降低海马NO含量对凋亡相关因子的调节作用

目的探讨降低海马NO含量对凋亡相关因子的调节作用。方法体内和体外实验均分为4组:生理盐水对照组(NS组),海人酸致痫组(KA组),氨基胍预处理+海人酸组(AG+KA组)和氨基胍组(AG组)。采用免疫细胞化学法显示体外培养的海马神经元在不同处理因素作用24h和48h后bcl-2、bax的免疫反应性。采用Western blot法或半定量RT-PCR法检测各组大鼠造模后24h、48h时bcl-2、bax蛋白及Apaf-1mRNA的表达情况。结果在体外实验中,KA组bcl-2的免疫反应较NS组减弱而bax的免疫反应增强;AG+KA组bcl-2的免疫反应较KA组增强而bax的免疫反应减弱;AG组与NS组相比无明显差异。体内实验中,Western blot检测显示大鼠海马组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平呈负相关,其趋势与体外实验结果一致;半定量RT-PCR检测显示Apaf-1mRNA的含量在造模后24h和48h时间点,KA组明显高于NS组(P<0.05),而AG预处理则明显拮抗KA诱导的Apaf-1mRNA高表达。结论降低NO含量可以上调bcl-2蛋白的表达,下调bax和Apaf-1mRNA的表达。

一种可反映人精子DNA损伤严重程度的流式细胞术的建立及评价

目的:建立一种可反映人精子DNA损伤严重程度的流式细胞检测技术,并对其性能进行评价。方法:DNA损伤精子(单链DNA)与荧光染料吖啶橙(AO)结合后发红色荧光,而DNA完整精子(双链DNA)与AO结合后发绿色荧光。通过对1165例人精液样本正常精子群的红色荧光和绿色荧光峰图的分析,确定红色荧光的95%的平均上限和绿色荧光的5%的平均下限为十字象限门的红色荧光和绿色荧光界限,建立精子DNA碎片指数(DFI)的流式细胞检测技术,并分析其重复性和线性范围,确定正常生育男性的参考值。并对122例不育门诊男性的精子DFI、轻度DNA损伤(DFIm)和重度DNA损伤(DFIs)与精子浓度及活力的相关性进行分析。结果:利用十字象限门建立的流式细胞术,可以很明显地区分不同人群的精子DFI、DFIm和DFIs。高、中、低DFI的精液样本使用流式细胞术重复检测10次,所得CV均低于5%。精子DFI在8.93%~53.90%范围内有极好的相关性,相关系数r>0.99。基于274例正常生育男性的精子DFI结果,以95%上限确定正常参考值范围,正常生育男性精子DFI≤25.50%。精子DFI与精子浓度没有显著相关性,但与精子活动率和前向运动精子百分率呈显著负相关,且DFIs与精子活动率和前向运动精子百分率的相关性(r分别为-0.592和-0.543)明显高于DFIm(r分别为-0.323和-0.236)。精子活动率和前向运动精子百分率降低组的精子DFIs和DFIm均显著高于正常组,且两组DFIs的差异(P<0.01)显著高于DFIm(P<0.05)。结论:本研究建立的可反映精子DNA损伤严重程度的流式细胞术,相比于现有的存在一定缺陷的流式细胞术,更适合在临床常规工作中推广使用。重度精子DNA损伤指标DFIs可能与生殖的关系更为密切。

氨基胍对癫痫大鼠海马区bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的探讨氨基胍对癫痫大鼠海马区bcl-2、bax蛋白表达的影响。方法 32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组(NS+NS组),模型组(NS+KA组),氨基胍预处理组(AG+KA组)和单纯氨基胍组(AG+NS组),每组8只。4组大鼠造模后存活24 h、48 h,免疫组织化学法显示bcl-2、bax的蛋白表达情况。结果 bcl-2的免疫反应在NS组和AG组最强,AG+KA组次之,KA组最弱;bax的免疫反应在KA组最强,AG+KA组次之,NS组和AG组最弱。结论氨基胍预处理癫痫模型大鼠可以使bcl-2的表达增加、bax的表达降低。

流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化与质量控制初步研究

目的:对流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化和质量控制进行初步研究。方法:随机选取精液样本,观察酸变性时间,吖啶橙(AO)染色时间,精液样本冷藏、冷冻及反复冻融对精子DNA碎片指数(DFI)结果的影响。结果:随着酸变性时间延长,精子DFI逐渐增高,与酸变性30 s相比,酸变性至2 min时DFI即显著增加(P<0.05)。AO染色5、20、40、60、100、140 min后的精子DFI结果没有显著差异。精液样本于2~8℃冷藏后,精子DFI随冷藏时间延长显著增加,冷藏2 d后精子DFI即明显增加。精液样本可以直接于-20℃冷冻保存,且反复冻融3次对精子DFI结果影响不大,但DFI检测结果不够稳定。精液样本分装后冷冻,间隔1 d检测1次,共1个月,以此数据模拟室内质控,所得CV值为7.13%。结论:DFI检测中,确保酸变性时间的准确非常重要,最长不能超过1 min。染色时间或染色后放置时间对精子DFI结果没有显著影响。精子DFI检测最好为新鲜精液样本,如需冷藏,不能超过1 d。直接冷冻精液样本可以作为精子DFI检测的室内质控品。冷冻保护剂能否使冷冻精液样本更为稳定、室间质控品如何制备和运输将是未来要解决的关键问题。

两种精子分析仪的检测性能评估

目的探讨北昂(BEION S3)和瑞祺(CFT-9201)两种精子分析仪测试结果是否具有可比性,为检验结果互认提供依据。方法使用各自的质控品分别用两种精子分析仪重复分析10次,以比较质控品的有效性和仪器检测性能;分别用两种精子分析仪分析50例门诊患者的新鲜精液样本,并用配对t检验和Pearson或Spearman相关性分析比较两者的精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率(PR)及各项精子运动参数的差异及相关性。结果瑞祺精子分析仪和北昂精子分析仪分析瑞祺质控品[标称值为(22±3)×10^6/ml]的结果分别为(21.79±1.31)×10^6/ml和(24.41±2.90)×10^6/ml,两者有显著差异(P=0.03);而瑞祺精子分析仪和北昂精子分析仪分析北昂质控品[标称值为(52±2.07)×10^6/ml]的结果分别为(46.1±0.74)×10^6/ml和(45.34±2.53)×10^6/ml,两者没有显著差异,但均明显低于标称值。瑞祺精子分析仪和北昂精子分析仪分析50例精液样本的PR有显著差异,而精子浓度和活动率没有显著差异;精子运动参数除了直线速率(VSL)没有显著差异外,其余均有显著性差异;除直线性(LIN)和鞭打频率(BCF)没有显著相关性外,精液常规参数和其余精子运动参数均呈显著正相关。另外,北昂精子分析仪的几乎所有精液常规参数和精子运动参数的标准差和变异系数均高于瑞祺精子分析仪。结论不同精子分析仪厂家提供的质控品质量非常重要,应有标准化的机构认证为好;不同精子分析仪间存在系统误差,仪器参数设置需要标准化。而且,带有相差显微镜的精子分析仪性能要好于普通光学显微镜的精子分析仪。

禁欲时间对精子DNA损伤、形态及精液常规分析参数的影响

目的探讨不同禁欲时间对精子DNA损伤、形态及精液常规分析参数的影响。方法收集从2018年9月至2021年2月到东南大学附属中大医院生殖医学中心就诊的男性患者精液样本1128例。采用CFT-9201型计算机辅助精子分析系统进行精液常规分析,包括精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率(PR)等主要参数;采用Diff-Quik染色法进行精子形态分析;采用精子染色质结构分析法(SCSA)检测精子DNA碎片指数(DFI)。结果1128例患者的禁欲时间为0~30天,中位数为3.0[3.0,5.0];仅精子活动率呈正态分布(P=0.117),其余参数均呈非正态分布(P<0.01)。患者禁欲时间与精液量(r=0.21,P<0.01)、精子浓度(r=0.098,P<0.01)和精子DFI(r=0.068,P<0.05)均呈显著正相关,而与PR、精子活动率和正常形态精子百分率均呈负相关,但均无显著相关性(P>0.05)。精子DFI与精子浓度没有显著相关性(P>0.05),但与PR、精子活动率和正常形态精子百分率均呈显著负相关(P<0.01)。结论随着禁欲时间的延长,精液量和精子浓度均增加,DFI也随之上升,故适当缩短禁欲时间可以减少精子DNA碎片的产生。临床医生在向患者解释精液分析结果时应考虑禁欲时间的影响。

重组人红细胞生成素对大鼠癫痫持续状态诱导的神经元凋亡的保护机制

目的探讨重组人红细胞生成素(rHuEPO)对大鼠癫痫持续状态(SE)诱导的神经元凋亡的保护机制。方法 SD大鼠60只随机均分为五组:A组为空白对照;其余四组采用海人酸(KA)点燃大鼠SE模型后,B组作为模型对照,C组用rHuEPO处理,D组用rHuEPO和LY294002处理,E组用二甲基亚砜(LY294002的溶剂)处理。Western blot法检测Akt、p-Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达;定量RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达。结果 C组Bcl-2mRNA表达量高于B组(P<0.05),D组p-Akt蛋白表达低于C组(P<0.05)。结论 rHuEPO对SD大鼠SE诱导的海马神经元具有保护作用;其机制可能是通过PI3K/Akt途径对线粒体凋亡途径相关调控因子Bcl-2和Bax进行调控,进而介导线粒体凋亡途径,抑制细胞凋亡。