙盐沉淀的基因转移技术,把含人c-sis cDNA的质粒pSM-1,以单独转染或与pSV_2neo共转染方法转入CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞),经低血清或G_(418)筛选分离得到多个有PDGF表达的细胞株。其中PDGF高表达件——FB_6,细胞形态和生长行为明显改变,可在软琼脂培基上形成集落,细胞生长速率加快,能在低血清(2%)培液中长期传代,细胞的条件培液有刺激静止的NRK细胞(大鼠肾成纤维细胞)DNA合成的活力。RNA点杂交和Southern Blot显示FB_5细胞有??PDGF mRNA的高表达和人c-sis基因的整合,而且,在连续传代7个月后,FB_5细胞基因组中仍然有人c-sis基因存在,说明CHO细胞的不正常生长和转化是由于PDGF基因的稳定整合和高表达所引起。这一稳定转化株(FB_5)是进一步研究PDGF对细胞生长控制和转化功能的理想模型。

大鼠肝癌细胞中失活的肿瘤相关基因的克隆和筛选Ⅱ.肿瘤细胞恶性表型的逆转

构建表达性载体和大鼠正常肝表达性cDNA文库,利用该库转染经致癌剂诱变的大鼠肝癌细胞CBRH-7919,得到和分离出一系列表型性状逆转的克隆。生长曲线、软琼脂测试和裸鼠实验表明这些整合了外源cDNA的克隆原有生长表型的恶性程度均有显著的降低。

mRNA差别显示法在大鼠肾炎相关基因筛选和克隆中的应用

以系膜增殖性肾炎大鼠肾脏皮质为材料，对ｍＲＮＡ差别显示法进行了方法学的探索和改进。结果发现，影响实验结果的主要因素为引物浓度、退火温度、模板投放量等，并摸索出最佳反应参数，使每次反应可稳定地显示８０～１００个条带。用该方法初步获得部分基因片断，经克隆测序并与ＧｅｎｅＢａｎｋ比较证实为新基因。证明该方法是一个操作简单、实验周期短、重复性好、费用较低的有效的筛选和克隆基因的好方法，具有良好的发展前景。

上海交通大学闵行校区二期规划环境景观规划设计

在充分体现交大百年老校的文化积淀的基础上．本次规划着重突出功能性与生态性的结合，力图创造一个符合园林生态化原则，又充满校园文化特征的环境景观。